一种保肝和治疗慢性肝炎的中药及中药中地耳草总黄酮及其制备方法

摘要

本发明公开了一种保肝和治疗慢性肝炎的中药及其中药地耳草总黄酮的制备方法，中药有效成份为从地耳草中提取的地耳草总黄酮，地耳草总黄酮的制备方法主要包括提取、富集和精制。本发明所述的中药可从根本上控制该病，副作用小、不良反应发生率低，且疗效确切，可长期服用。

说明书

技术领域

本发明属于一种中成药(植物药)及其制备方法，具体说是一种保肝和治疗慢性肝炎的中药及其制备方法。

背景技术

病毒性肝炎是一种常见病、多发病，由于难以根治和危害面广，与癌症、艾滋病并称“世纪三大顽症”。2008年5月19日，世界肝炎联盟(WHA)联手世界卫生组织、其他联合国组织、红十字会、开放性社会研究所(Open SocietyInstitute)、盖茨基金会(Gates Foundation)等机构，在全球正式启动为期5年的“世界肝炎日”运动。据统计，全球被乙肝病毒(HBV)感染的人大约有20亿人，其中3亿人为慢性携带者。我国除了3000万人以上的慢性乙型肝炎患者外，还有相当数量的慢性丙肝患者。

研究表明，慢性乙肝患者发生肝癌的危险性比普通人高200倍以上，95％以上的肝癌患者三是由慢性乙肝演变而来的。预防肝癌发生的最好办法就是对肝炎患者进行抗病毒和抗纤维化的双重治疗，降低肝细胞发生癌变的可能性。

近年来，慢性乙肝的抗病毒治疗取得了很大进展，抗病毒药物相继推出了拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦等，但总体来说效果尚不十分理想，由于肝炎患者需要较长时间用药，副作用及反跳现象仍然存在，而且有些患者不适合或不耐受抗病毒治疗；另外，有些慢性肝病的病因不是病毒。

中医药治疗肝炎病具有悠久的历史，与化学药相比虽然起效慢，但由于副作用小更适合长期服用，愈后不易反跳。尤其在恢复期治疗中西药联合使用常常会起到更稳定的效果。

发明内容

本发明提供了一种保肝和治疗慢性肝炎的中药及其中药中地耳草总黄酮的制备方法，所述的中药可从根本上控制疾病，副作用小、不良反应发生率低，且疗效确切，可长期服用。

本发明的技术方案为：

一种保肝和治疗慢性肝炎的中药，其特征在于：所述的中药有效成份为或者包括有从地耳草中提取的地耳草总黄酮。

所述的保肝和治疗慢性肝炎的中药，其特征在于：所述的中药为胶囊、颗粒剂、片剂、溶液剂、丸剂，或者为注射剂型。

所述的保肝和治疗慢性肝炎的中药，其特征在于：所述的胶囊指软胶囊，颗粒剂指干混悬剂，片剂指分散片、泡腾片、咀嚼片、口崩片，溶液剂指糖浆，丸剂指浓缩丸、滴丸、微丸。

所述的保肝和治疗慢性肝炎的中药中的地耳草总黄酮的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)、提取：

取地耳草的干燥地上部分，净选、切段，加中性水或水-醇溶液中浸泡过夜、提取、过滤；过滤后的药渣再加水或同比例的水-醇液提取1～3次，过滤，合并滤液，然后将水提取液减压浓缩或将醇提取液回收乙醇，浓缩得浸膏，将浓缩液冷至室温，加水搅拌溶解，静置，过滤，得滤液；二者是否指同一物？

(2)、富集

将滤液加热至30℃～50℃，用D101型、AB-8型或D201型大孔吸附树脂吸附，然后用水洗脱液近无色，弃去洗脱液，然后用质量浓度为5～95％的乙醇洗至洗脱液无黄酮成分；洗脱液合并，回收乙醇至一定体积；

(3)、精制，选用下列三种方法之一：

①将上述乙醇洗脱液继续减压浓缩至干，取出，通风干燥一定时间，粉碎，过筛，铝塑密封包装，得到总黄酮；

②将上述乙醇洗脱液继续减压浓缩至浸膏，加入一定体积的乙醇回流溶解，再加入一定量的活性炭回流10～60分钟，过滤，滤液减压乙醇浓缩至干，取出，通风干燥一定时间，粉碎，过筛，铝塑密封包装，得到总黄酮；

