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法律状态
2019-04-02
专利权人的姓名或者名称、地址的变更 IPC(主分类):A01H4/00 变更前: 变更后: 申请日:20151230
专利权人的姓名或者名称、地址的变更
2019-03-26
专利权人的姓名或者名称、地址的变更 IPC(主分类):A01H4/00 变更前: 变更后: 申请日:20151230
专利权人的姓名或者名称、地址的变更
2017-10-20
授权
授权
2017-08-18
专利申请权的转移 IPC(主分类):A01H4/00 登记生效日:20170728 变更前: 变更后: 申请日:20151230
专利申请权、专利权的转移
2016-04-20
实质审查的生效 IPC(主分类):A01H4/00 申请日:20151230
实质审查的生效
2016-03-23
公开
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技术领域
本发明涉及生物组培育苗技术领域,具体涉及一种山红叶黄八丈的组培快繁方 法。
背景技术
山红叶黄八丈,其拉丁名为Acerpalmatum‘Ki-hachijo’,其植株健壮,叶子较 大,呈鲜亮的深绿色,秋天叶子颜色非常特别,夺人眼球的金黄色稍带有玫瑰红,随 后变为浅橙色和红色的混合色,可孤植或群植,其植株健壮,生长旺盛。虽然该品种 目前没有广泛栽植,但它将会成为一个很受欢迎的园林景观树种,极具观赏价值与经 济价值。目前,山红叶黄八丈主要通过播种和嫁接繁殖,但出芽率和成活率都不是很 高,繁殖系数低,繁殖周期长,场地要求大,人工成本较高,远不能满足国内对种苗 的需求。
因此,如何提高其生产效率,缩短培育时间,降低人工成本,保持优良树种的 遗传稳定性,提高其繁殖系数成为目前亟待解决的问题。
发明内容
有鉴于此,本申请提供一种山红叶黄八丈的组培快繁方法,所用培养基配方简 单,组培流程简便,培养时间短,增殖频率高,幼苗整齐,便于后期统一的移栽和 种植管理,降低了人工成本,能保证所长出的幼苗植株在形状上的一致性,易于操 作,可进行产业化生产。
为解决以上技术问题,本发明提供的技术方案是一种山红叶黄八丈的组培快繁 方法,包括以下步骤:
(1)外植体选取及灭菌:切取山红叶黄八丈带芽茎段,采用酒精和升汞灭菌处 理后,得外植体;
(2)启动培养:将步骤(1)所得外植体接种到启动培养基中培养3—5周,腋 芽生成,所述启动培养基的组成为:MS基本培养基,补充0.01—0.08mg/LIAA、 0.1—0.6mg/LKT、10—50g/L蔗糖、1—8g/L琼脂;
(3)增殖培养:切取步骤(2)所得腋芽,接种到增殖培养基中培养6—8周, 丛生芽生成,所述增殖培养基的组成为:B5基本培养基,补充0.05—0.25mg/LNAA、 0.05—0.25mg/LKT、0.1—1.0mg/L6-BA、100—800mg/LCH;
(4)生根培养:将步骤(3)所得丛生芽分离成单芽,接种到生根培养基中培 养3—4周即得山红叶黄八丈无菌苗,所述生根培养基的组成为:1/2B5基本培养基, 补充0.1—0.5mg/LIBA。
优选的,所述外植体选取及灭菌的具体操作为:选取山红叶黄八丈幼嫩枝条, 去掉叶片,切割成长度为2—3cm的带芽茎段,在无菌操作台上,用75%的酒精处 理8—15s,再用0.1%的升汞处理8—13min,无菌水冲洗4—6次,晾干即可。
优选的,所述启动培养基的组成为:MS基本培养基,补充0.015—0.03mg/LIAA、 0.15—0.4mg/LKT、20—40g/L蔗糖、2—6g/L琼脂。
