一种梵净山野生红托竹荪母种制作方法

摘要

本发明公开了一种梵净山野生红托竹荪母种制作方法，包括如下步骤：按一定比例，以土人参、大米、葡萄糖和琼脂为原料，制成土人参试管斜面培养基，作为母种培养基备用；采集梵净山野生红托竹荪的菌蛋，每个菌蛋立即用保鲜膜包裹密封，带回实验室；菌蛋用自来水、酒精、次氯酸钠和无菌水等消毒后，切开菌蛋，取出菌柄，将菌柄切成若干个0.5～1厘米边长的方块，每支母种培养基试管接种1个方块，每个菌蛋可接种8～12支试管；接种好的试管，20℃避光培养，45天左右，即可得到梵净山野生红托竹荪母种。本发明用土人参替代了一般培养基添加的化学试剂，操作简便、成本低，周期短，无化学污染，而且可以制作长裙竹荪等相似食用菌的母种。

说明书

技术领域

本发明涉及食用菌育种和生产领域，具体是一种梵净山野生红托竹荪母种制作方法。

背景技术

土人参（Talinum paniculatum (Jacq.) Gaertn.）又名土洋参、假人参、人参菜等，是马齿苋科多年生的草本植物。土人参的叶中，草酸含量较高，富含钙、磷、铁、抗坏血酸、硫胺素等成分；其根类似人参，含有糖类物质，可以炖汤或泡酒；嫩叶、嫩梢可食用，也可凉拌、炒食，味道鲜嫩。而且，土人参还是一味极好的中草药，具有健脾润肺、止咳、调经的功效，被誉为“南方人参”，美食家认为“土人参补胜似人参”，但其开发利用研究较少。因此，本研究团队为开发土人参的多种用途，进行了积极的探索，获得一项发明专利《一种土人参单叶扦插繁殖方法》，攻克了土人参规模化繁殖技术，但研究发现，离体的土人参根茎叶都容易生长白色真菌，于是，开发土人参的新用途（培养高价值的食用菌）的设想提出来了，也就是实现“药用植物土人参的生产——竹荪(Dictyophpraspp)生产——土人参生产”的“药用植物和食用菌”良性无污染的循环生产模式。查阅资料发现，这种用土人参作为主要原料之一进行竹荪生产的研究，还是一个全新的领域。

竹荪(Dictyophpraspp)又名竹菌、竹参、仙人菌等,隶属真菌门担子菌亚门腹菌纲鬼笔目鬼笔科竹荪属的大型真菌。我国人工栽培的可食用竹荪有短裙竹荪（Phallus duplicatus Bosc Fisch）、长裙竹荪（Phallus indusiatus Vent.）、红托竹荪（Dictyophora rubrovoluata Zang,Ji et Liou）和刺托竹荪（Dictyophora echinouloluata Zang,Zheng.et Hu） 4 个品种，其中以红托竹荪品种质量最好，销售价格最高，约700元/㎏。竹荪生产，产值约3-6万元/亩·年，是收入最高的食用菌种类之一。竹荪含有19 种氨基酸、多种维生素和有益人体健康的微量元素，是一种全营养、纯天然食品，名列“四珍”即竹荪、猴头、香菇、银耳之首，深受广大消费者欢迎，在国际市场上声誉极高，曾有“竹荪黄金价”之说，受到许多学者的关注。目前，对竹荪的研究主要集中在有机物提取、分离、鉴定，提取物化学成分及抑菌作用，抗氧化、降血脂、提高免疫力等多种功能活性分析，多糖、糖蛋白、凝集素的提取、纯化、鉴定及生化特性等方面，但在野生品种驯化、竹荪新品种育种、竹荪母种（母种是食用菌菌种中的一种，是菌种质量的最关键部分。菌种是指食用菌的子实体（食用部分）或孢子(相当于植物的种子)经过人工培养形成的纯菌丝体。在生产中根据菌种的来源，繁殖代数及生产目的，把菌种分为母种、原种和栽培种，分别叫一级种、二级种和三级种。母种是指应用食用菌子实体的一部分或孢子，在培养基中繁殖而成的纯菌丝体。母种可以繁殖原种，也可用于菌种保藏。原种是指母种菌丝在固体培养基上繁殖而成的二级菌丝，即二级种，这一过程增强菌丝对培养环境的适应性，又起到扩繁的作用。原种可以直接出菇。栽培种是指由原种扩繁而成，主要是为了扩繁，为了生产，提供足够的菌种）培养等研究方面，存在竹荪品种较少、使用化学试剂、需要新鲜竹子、原料浪费（马铃薯培养基制作中，马铃薯仅仅取其汤汁，大部分马铃薯渣体被丢弃）、制作工艺相对繁琐（培养基制作中，需要过滤或调节pH值等）等问题，这也是竹荪价格高（约700元/㎏）的直接原因，因此，探究野生品种驯化、竹荪新品种育种、应用无污染的原料、少用或不用化学试剂、减少生产工艺环节、降低成本等，在竹荪生产中具有重要的现实意义。

