透过抑制极光激酶而用于治疗癌症的吡咯并三嗪衍生物

摘要

本发明是有关新颖化合物与其制法；治疗疾病(特别是癌症)的方法，该方法包括投予前述化合物；以及用于治疗或预防疾患(特别是癌症)的医药组合物的制造方法。

说明书

[相关申请案的交互参照]

本申请案主张下列美国专利临时申请案第60/995,147号(2007年9月25日申请)的优先权，其完整揭示内容以引用方式并入本文中。

技术领域

本发明是有关新颖化合物与其制法；治疗疾病(特别是癌症)的方法，该方法包括投予前述该化合物；以及用于治疗或预防疾患(disorder)(特别是癌症)的医药组合物的制造方法。

背景技术

失调的细胞增生作用、基因体的不稳定性与残存为所有癌症的特征。正常的细胞调节作用为控制细胞增生与计画性细胞死亡(细胞凋亡)的讯号的平衡。此等复杂过程间的相互作用维持了组织稳定性与功能。此等控制细胞周期进程的细胞途径的失调会造成失控的细胞生长与组织恒定(tissue homeostasis)。

细胞周期调节作用通过有序的蛋白质磷酸化作用串级(cascade)所控制。现已判别出数种在细胞周期进程中扮演重要角色的蛋白质激酶家族。值得注意的是，其中许多种激酶在人类肿瘤中的活性比在正常组织中的活性更高。不论其是因表现量或蛋白质量提高或因共同活化子(coactivator)的表现改变，最终的结果仍为细胞周期失调。

极光激酶(Aurora)家族(极光激酶-A、B、C或2、1、3)为有丝分裂与细胞质分裂的调节与功能所必需的丝胺酸/苏胺酸激酶(概述在Adams等人的2001，Trends in Cell Biology 11(2)：49-54)。极光激酶的活性与表现是受到细胞周期调节，因此其在有丝分裂期间达到活性尖峰，但在静止细胞(resting cell)中几乎检测不到其表现。该等极光激酶的催化功能区(catalytic domain)为高度保留，同质性超过90％，但在有丝分裂与细胞质分裂期间该等激酶则具有不同的亚细胞位置与功能。有丝分裂时，极光激酶A是位在中心体与纺锤极(spindlepole)，且为中心体分离与成熟时所必需。相反地，极光激酶-B则与另外三种蛋白质(内着丝点蛋白(INCENP)、玻瑞林(borealin)与存活素(survivin))形成复合物，且作为“有丝分裂过客蛋白质(mitoticpassenger protein)”(Meraldip P等人2004)。此染色体过客蛋白质在伴护及调节有丝分裂与细胞质分裂的复杂功能上扮演重要角色。在有丝分裂后期，复合物自着丝点向中心纺锤体移动，移向中体(midbody)可能反映出需要极光激酶-B作用在不同受质上。已判别出极光激酶A与B的一系列受质，其中以组织蛋白3(其涉及染色质缩合(chromatincondensation)与有丝分裂入口(mitotic entry)的蛋白质)为最具特征者。最后，已发现极光激酶C在有丝分裂后期位在纺锤极，然而，对其完整功能则了解不多(Kimuram M等人1999)。

已采用极光激酶的小分子抑制剂来全面探讨极光激酶在调节有丝分裂上所扮演的角色(Ditchfield C等人2003、Hanning EA等人2004与Carpinelli P等人2005)。结构上不同的抑制剂可促进相同的细胞表型及抑制组织蛋白3对丝胺酸10的磷酸化作用。此外，已证实极光激酶的小分子抑制剂与反义寡核苷酸对肿瘤细胞具有抗增生作用。此显示抑制极光激酶将适用于治疗癌症。

发明内容

在一项具体实施例中，本发明提供一种具有式(I)的化合物：

或其生理上可接受的盐、溶剂合物、水合物或立体异构体，

其中：

R¹为-(C₁-C₄)烷基、-(C₁-C₄)烷基-CF₃，-(C₃-C₆)环烷基或-(C₂-C_-4)烷基-NR⁵R⁶；

R²为氢或-(C₁-C₄)烷基；

R³为卤素；

R⁴为-(C₁-C₄)烷基，其可视需要经一个或多个羟基、氨基、烷氧基或环烷基取代；以及

R⁵与R⁶可相同或相异，且独立为氢、甲基、乙基，或R⁵与R⁶可与其所连接的氮共同形成吡咯烷环。

在较佳具体实施例中，本发明提供一种式(I)的化合物，其中R¹为甲基、乙基、正丙基、仲丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、2，2，2-三氟乙基或2-(二甲基氨基)-乙基。

