海洛因中的25种中性或酸性杂质的检测方法

摘要

涉及海洛因样品中25种中性或酸性杂质的检测方法，尤其涉及一种超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF)同时测定海洛因中25种中性或酸性杂质的方法，该方法在酸性条件下通过石油醚：二氯甲烷混合溶剂对中性或酸性杂质进行提取，采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱法对中性或酸性杂质进行测定。本方法与现有中性或酸性杂质检测方法相比具有样品前处理简单、检测成本低、分析时间短、选择性好的优点。

说明书

技术领域

本发明涉及海洛因样品中的25种中性或酸性杂质的检测方法，尤其涉及一种超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF)同时检测海洛因中的25种中性或酸性杂质的方法。 

背景技术

海洛因，又称为二乙酰吗啡，是一种半合成毒品，是由鸦片中的主要生物碱吗啡经乙酰化后制得。海洛因在非法加工过程中还生成了大量的中性或酸性杂质，这些中性或酸性杂质是醋酸酐与鸦片中的吗啡、可待因、罂粟碱、蒂巴因、那可汀等生物碱反应生成的。海洛因中所含有的这些杂质的种类和数量，直接反映出海洛因的加工工艺，在某些程度上也能反映出鸦片的产地。利用海洛因中的这些特征性的中性或酸性杂质，可进行海洛因不同来源地的分类判别。 

海洛因中中性或酸性杂质的检测方法包括CE法、GC-ECD法、GC-FID法、GC-MS法。CE法、GC-ECD法、GC-FID法虽然灵敏度高，但选择性不强，有时在峰的归属时会遇到困难。所以，目前美国和澳大利亚的法庭科学实验室均采用GC-MS法检测中性或酸性杂质。GC-MS法灵敏高、选择性强，方法成熟、稳定；缺点是样品需要进行衍生化处理，前处理操作繁琐、数据重复性差，且样品的分析时间长。 

发明内容

为了解决海洛因中中性或酸性杂质快速、准确检测的技术问题，本发明的目的是提供一种超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF)同时测定海洛因中25种中性或酸性杂质的方法，该方法具有样品前处理简单、检测成本低、分析时间短、分析灵敏度高、分辨率高、选择性好的优点。 

为了实现上述的目的，本发明采用了以下的技术方案。 

一种同时测定海洛因中的25种中性或酸性杂质的方法，采用超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF)，该方法包括以下步骤： 

(1)海洛因样品中待测中性或酸性杂质的提取 

称取海洛因样品，至于玻璃离心管中，加入酸化溶剂，超声处理，加入提取溶剂，震荡提取后离心，经过滤膜处理，得到样品溶液； 

随同样品做试剂空白； 

(2)中性或酸性杂质的测定 

设定相应的液相色谱条件和质谱条件，包括设定的分子式、保留时间、二级碎片离子参数，通过超高效液相色谱-串联四级杆飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF)，对待测的25种中性或酸性杂质化合物进行积分处理，得到各化合物的峰面积数值。 

优选地，酸化溶剂选自HCl溶液、HNO₃溶液、H₂SO₄溶液，更优选为H₂SO₄溶液。 

优选地，提取溶剂为石油醚、二氯甲烷混合溶剂，更优选为石油醚:二氯甲烷＝3mL:2mL的混合液。 

优选地，超声时间为5-20min，进一步优选10min。 

优选地，震荡提取时间为20-40min，进一步优选30min。 

优选地，离心速度为3000-15000r/min，进一步优选为4000-8000r/min，更优选为5000r/min。 

优选地，离心时间为5-20min，进一步优选为10min。 

优选地，滤膜为0.22μm有机系滤膜。 

优选地，所述液相色谱条件为： 

色谱柱：Agilent Eclipse Plus C₁₈ RRHD(1.8μm，2.1×100mm)；进样浓度：40mg/mL；进样体积：0.5μL；柱温：40℃；流动相A：乙腈，流动相B：10mmol/L甲酸铵溶液；流速：0.4mL/min，梯度洗脱程序见下表， 

梯度洗脱程序 

时间/min A(％) B(％) 0 30 70 1 30 70 10 55 45 11 95 5 12 95 5 12.5 30 70 17 30 70

优选地，所述质谱条件为： 

一级质谱，采用ESI离子源，正离子模式；离子喷雾电压：5.5kV；去簇电压(DP)：80V；喷雾温度：600℃；雾化气(N₂，GS₁)柱前压：50psi；脱溶剂气(N₂，GS₂)柱前压：50psi；气帘气(N₂，CUR)柱前压：30psi；碰撞能量(CE)：10V；质量轴：100～1000amu； 