③将上述乙醇洗脱液继续减压浓缩至浸膏，然后加入一定体积0.01～0.1mol/LNaOH饱和正丁醇或一定比例的正丁醇乙酸乙酯混合液搅拌溶解、滤过，滤液移至萃取罐中，用乙酸乙酯饱和的0.01～0.1mol/LNaOH水溶液提取至碱液层至近无色，合并碱提取液，移至另一萃取罐中，边搅拌边加入稀盐酸调节pH值至1～3，用水饱和的正丁醇或一定比例的正丁醇乙酸乙酯混合液提取至近无色，合并提取液，然后用乙酸乙酯饱和水溶液洗涤1～3次，弃去水层，将提取液减压回收溶剂至干，取出，通风干燥一定时间，粉碎，过筛，铝塑密封包装，得到总黄酮。

保肝和治疗慢性肝炎的中药中的地耳草总黄酮的制备方法，其特征在于：

具体包括以下步骤：

(1)、提取

取地耳草的干燥地上部分，净选，切成长2～3cm段，然后加入到体积比为8～15倍量的中性水中浸泡过夜、提取、过滤；过滤后的药渣再加体积比为8～12倍水提取1～2次，过滤；合并滤液，减压浓缩至体积：生药(mL/g)1∶1.8-2的溶液，冷至室温，滤过，的滤液；

(2)富集

滤液加热至30～50℃，用D101型、AB-8型或D-201型大孔吸附树脂吸附，然后用水洗脱至近无色，弃去水洗脱液，再用质量浓度为5～95％的乙醇洗至洗脱液不含黄酮成分；

(3)精制

将上述乙醇洗脱液继续减压浓缩至干，取出，通风干燥一定时间，粉碎，过筛，铝塑密封包装，得到地耳草总黄酮。

富集步骤中，使用质量浓度为65～70％的乙醇。

本发明的有益效果和意义在于：地耳草总黄酮是从藤黄科植物地耳草(Hypericum japonicum)的干燥地上部分的干燥地上部分提取、分离、精制得到。地耳草，又名田基黄，系中国传统中药，始载于《生草药性备要》，具有清热利湿、解毒消肿、散瘀止痛功效，主要分布于安徽、湖北、江西、广西、贵州、云南等地，民间用全草入药，具有清热解毒、凉血止血之功效。地耳草总黄酮是其主要成分之一，我们研究发现可用作制备保肝与治疗肝炎的有效药物，这对于进一步综合利用药材，带动山区尤其是革命老区经济的发展具有很大的积极意义。

具体实施方式

一种保肝和治疗慢性肝炎的中药的有效成份为或者包括有从地耳草中提取的地耳草总黄酮。

中药为胶囊、颗粒剂、片剂、溶液剂、丸剂等剂型，或者为注射剂型。

保肝和治疗慢性肝炎的中药中的地耳草总黄酮的制备方法：

实施实例一

(1)、提取

取地耳草的干燥地上部分，净选，切成段，段长2-3cm，然后加入到体积比为12倍量中性水浸泡过夜、回流提取1.5小时、过滤；过滤后的药渣再加10倍水提取1.5小时，过滤；合并滤液，减压浓缩至体积：生药(mL/g)1∶2的溶液，冷至室温，滤过，得滤液。

(2)富集

滤液加热至40℃，用AB-8型大孔吸附树脂吸附，然后用水洗脱至近无色，弃去水洗脱液，再用65％的乙醇洗至洗脱液不含黄酮成分。

(3)精制

将上述乙醇洗脱液继续减压浓缩至干，取出，于80℃减压干燥10小时，粉碎，过60目筛，铝塑密封包装，得到地耳草总黄酮(以槲皮素为对照品测总黄酮不少于50％，HPLC检测单体成分不少于5个化合物)。

实施实例二

(1)、提取：

取地耳草的干燥地上部分，净选，切成段，段长2-3cm，然后加入到体积比为12倍量50％乙醇浸泡过夜、回流提取1.5小时、过滤；过滤后的药渣再加10倍50％乙醇提取1.5小时，过滤；合并滤液，减压浓缩回收乙醇，浓缩液加水搅拌溶解至体积：生药(mL/g)1∶2的溶液，冷至室温，滤过，得滤液。