在另一项较佳具体实施例中，本发明提供一种式(I)的化合物，其中R²为氢。

在又一项较佳具体实施例中，本发明提供一种式(I)的化合物，其中R³为氟或氯。

在又另一项较佳具体实施例中，本发明提供一种式(I)的化合物，其中R⁴为甲基或乙基。

在再一项较佳具体实施例中，本发明提供一种具有式(I)的化合物，如权利要求1所述的化合物，其中R³为氟或氯，且R⁴为甲基或乙基。

在一项独立的具体实施例中，本发明提供一种具有式(I)的化合物，其为式(I)的盐，更佳为乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬胺酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、双(苯磺酸盐)、硫酸氢盐、丁酸盐、双(马来酸盐)、富马酸盐、半富马酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、肉桂酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、衣康酸盐、乳酸盐、马来酸盐、杏仁酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐(pamoate)、果胶酸盐(pectinate)、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、磺酸盐、双(甲磺酸盐)、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、或十一烷酸盐；最佳为双(甲磺酸盐)、盐酸盐、双(马来酸盐)、半富马酸盐、氢溴酸盐、草酸盐、或双(苯磺酸盐)。

在一项独立的具体实施例中，本发明提供一种具有下列IUPAC名称的化合物：

4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺；

4-氨基-N-乙基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺；

4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-丙基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺；

4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺；

4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-异丁基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺；

4-氨基-N-环丙基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺；

4-氨基-N-乙基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺；

4-氨基-N-[2-(二甲基氨基)乙基]-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺；

4-氨基-N-叔丁基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺；

4-氨基-N-叔丁基-5-(4-{[(6-乙基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}-3-氟苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺；

4-氨基-5-(4-{[(6-乙基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}-3-氟苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺；

4-氨基-5-(3-氯-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-乙基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺；

4-氨基-5-(3-氯-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-丙基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺；

4-氨基-5-(3-氯-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-环丙基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺；

4-氨基-5-(3-氯-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-[2-(二甲基氨基)乙基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺；

4-氨基-5-(3-氯-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺；

4-氨基-5-(3-氯-4-{[(6-乙基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺；或其生理上可接受的盐、溶剂合物、水合物或立体异构体。

在另一项独立的具体实施例中，本发明提供一种盐，其具有IUPAC名称为：

4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基)氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺二甲磺酸盐；

4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺盐酸盐；

4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺二[(2Z)-丁-2-烯二酸盐]；

4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺(2E)-丁-2-烯二酸盐(2∶1)；

4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺氢溴酸盐；

4-氨基-5-(4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺草酸盐；或

4-氨基-5-(4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺双苯磺酸盐。

依其结构而定，根据本发明的化合物可存在立体异构型(镜像异构体或非镜像异构体)。因此本发明是有关该等镜像异构体或非镜像异构体以及其个别的混合物。此等镜像异构体或非镜像异构体的混合物可依已知方式分离成单一的立体异构性成份。

本发明亦有关所出示化合物的互变异构体，端赖个别化合物的结构而定。

具体实施方式

定义

除非本文中另有说明，否则下列定义适用于本说明书及权利要求书全文中所采用的专有名词。

为达本发明的目的，该“盐”较佳为根据本发明化合物的医药上可接受的盐。例如：参见S.M.Berge等人的“医药用盐类(Pharmaceutical Salts)，”J.Pharm.Sci.1977，66，1-19。

“医药上可接受的盐”包括矿物酸、羧酸与磺酸的酸加成盐，例如：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、富马酸、马来酸与苯甲酸的盐类。

“医药上可接受的盐”亦包括一般碱的盐类，如，例如且较佳为：碱金属盐(例如：钠与钾盐)、碱土金属盐(例如：钙与镁盐)及衍生自氨或具有1至16个碳原子的有机胺(如，例如且较佳为乙基胺、二乙基胺、三乙基胺、乙基二异丙基胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己基胺、二甲基氨基乙醇、普鲁卡因(procaine)、二苯甲基胺、N-甲基吗啉、二氢松香胺(dihydroabietylamine)、精胺酸、离胺酸、乙二胺与甲基哌啶)的铵盐。