更为优选的,所述启动培养基的组成为:MS基本培养基,补充0.02mg/LIAA、 0.2mg/LKT、30g/L蔗糖、5g/L琼脂。
优选的,所述增殖培养基的组成为:B5基本培养基,补充0.05—0.15mg/LNAA、 0.05—0.15mg/LKT、0.5—0.9mg/L6-BA、300—600mg/LCH。
更为优选的,所述增殖培养基的组成为:B5基本培养基,补充0.1mg/LNAA、 0.1mg/LKT、0.8mg/L6-BA、500mg/LCH。
优选的,所述生根培养基的组成为:1/2B5基本培养基,补充0.1—0.3mg/LIBA。
更为优选的,所述生根培养基的组成为:1/2B5基本培养基,补充0.2mg/LIBA。
优选的,所述启动培养基的pH值为6.3—6.7。
优选的,所述启动培养、增殖培养、生根培养步骤中,培养温度为24—28℃, 光照强度为2000—3000Lx,光照时间为14—18h/d。
本申请所述MS基本培养基具有较高的无机盐浓度,能够保证组织生长所需的 矿质营养,还能加速愈伤组织的生长,是较稳定的离子平衡溶液,它的硝酸盐含量 高,其养分的数量和比例合适,能满足植物细胞的营养和生理需要,因而适用范围 比较广,多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。
所述B5基本培养基具有较高的钾盐和盐酸硫胺素,但含有较低的铵,而铵这 一营养成分可能对有些培养基有抑制生长的作用;其养分的数量和比例合适,能满 足部分植物细胞的营养和生理需要,部分植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的 基本培养基。
所述1/2B5基本培养基是B5基本培养基大量母液在原有基础上减半,更低的 盐浓度有利于植物根系的生长。
所述IAA为吲哚乙酸,是一种植物生长激素,能够调节植物的生长,不仅能促 进生长,而且具有抑制生长和器官建成的作用。在细胞水平上,可刺激形成层细胞 分裂、刺激枝的细胞伸长、抑制根细胞生长、促进木质部、韧皮部细胞分化、促进 插条发根、调节愈伤组织的形态建成,因此可用作植物组织培养。
所述KT为氯吡脲,是一种具有细胞分裂素活性的苯脲类植物生长调节剂,其 生物活性较6-苄氨基嘌呤高10—100倍。它能够影响植物芽的发育、加速细胞有丝 分裂、促进细胞增大和分化,防止果实和花的脱落,也能作为植物组织培养的细胞 分裂素。
所述NAA为萘乙酸,是一种植物生长激素,在植物使用扦插法繁殖时使用, 也可用于植物组织培养,能促进细胞分裂与扩大,诱导形成不定根增加座果,防止 落果,改变雌、雄花比率等,可经叶片、树枝的嫩表皮,种子进入到植株内,随营 养流输导到全株。
所述6-BA为6-苄氨基腺嘌呤,是一种植物生长激素,其主要作用是促进芽的 形成,也可以诱导愈伤组织发生,促进细胞分裂,促进非分化组织分化,促进生物 体内物质的积累,促进侧芽发生,防止老化,是植物组织和细胞培养中的细胞分裂 素。
所述CH为水解乳蛋白,是一种多种氨基酸的混合物,其主要作用是促进胚状 体、不定芽的分化,有利于丛生芽的分化。可增强其他营养物质的吸收利用;亦可 利用氨基酸对微量元素的结合能力,增强微量元素的利用率。可促进植物吸收作用。
所述IBA为吲哚丁酸,是一种植物生长激素,主要用于插条生根,可诱导根原 体的形成,促进细胞分化和分裂,有利于新根生成和维管束系统的分化,促进插条 不定根的形成。