二级质谱，采用ESI离子源，正离子模式；MS/MS切换扫描(IDA)；离子喷雾电压：5.5kV；去簇电压(DP)：80V；喷雾温度：600℃；雾化气 (N₂，GS₁)柱前压：50psi；脱溶剂气(N₂，GS₂)柱前压：50psi；气帘气(N₂，CUR)柱前压：30psi；碰撞能量(CE)：40V，碰撞能量扩展(CES)：15V；质量轴：100～1000amu。 

在相应的参数条件下，参见表2，对25种中性或酸性杂质化合物进行积分处理，得到各化合物的峰面积数值。 

表2是25种中性或酸性杂质各化合物的液质参数列表。 

表2 25种中性或酸性杂质各化合物的液质参数列表 

表2中，已知结构的中性或酸性杂质变量用其名称表示，未知结构的中性或酸性杂质变量用“提取质量数/保留时间”表示”。 

该方法在酸性条件下通过石油醚、二氯甲烷混合溶剂对中性或酸性化合物进行提取，超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF)对中性或酸性化合物测定。本方法与已有中性或酸性杂质检测方法相比具有前处理简单、检测成本低、分析时间短、选择性好的优点，满足批量海洛因样品来源地快速判别的需求。 

附图说明

图1为海洛因样品UPLC-Q-TOF TIC图；图中数字编号对应表2中的各个中性或酸性杂质的编号； 

图2.1-图2.25分别为25种中性或酸性杂质的二级碎片离子图；例如图2.1代表Hydrocotarnine的二级碎片离子图，图2.2代表356/1.5的二级碎片离子图，图2.25代表4-O-Acetylthebaol的二级碎片离子图。 

具体实施方式

实施例1：超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF)同时测定海洛因中25种中性或酸性杂质，该方法包括以下的步骤： 

(1)海洛因样品中待测中性或酸性杂质的提取 

称取“西南亚”海洛因样品100mg，置于8mL玻璃离心管中，用5mL瓶口移液器移取2mL酸化溶剂于玻璃离心管中，酸化溶剂为：0.25M H₂SO₄溶液，超声10min。用5mL瓶口移液器移取2.5mL提取溶剂加入上述玻璃离心管，提取溶剂为：石油醚:二氯甲烷＝3mL:2mL的混合液，震荡提取30min。以5000r/min转速离心10min。移取上层有机相1mL，避免夹带水层，过0.22μm有机系滤膜，转移至1.5mL进样瓶中，进样分析。 

随同样品做试剂空白。 

(2)中性或酸性杂质的测定 

样品溶液在设定的超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF)的液相和质谱条件下进样分析。 

方法中设定的液相色谱参数如下： 

色谱柱：Agilent Eclipse Plus C₁₈ RRHD(1.8μm，2.1×100mm)；进样浓度：40mg/mL；进样体积：0.5μL；柱温：40℃；流动相A：乙腈，流动相B：甲酸铵(10mmol/L)；流速：0.4mL/min。梯度洗脱程序见表1。 

方法中设定的质谱条件参数如下： 

一级质谱。采用ESI离子源，正离子模式；离子喷雾电压：5.5kV；去簇电压(DP)：80V；喷雾温度：600℃；雾化气(N₂，GS₁)柱前压：50psi；脱溶剂气(N₂，GS₂)柱前压：50psi；气帘气(N₂，CUR)柱前压：30psi；碰撞能量(CE)：10V；质量轴：100～1000amu。 

二级质谱。采用ESI离子源，正离子模式；MS/MS切换扫描(IDA)；离子喷雾电压：5.5kV；去簇电压(DP)：80V；喷雾温度：600℃；雾化气(N₂，GS₁)柱前压：50psi；脱溶剂气(N₂，GS₂)柱前压：50psi；气帘气(N₂，CUR)柱前压：30psi；碰撞能量(CE)：40V，(CES)：15V；质量轴：100～1000amu。 

在设定的分子式、保留时间、二级碎片离子参数条件下，参见表2，对给定25种中性或酸性杂质化合物进行积分处理，得到各化合物的峰面积数值。 

使用该方法，对于150份“金三角”和“金新月”母本海洛因中各中性或酸 性杂质进行检测，其峰面积的平均值和相对标准偏差RSD数据见表4。 

表4 150份“金三角”和“金新月”海洛因母本样品峰面积均值和相对标准偏差RSD统计表 

本申请首次建立了采用超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱法测定海洛因中25种中性/酸性杂质的方法，本方法与已有中性/酸性杂质检测方法相比具有前处理简单、检测成本低、分析时间短、选择性好的优点，满足批量海洛因样品来源地快速判别的需求。