另外，梵净山野生红托竹荪外观美丽，品相好，个体大，具有极大的生产潜力，但仍处于野生状态，未开发利用，而开发利用梵净山野生红托竹荪的关键技术之一是制作母种，梵净山野生红托竹荪菌蛋（菌蛋是指竹荪形成子实体（食用部分）时的一种出菇状态，也叫菌蕾，状如鸡蛋。当菌蕾顶端凸起如桃形时，多在晴天的早晨由凸起部分开裂，先露出菌盖，菌柄相继延伸，到中午菌柄长到一定高度时即停止伸长，菌裙渐渐由盖内向下展开，形成可以采摘的竹荪）是制作母种的最好外植体（植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段）之一。

发明内容

本专利旨在提供一种梵净山野生竹荪母种制作方法，用土人参替代了一般培养基添加的化学试剂，操作简便、成本低，周期短，无化学污染，而且可以制作长裙竹荪等相似食用菌的母种。

本发明是这样实现的：其操作步骤为：

⑴母种培养基的配制

称取干燥的土人参根、茎或叶共3～6克，大米50克，使用粉碎机混合粉碎（粉碎程度的标准是在加热配制培养基时，土人参和大米混合粉末能形成均匀的悬浮混合液），得到土人参和大米混合粉末，加入800毫升蒸馏水中，再加入琼脂20克、葡萄糖20克，用微波炉煮沸至琼脂完全溶解，定容至1000毫升，再分装到试管，每支试管分装1/4～1/3试管高度的混合液体，盖上试管帽，每支试管的试管帽一端，包2层纸，完全包住试管帽，用绳子捆紧，防止试管帽一端的试管直接与空气接触，121℃高压蒸汽灭菌，制成土人参试管斜面培养基，作为母种培养基备用（大规模的母种培养基，可以按上述比例进行配制，制成土人参试管斜面培养基备用）。

⑵梵净山野生红托竹荪菌蛋处理

采集梵净山野生红托竹荪菌蛋，去掉菌蛋外的杂质，每个菌蛋立即用保鲜膜包裹密封，带回实验室备用；菌蛋用自来水冲洗1～2小时，再用75%酒精喷洒后，在超净工作台上，用75%酒精浸泡90秒，再用2%次氯酸钠消毒30分钟，最后用无菌水清洗8次，获得消毒后的菌蛋，备用。

⑶接种

切开消毒后的菌蛋，取出菌柄，将菌柄切成若干个0.5～1厘米边长的方块，每支试管接种1块方块，接种1块方块置于试管底部一端，约三分之一试管长度的土人参斜面培养基上，每个菌蛋可接种8～12支试管，盖上试管帽，每支试管的试管帽一端，包2层纸，完全包住试管帽，用绳子捆紧，防止试管帽一端的试管直接与空气接触，即得接种好的试管。