术语“烷基”指直链或分支链的烃链基团，其仅由碳与氢原子组成，仅包含碳与氢原子，不包含不饱和，具有1至8个碳原子，且其通过单键连接至其余分子，该烷基的实例如，例如：甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基、正戊基与1，1-二甲基乙基(叔丁基)。

术语“烷氧基”代表本文所定义的烷基通过氧键联连接至其余分子。该等烷氧基的代表性实例为-OCH₃、-OC₂H₆。

术语“环烷基”代表具有约3至12个碳原子的非芳香族单环或多环系，如：环丙基、环丁基、环戊基、环己基，且多环环烷基的实例包括全氢萘基、金刚烷基与原冰片基桥连环状基团或螺状双环基团，例如：螺(4，4)壬-2-基。

术语“卤素”指基团氟、氯、溴与碘。

紧邻键结的*符号代表分子中的连接点。

本案全文中，为了简化，主要以单数语法代表复数语法，但通常均包括复数语法，除非另有说明。举例而言，“一种治疗患者疾病的方法，其包括对该患者投予有效量的式(I)化合物”的说法包括同时治疗一种或多种疾病及投予一种或多种式(I)化合物。

一般代表性方法

用于制备本发明具体实施例中所使用的化合物的特定制法依所需的特定化合物而定。例如特定取代基的选择等因素在本发明特定化合物的制法所采用的途径中扮演重要角色。彼等因素为习此相关技艺的人士所能轻易了解者。

本发明化合物可采用已知化学反应及制程制备。尽管如此，仍出示下列一般制备性方法来协助读者合成本发明化合物，并在下文说明操作实例的实验一节中出示更详细的特定实例。

本发明化合物可根据习知化学方法，及/或如下文所揭示，由商业上所购得或依据例行化学方法所制得的起始材料制备。下文中提供了制备化合物的一般方法，且代表性化合物的制法具体说明在实施例中。

在本发明化合物的合成法中以及在涉及本发明化合物合成法的中间物的合成法中，可采用的合成转化法(synthetic transformation)为习此相关技艺的人士所习知者或可由习此相关技艺的人士轻易取得使用者。合成转化法收录在文献中，如：

J.March的“高级有机化学方法(Advanced Organic Chemis try)”，第4版：纽约John Wiley出版社(1992)

R.C.Larock的“有机转化法精解(Comprehensive OrganicTransformations)”，第2版；纽约Wiley-VCH出版社(1999)

F.A.Carey；R.J.Sundberg的“高级有机化学方法(Advanced OrganicChemistry)”，第2版：纽约Plenum Press出版社(1984)

T.W.Greene；P.G.M.Wuts的“有机合成法的保护基团(ProtectiveGroups in Organic Synthesis)”，第3版：纽约John Wiley出版社(1999)

L.S.Hegedus的“复合有机分子合成法中的过渡金属(TransitionMetals In the Syn thesis of Complex Organic Molecules)，第2版；University Science Books：Mill Valley，CA(1994)

LA.Paquette编辑的“有机合成法试剂百科(The Encyclopedia ofReagents for Organic Synthesis)；纽约John Wiley出版社(1994)A.R.Katritzky；O.Meth-Cohn；C.W.Rees编辑的“有机官能基转化法精解(Comprehensive Organic Functional GroupTransformations)”；英国牛津Pergamon出版社(1995)

G.Wilkinson；F.G A.Stone；E.W.Abel编辑的“有机金属化学精解(Comprehensive Organome tallic Chemis try)；英国牛津Pergamon出版社(1982)

B.M.Trost；I.Fl eming的“有机合成法精解(Comprehensive OrganicSynthesis)”；英国牛津Pergamon出版社(1991)

A.R.Katritzky；C.W.Rees编辑的“杂环化学精解(ComprehensiveHeterocyclic Chemistry)”；英国牛津Pergamon出版社(1984)

A.R.Katritzky；C.W.Rees；E.F.V.Scriven编辑的“杂环化学精解II(Comprehensive Heterocyclic Chemistry II)”；英国牛津Pergamon出版社(1996)

C.Hansch；P.G.Sammes；J.B.Taylor编辑的“医药化学精解(Comprehensive Medicinal Chemistry)”；英国牛津Pergamon出版社(1990)。