本申请技术方案提供了一种山红叶黄八丈的组培快繁方法,包括外植体的选取 及灭菌、启动培养、增殖培养、生根培养的步骤,通过对启动培养基、增殖培养基、 生根培养基的筛选,得到最佳的培养基组分和配比,采用前述植物生长激素配比形 成的培养基,配方简单,培养基成本低,配合各阶段的培养条件,得到的幼苗培养 时间短,培养流程简便,提高了山红叶黄八丈繁殖的效率,繁殖系数较高为2—3, 能快速获得遗传性状一致的山红叶黄八丈无菌苗,利用组织培养技术,进行外植体 培养,可不受季节气候变化、自然灾害的影响,可进行大规模的工业化育苗及深加 工。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案,下面结合具体实施例 对本发明作进一步的详细说明。
实施例1
本实施例所述的一种山红叶黄八丈的组培快繁方法,包括以下步骤:
(1)选取山红叶黄八丈幼嫩枝条,去掉叶片,切割成长度为2—3cm的带芽茎 段,在无菌操作台上,用75%的酒精处理8—15s,再用0.1%的升汞处理8—13min, 无菌水冲洗4—6次,晾干即可,得外植体;
(2)启动培养:将步骤(1)所得外植体接种到pH值为6.3—6.7的启动培养 基中培养3—5周,腋芽生成,所述启动培养基的组成为:MS基本培养基,补充 0.02mg/LIAA、0.2mg/LKT、30g/L蔗糖、5g/L琼脂;
(3)增殖培养:切取步骤(2)所得腋芽,接种到增殖培养基中培养6—8周, 丛生芽生成,所述增殖培养基的组成为:B5基本培养基,补充0.1mg/LNAA、0.1mg/L KT、0.8mg/L6-BA、500mg/LCH;
(4)生根培养:将步骤(3)所得丛生芽分离成单芽,接种到生根培养基中培 养3—4周即得山红叶黄八丈无菌苗,所述生根培养基的组成为:1/2B5基本培养基, 补充0.2mg/LIBA。
其中,所述启动培养、增殖培养、生根培养步骤中,培养温度为24—28℃,光 照强度为2000—3000Lx,光照时间为14—18h/d。
本实施例中,启动培养过程中,第一个腋芽生成的时间为24天,启动培养结束 时,腋芽伸长1—2cm;增殖培养过程中,第一个丛生芽生成的时间为47天,增殖 培养结束时,丛生芽株高1—3cm,增殖系数为2—3。
实施例2
本实施例所述的一种山红叶黄八丈的组培快繁方法,与实施例1的区别在于:
步骤(2)中,启动培养基的组成为:MS基本培养基,补充0.01mg/LIAA、0.1mg/L KT、10g/L蔗糖、1g/L琼脂;
步骤(3)中,增殖培养基的组成为:B5基本培养基,补充0.05mg/LNAA、 0.05mg/LKT、0.1mg/L6-BA、100mg/LCH;
步骤(4)中,生根培养基的组成为:1/2B5基本培养基,补充0.5mg/LIBA。
本实施例中,启动培养过程中,第一个腋芽生成的时间为31天,启动培养结束 时,腋芽伸长1—2cm;增殖培养过程中,第一个丛生芽生成的时间为68天,增殖 培养结束时,丛生芽株高1—3cm,增殖系数为2—3。
实施例3
本实施例所述的一种山红叶黄八丈的组培快繁方法,与实施例1的区别在于:
步骤(2)中,启动培养基的组成为:MS基本培养基,补充0.08mg/LIAA、0.6mg/L KT、50g/L蔗糖、8g/L琼脂;
步骤(3)中,增殖培养基的组成为:B5基本培养基,补充0.25mg/LNAA、 0.25mg/LKT、1.0mg/L6-BA、800mg/LCH;
步骤(4)中,生根培养基的组成为:1/2B5基本培养基,补充0.1mg/LIBA。
本实施例中,启动培养过程中,第一个腋芽生成的时间为40天,启动培养结束 时,腋芽伸长1—2cm;增殖培养过程中,第一个丛生芽生成的时间为64天,增殖 培养结束时,丛生芽株高1—3cm,增殖系数为2—3。
实施例4
本实施例所述的一种山红叶黄八丈的组培快繁方法,与实施例1的区别在于:
步骤(2)中,启动培养基的组成为:MS基本培养基,补充0.01mg/LIAA、0.1mg/L KT、10g/L蔗糖、1g/L琼脂;
步骤(3)中,增殖培养基的组成为:B5基本培养基,补充0.25mg/LNAA、 0.25mg/LKT、1.0mg/L6-BA、800mg/LCH;