⑷恒温培养

上述接种好的试管，置于20℃的恒温培养箱避光培养，45天左右即得即可得到梵净山野生红托竹荪母种。这时，母种可以作为菌种保藏，也可以转接1次，每支试管（直径20mm×长200mm）的母种可以转接成12～18支试管的原种，待菌丝铺满试管三分之二时，再转接1次，每支试管（直径20mm×长200mm）的原种，同样可以转接成12～18支试管的扩繁原种，从菌蛋接种开始计算时间，约4个月，1个菌蛋即可得到梵净山野生红托竹荪原种1152～3888支试管的原种。

上述方法也可以制作长裙竹荪等与梵净山野生红托竹荪相似食用菌的母种。

本发明用土人参替代了一般培养基添加的化学试剂，为实现“药用植物土人参的生产——竹荪(Dictyophpraspp)生产——土人参生产”的“药用植物和食用菌”良性无污染的循环生产模式提供了关键技术，可用于和梵净山野生竹荪相似的食用菌的驯化、育种和规模化生产等方面。与现有技术相比，本发明有如下的优点：

1、研究试验和文献资料的数据显示，本发明第一次培养出了梵净山野生红托竹荪母种。

2、土人参替代了一般培养基添加的化学试剂，具有无化学污染的特点，且培养梵净山野生红托竹荪母种速度快，约45天，最短只要30天。

3、与普通的马铃薯培养基和新鲜竹子培养基相比，省去了过滤的制作工艺环节，减少了原料的浪费（马铃薯和新鲜竹子的残渣都被废弃），而且土人参培养基培养的菌丝生长更快，母种生产周期短。

4、与一般培养基相比，用途更广泛，可以制作长裙竹荪等与梵净山野生红托竹荪相似食用菌的母种。

5、本发明繁殖系数大，一个菌蛋可培养成1152～3888支试管的梵净山野生红托竹荪原种。

6、本发明开发了土人参的新用途：用土人参为主要原料之一制作竹荪母种，有利于实现“药用植物土人参的生产——竹荪生产——土人参生产”的“药用植物和食用菌”良性无污染的循环生产模式。

7、本发明技术可用于梵净山野生红托竹荪等野生真菌的驯化、育种，便于类似真菌生理机能、杂种优势和遗传规律的研究。

具体实施方式

本发明实施例

称取干燥的土人参根、茎或叶共3～6克，大米50克，使用粉碎机混合粉碎（粉碎程度的标准是在加热配制培养基时，土人参和大米混合粉末能形成均匀的悬浮混合液），得到土人参和大米混合粉末，加入800毫升蒸馏水中，再加入琼脂20克、葡萄糖20克，用微波炉煮沸至琼脂完全溶解，定容至1000毫升，再分装到试管，每支试管分装1/4～1/3试管高度的混合液体，盖上试管帽，每支试管的试管帽一端，包2层纸，完全包住试管帽，用绳子捆紧，防止试管帽一端的试管直接与空气接触，121℃高压蒸汽灭菌，制成土人参试管斜面培养基，作为母种培养基备用。采集梵净山野生红托竹荪菌蛋，去掉菌蛋外的杂质，每个菌蛋立即用保鲜膜包裹密封，带回实验室备用；菌蛋用自来水冲洗1～2小时，再用75%酒精喷洒后，在超净工作台上，用75%酒精浸泡90秒，再用2%次氯酸钠消毒30分钟，最后用无菌水清洗8次，获得消毒后的菌蛋，备用。切开消毒后的菌蛋，取出菌柄，将菌柄切成若干个0.5～1厘米边长的方块，每支试管接种1块方块，接种1块方块置于试管底部一端，约三分之一试管长度的土人参斜面培养基上，每个菌蛋可接种8～12支试管，盖上试管帽，每支试管的试管帽一端，包2层纸，完全包住试管帽，用绳子捆紧，防止试管帽一端的试管直接与空气接触，即得接种好的试管。上述接种好的试管，置于20℃的恒温培养箱避光培养，45天左右即得即可得到梵净山野生红托竹荪母种。