一种利用UPLC-Q-TOF/MS技术快速测定寡聚古罗糖醛酸的方法

摘要

一种利用UPLC-Q-TOF/MS技术快速测定寡聚古罗糖醛酸的方法，属于超高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱UPLC-Q-TOF/MS检测技术领域。本发明通过标准品的准备、样品前处理、色谱条件、质谱条件和寡聚古罗糖醛酸定性定量方法的建立等步骤快速测定寡聚古罗糖醛酸。本发明快速、准确的检测了寡聚古罗糖醛酸，并给出寡聚古罗糖醛酸在质谱中的母离子及碎片离子的特征，从而不仅可以实现对样品中古罗糖醛酸单糖到四糖的准确定性定量，同时可根据质谱信息对样品中可能含有的未知寡聚古罗糖醛酸进行推测、解析。

说明书

技术领域

本发明涉及寡聚古罗糖醛酸（G1-G4）的检测方法，尤其涉及一种超高效液相色谱-四级杆串联飞行时间质谱（UPLC Q TOF/MS）联用技术的寡聚古罗糖醛酸快速定性定量方法，属于检测技术领域。

背景技术

本发明涉及的寡聚古罗糖醛酸的检测方法可用于相关药品、保健品等的质量控制中。寡聚古罗糖醛酸是褐藻胶水解产物，研究证明低聚褐藻酸钠具有降血压、降血脂、抗氧化、抗炎症等功效，已被用于心血管的疾病的治疗中。目前关于寡聚古罗糖醛酸的检测方法鲜有报道。目前可见文献中，对寡聚古罗糖醛酸的表征需要凝胶渗透色谱和高效液相色谱分离纯化，再试用质谱、核磁共振等手段进行表征。这一手段耗时长，步骤复杂，无法满足快速分析检测的要求。

本发明方法采用超高效液相色谱四级杆串联飞行时间质谱检测，使用CSH（表面带电杂化颗粒）的C18色谱柱，分别以乙腈、0.1%甲酸为流动相A和B，进行梯度洗脱，使古罗糖醛酸单糖到四糖在5分钟内实现分离，采用电喷雾离子源，负离子模式在50到2000 Da进行扫描，对每一种糖醛酸对应的特征离子进行提取并获得积分峰面积，从而实现对寡聚古罗糖醛酸的快速分析鉴定。

发明内容

本发明提供了一种快速、准确的寡聚古罗糖醛酸的检测方法。

本发明的技术方案，一种利用UPLC-Q-TOF/MS技术快速测定寡聚古罗糖醛酸的方法，步骤为：

（1）标准品的准备：准备古罗糖醛酸单糖G1、古罗糖醛酸二糖G2、古罗糖醛酸三糖G3、古罗糖醛酸四糖G4；

（2）样品前处理：将含寡聚古罗糖醛酸样品以超纯水溶解，配成浓度为0.1g/mL溶液，过0.22μm滤膜后待测；

（3）色谱条件：色谱柱 ACQUITY UPLC CSH C18 Column，2.1 mm×100 mm，1.7μm，流动相为乙腈A相和0.1%甲酸B相，流动梯度洗脱程序：0-1 min，2% A+98 %B；1-15min，2 %A+98%B～60%A+40%B；15-17 min，60%A+40%B～100 %A，流速0.3mL/min，柱温：45℃，进样量 1μL；

（4）质谱条件：质谱仪WATERS MALDI SYNAPT-Q-TOF/MS ，电喷雾离子源，负离子扫描模式。离子源温度100℃，脱溶剂温度400℃，脱溶剂气流量700L/h，锥孔气流量50 L/h，扫描范围50-2000Da，一级质谱锥孔电压30 V，裂解能量6eV，扫描时间1s；

（5）寡聚古罗糖醛酸定性定量方法的建立：具有标准样品下，采用外标法定量；将4种标准品G1-G4配成等质量浓度的混合标准储备液，并用乙腈-水溶液逐级稀释使4种寡聚古罗糖醛酸含量均分别为15、30、50、75、100、125、150mg/L，以每个浓度下每个寡聚古罗糖醛酸对应的母离子提取离子色谱图中的积分峰面积为纵坐标，混合标准溶液的浓度为横坐标，建立标准曲线；

G1-G4分别对应的母离子依次为：G1选择m/z 193、G2选择m/z 369、G3选择m/z 545、G4选择m/z 721；检测样品时，根据样品在同一保留时间处对应的提取离子积分峰面积值，根据标准曲线方程，获得对应寡聚古罗糖醛酸的含量。

线性方程如表1所示。

表1  线性方程

本发明的有益效果：本发明快速、准确的检测了寡聚古罗糖醛酸，并给出寡聚古罗糖醛酸在质谱中的母离子及碎片离子的特征，从而不仅可以实现对样品中古罗糖醛酸单糖到四糖的准确定性定量，同时可根据质谱信息对样品中可能含有的未知寡聚古罗糖醛酸进行推测、解析。

附图说明

图1是寡聚古罗糖醛酸（G1- G 4）的提取离子色谱图。

具体实施方式

实施例1 褐藻多糖水解物中寡聚古罗糖醛酸的检测

1、标样：古罗糖醛酸单糖（G1）、古罗糖醛酸二糖（G2）、古罗糖醛酸三糖（G3）、古罗糖醛酸四糖（G4）。

2、样品前处理：取 0.1g褐藻多糖水解物加入1mL超纯水，涡旋混匀溶解，室温过0.22 μm滤膜，待测。

3、色谱条件：色谱柱 ACQUITY UPLC CSH C18 Column，2.1 mm×100 mm， 1.7 μm，流动相为乙腈A相和0.1 %甲酸B相，流动梯度洗脱程序：0-1 min，2 % A+98 %B；1-15 min，2 %A+98%B - 60%A+40%B；15-17 min，60%A+40%B - 100 %A，流速0.3 mL/min，柱温：45℃，进样量 1 μL。

4、质谱条件：质谱仪WATERS MALDI SYNAPT-Q TOF/MS，电喷雾离子源，负离子扫描模式。离子源温度100℃，脱溶剂温度400℃，脱溶剂气流量700L/h，锥孔气流量50 L/h，扫描范围50-2000Da，一级质谱锥孔电压30 V，裂解能量6 eV，扫描时间1 s。

表2褐藻多糖水解物中寡聚古罗糖醛酸的检测（mg/g）