步骤(4)中,生根培养基的组成为:1/2B5基本培养基,补充0.1mg/LIBA。
本实施例中,启动培养过程中,第一个腋芽生成的时间为31天,启动培养结束 时,腋芽伸长1—2cm;增殖培养过程中,第一个丛生芽生成的时间为62天,增殖 培养结束时,丛生芽株高1—3cm,增殖系数为2—3。
实施例5
本实施例所述的一种山红叶黄八丈的组培快繁方法,与实施例1的区别在于:
步骤(2)中,启动培养基的组成为:MS基本培养基,补充0.08mg/LIAA、0.6mg/L KT、50g/L蔗糖、8g/L琼脂;
步骤(3)中,增殖培养基的组成为:B5基本培养基,补充0.05mg/LNAA、 0.05mg/LKT、0.1mg/L6-BA、100mg/LCH;
步骤(4)中,生根培养基的组成为:1/2B5基本培养基,补充0.5mg/LIBA。
本实施例中,启动培养过程中,第一个腋芽生成的时间为40天,启动培养结束 时,腋芽伸长1—2cm;增殖培养过程中,第一个丛生芽生成的时间为67天,增殖 培养结束时,丛生芽株高1—3cm,增殖系数为2—3。
实施例6
本实施例所述的一种山红叶黄八丈的组培快繁方法,与实施例1的区别在于:
步骤(2)中,启动培养基的组成为:MS基本培养基,补充0.015mg/LIAA、 0.15mg/LKT、20g/L蔗糖、2g/L琼脂;
步骤(3)中,增殖培养基的组成为:B5基本培养基,补充0.05mg/LNAA、 0.05mg/LKT、0.5mg/L6-BA、300mg/LCH;
步骤(4)中,生根培养基的组成为:1/2B5基本培养基,补充0.3mg/LIBA。
本实施例中,启动培养过程中,第一个腋芽生成的时间为28天,启动培养结束 时,腋芽伸长1—2cm;增殖培养过程中,第一个丛生芽生成的时间为88天,增殖 培养结束时,丛生芽株高1—3cm,增殖系数为2—3。
实施例7
本实施例所述的一种山红叶黄八丈的组培快繁方法,与实施例1的区别在于:
步骤(2)中,启动培养基的组成为:MS基本培养基,补充0.03mg/LIAA、0.4mg/L KT、40g/L蔗糖、6g/L琼脂;
步骤(3)中,增殖培养基的组成为:B5基本培养基,补充0.15mg/LNAA、 0.15mg/LKT、0.9mg/L6-BA、600mg/LCH;
步骤(4)中,生根培养基的组成为:1/2B5基本培养基,补充0.1mg/LIBA。
本实施例中,启动培养过程中,第一个腋芽生成的时间为27天,启动培养结束 时,腋芽伸长1—2cm;增殖培养过程中,第一个丛生芽生成的时间为58天,增殖 培养结束时,丛生芽株高1—3cm,增殖系数为2—3。
实施例8
本实施例所述的一种山红叶黄八丈的组培快繁方法,与实施例1的区别在于:
步骤(2)中,启动培养基的组成为:MS基本培养基,补充0.015mg/LIAA、 0.15mg/LKT、20g/L蔗糖、2g/L琼脂;
步骤(3)中,增殖培养基的组成为:B5基本培养基,补充0.15mg/LNAA、 0.15mg/LKT、0.9mg/L6-BA、60mg/LCH;
步骤(4)中,生根培养基的组成为:1/2B5基本培养基,补充0.1mg/LIBA。
本实施例中,启动培养过程中,第一个腋芽生成的时间为28天,启动培养结束 时,腋芽伸长1—2cm;增殖培养过程中,第一个丛生芽生成的时间为58天,增殖 培养结束时,丛生芽株高1—3cm,增殖系数为2—3。
实施例9
本实施例所述的一种山红叶黄八丈的组培快繁方法,与实施例1的区别在于:
步骤(2)中,启动培养基的组成为:MS基本培养基,补充0.03mg/LIAA、0.4mg/L KT、40g/L蔗糖、6g/L琼脂;