(2)富集

滤液加热至35℃，用D101型大孔吸附树脂吸附，然后用水洗脱至近无色，弃去水洗脱液，再用质量浓度为70％的乙醇洗至洗脱液不含黄酮成分。

(3)、精制

将上述乙醇洗脱液继续减压浓缩至浸膏，加入6倍量乙醇回流溶解，再加入2％的颗粒活性炭回流30分钟，过滤，滤液减压乙醇浓缩至干，取出，于80℃减压干燥10小时，粉碎，过60目筛，铝塑密封包装，得到地耳草总黄酮(以槲皮素为对照品测总黄酮不少于55％，HPLC检测单体成分不少于5个化合物)

实施实例三

(1)、提取

取地耳草的干燥地上部分，净选，切成段，段长2-3cm，然后加入到体积比为12倍量85％乙醇浸泡过夜、回流提取1.5小时、过滤；过滤后的药渣再加10倍85％乙醇提取1.5小时，过滤；合并滤液，减压浓缩回收乙醇至浸膏。

(2)、精制

在浸膏中按生药体积比10∶1(g/mL)加入0.01mol/LNaOH饱和的正丁醇∶乙酸乙酯(1∶1)混合液搅拌溶解、滤过，滤液移至萃取罐中，用乙酸乙酯饱和的0.01mol/LNaOH溶液提取至碱液层至近无色，合并碱提取液，移至另一萃取罐中，边搅拌边加入稀盐酸调节pH值至1-3，用水饱和的正丁醇∶乙酸乙酯(1∶1)混合液提取至近无色，合并提取液，然后用乙酸乙酯饱和水溶液洗涤3次，弃去水层，将提取液减压回收溶剂至干，取出，于80℃减压干燥10小时，粉碎，过60目筛，铝塑密封包装，得到地耳草总黄酮(以槲皮素为对照品测总黄酮不少于50％，单体成分HPLC检测不少于5个化合物)

本发明的药效作用通过以下试验证明：

1.对小鼠四氯化碳(CCl₄)性急性肝损伤的治疗作用

取昆明种小鼠40只，雌、雄各半，随机分成4组，每组10只，分别为对照组，四氯化碳模型组，地耳草总黄酮组(以下简称“试验药组”，批号080901、以槲皮素计总黄酮含量54.2％)，联苯双酯滴丸组(阳性组)。各给药组按0.2m1/10g/1d剂量灌胃给药1次，正常对照组及四氯化碳模型组给予同量的灭菌生理盐水，各组连续灌胃给药7天，于最末次给药1小时，除正常对照外，其余各组均腹腔注射0.1％四氯化碳花生油溶液0.1ml/10g，染毒24小时后，所有小鼠采用眼眶放血法采血，分离血清，测定ALT的浓度。

对照管取血清0.1ml，将丙氨酸氨基转移酶基质液于37℃水浴保温5min，分别取0.5ml放置于各血清管中，混匀，37℃水浴保温30min，分别加入2，4-二硝基苯肼0.5ml，混匀，再分别加入0.4mol/l氢氧化钠溶液5.0ml，室温放置10min，测定ALT浓度，T52分光光度计检在505波长处测吸光度A。校正“零”点。

对照组、模型组、阳性组、地耳草总黄酮组分别取血，静置约5～10min，离心15分钟，离心速度3500r/min，定量移取血清0.1ml于10ml试管中(试管编号对应上取血液印管号)。将丙氨酸氨基转移酶基质液于37℃水浴保温5min，分别取0.5ml放置于各血清管中，混匀，37℃水浴保温30min，分别加入2，4-二硝基苯肼0.5ml，混匀，再分别加入0.4mol/l氢氧化钠溶液5.0ml，室温放置10min，测定ALT浓度，T52分光光度计在505波长处检测吸光度A。

试验数据与结果

Tab.1试验数据

Tab.2CCI₄所致急性肝损伤大鼠血清ALT(n＝10，x±s)-

Tab.3组间差异

结果表明地耳草总黄酮对急性肝损伤有较好的保护与治疗作用。

2.对四氯化碳性慢性肝损伤的治疗作用

取Wistar大鼠40只，体重156土23g，雌雄兼用，随机分为4组分组、给药与剂量均同急性肝损伤实验，但连续给药时间为42日，每周一、四在大鼠颈背部皮下注射40％，CC14油溶液5ml/kg，共6周，最后摘除眼球采血，测血清总蛋白、白蛋白含量，ALT和门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性，取肝作病理检查。

结果显示地耳草总黄酮可促进慢性肝损伤大鼠血清总蛋白及白蛋白含量增加，降低ALT和AST活性，减轻肝脏脂肪变性、坏死和纤维组织增生，证明地耳草总黄酮对慢性肝损伤有较强的保护与治疗作用。