反转录-环介导等温扩增检测猪流行性腹泻的方法

摘要

本发明提供一种反转录-环介导等温扩增检测猪流行性腹泻的方法。根据PEDV N蛋白保守区域基因，设计针对靶基因上6个区域的3对引物，合成两条RT-PCR引物，使用RT-LAMP技术鉴定PED病毒；RT-PCR反应；获得的RNA进行反转录；获得的cDNA用于PCR反应；确保了扩增的特异性，扩增速度快，可在30～60min内获得结果，无需电泳实现肉眼观察扩增效果。使用酶混合物，可在恒温65℃情况下，1h内实现反转录和核酸扩增，RT-LAMP的检测是在LAMP扩增DNA的基础上，加入了反转录酶而实现扩增检测RNA，反转录和扩增一步完成，省去了传统RT-PCR要先进行的反转录步骤。