步骤(3)中,增殖培养基的组成为:B5基本培养基,补充0.05mg/LNAA、 0.05mg/LKT、0.5mg/L6-BA、300mg/LCH;
步骤(4)中,生根培养基的组成为:1/2B5基本培养基,补充0.3mg/LIBA。
本实施例中,启动培养过程中,第一个腋芽生成的时间为27天,启动培养结束 时,腋芽伸长1—2cm;增殖培养过程中,第一个丛生芽生成的时间为87天,增殖 培养结束时,丛生芽株高1—3cm,增殖系数为2—3。
实施例10
启动培养基中生长激素成分和浓度对腋芽生长的影响
取生长情况一致的外植体若干,经过灭菌晾干后接种到pH值为6.3—6.7的启 动培养基上培养3—5周,培养温度为24—28℃,光照强度为2000—3000Lx,光照 时间为14—18h/d。其中启动培养基采用B5基本培养基,补充生长激素、蔗糖、琼 脂。在B5基本培养基、蔗糖、琼脂均相同的条件下,根据生长激素的成分和浓度 进行分组,观察并记录培养基中外植体的培养情况,具体分组及培养结果见表1。
表1启动培养基中生长激素成分和浓度对腋芽生长的影响结果
从上表可以看出,IAA和KT同时使用比二者任一单用时的分化率要高得多, 平均腋芽长度也更长,且从7—9组可以看出,两者同时使用时,IAA为0.02mg/L, KT为0.2mg/L时,分化率最高,为启动培养基的最适合的生长激素组成条件。
实施例11
增殖培养基中生长激素成分和浓度对增殖的影响
取生长情况一致的经过启动培养的腋芽若干,接种到增殖培养基上培养6—8 周,培养温度为24—28℃,光照强度为2000—3000Lx,光照时间为14—18h/d。其 中增殖培养基采用B5基本培养基,补充生长激素,在B5基本培养基条件相同的情 况下,根据生长激素的成分和浓度进行分组,观察并记录培养基中腋芽的培养情况, 具体分组及培养结果见表2。
表2增殖培养基中生长激素成分和浓度对增殖的影响结果
从上表可以看出,NAA、KT、6-BA、CH同时使用比四者任一单用时的增殖 率要高得多,平均株高也更高,且从13—15组可以看出,四者同时使用时,NAA 为0.1mg/L,KT为0.1mg/L,6-BA为0.8mg/L,CH为500mg/L时,其增殖率最高, 为增殖培养基的最适合的生长激素组成条件。
实施例12
生根培养基中生长激素成分和浓度对生根的影响
取生长情况一致的经过增殖培养的丛生芽的单株若干,接种到增殖培养基上培 养3—4周,培养温度为24—28℃,光照强度为2000—3000Lx,光照时间为14—18h/d。 其中生根培养基采用1/2B5基本培养基,补充IBA,在1/2B5基本培养基条件相同 的情况下,根据IBA的浓度进行分组,观察并记录培养基中丛生芽的单株的培养情 况,具体分组及培养结果见表3。
表3生根培养基中生长激素成分和浓度对生根的影响结果
从上表可以看出,IBA为0.2mg/L时,其生根率达到90%,且长势较好,平均 生根数和平均根长均较高,为生根培养基的最适合的生长激素条件。
以上仅是本发明的优选实施方式,应当指出的是,上述优选实施方式不应视为 对本发明的限制,本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技 术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明的精神和范围内,还可以做出若干改 进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
机译: 红叶洋葱或类似植物的红叶去除机中使用的喷水装置
机译: 红叶洋葱或类似植物的红叶去除机中使用的喷水装置
机译: 异黄腐酚和/或黄腐酚的使用,向人管理异黄腐酚和/或黄腐酚的方法需要接受抗炎或抗衰老的成分,以及产品营养。