此外，合成法及相关主题的重复说明包括：纽约John Wiley的“有机反应(Organic Reactions)”；纽约JohnWiley的“有机合成法(Organic Syntheses)”；纽约John Wiley的“有机合成法的试剂(Reagents for Organic Synthesis)”；纽约JohnWiley的“天然产物的总合成法(The Total Synthesis of NaturalProducts)”；纽约John Wiley的“药物合成法的有机化学(TheOrganic Chemistry of Drug Synthesis)”；加州旧金山Academic出版社的“有机合成法年报(Annual Reports in Organic Synthesis)”；及德国Stuttgart Thieme出版社的“有机化学方法(Methoden derOrganischen Chemie(Houben-Weyl)。此外，合成转化法的资料库包括Chemical Abstracts(其可采用CAS OnLine或SciFinder搜寻)、Handbuch der Organischen Chemie(Beilstein)(其可采用SpotFire搜寻)与REACCS。

制造式(I)化合物的一般方法说明在反应图1至4。该途径使用经适当取代的式(II)的4-硝基苯甲酸作为起始物，如反应图1所示。该酸典型地使用亚硫酰氯或草酰氯转化成酰基氯，然后再与丙二酸乙酯钾(III)的镁盐偶合，产生式(IV)β-酮基酯。此化合物再与N，N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛进行缩合，产生式(V)α，β-不饱和酮，其可再与2-氨基丙二酰胺(VI)在酸(例如：乙酸与三氟乙酸)的存在下反应，加热环化后形成式(VII)吡咯。式(VII)吡咯的一级酰胺基可脱水(例如：在磷酰氯的存在下进行)，产生式(VIII)5-氰基吡咯。

反应图1

式(VIII)5-氰基吡咯可依反应图2所示进行反应。在一种反应途径中，通常R³为氟时，化合物(VIII)的硝基可经还原(例如：使用铁，在氯化铵的存在下进行，并小心控制加热)，产生式(IX)苯胺。化合物(IX)可再与胺化试剂(X)在碱(如：氢化钠)的存在下反应，产生式(XI)肼。该肼(XI)可再与甲脒乙酸盐反应，加热诱发环化，形成式XII的吡咯并三嗪。

反应图2

在第二种反应途径中，通常R³为氯时，可先将式(VIII)吡咯与胺化试剂(X)在碱(如：氢化钠)的存在下反应，产生式(XIII)肼。该肼(XIII)再与甲脒乙酸盐在环化条件下反应，产生式(XIV)吡咯并三嗪，其后续可再在雷氏镍(Raney nickel)催化条件下进行氢化反应，产生式(XII)苯胺。

式(XII)吡咯并三嗪可依反应图3所示进行反应，产生所需式(I)产物。在一种反应途径中，化合物(XII)中的苯胺可与式(XV)的胺甲酸酯试剂在弱碱(例如：三乙基胺)的存在下反应，产生式(XVI)脲。该式(XV)的胺甲酸酯试剂可由氯甲酸苯基酯与经适当取代的2-氨基吡啶反应而制得。化合物(XVI)的酯基可在碱性条件下(例如：使用1N氢氧化钠水溶液，在甲醇与THF中)水解，产生式(XVII)羧酸。此酸可再与式(XVIII)胺在标准肽偶合条件下反应，产生所需式(I)酰胺。

在第二种反应途径中，化合物(XII)的酯基可先在碱性条件下水解，产生式(XIX)羧酸，其可再与胺(XVIII)进行肽偶合反应，产生式(XX)酰胺。化合物(XX)的苯胺基可再经式(XV)胺甲酸酯处理，同样产生所需的化合物(I)。

反应图3

另一种不同在上述途径的反应涉及不同的反应顺序，如反应图4所示。在此反应顺序中，由式(XIV)酯(其中，通常R⁹为氯)在标准碱性条件下水解，产生式(XXI)羧酸。该酸(XXI)与胺(XVIII)在肽偶合条件下反应，产生式(XXII)酰胺。化合物(XXII)的硝基可经还原(例如：以阮来镍催化的氢化作用)，产生式(XX)苯胺。此化合物可依反应图3所述形成脲，以产生所需的式(I)化合物。

反应图4

式(I)游离碱亦可依反应图5所示转化成其相应的式(Ia)共轭盐。由式(I)化合物与式(XXIII)酸在溶剂(如：THF、乙腈或其与水的组合)中反应，产生式(Ia)共轭盐。酸(XXIII)可为矿物酸，如：盐酸；或有机酸，如：甲磺酸或草酸。酸(XXIII)的当量数可以变化，且所得共轭盐(Ia)的化学计量取决于所采用的特定酸(XXIII)。此等共轭盐(Ia)可提供比式(I)游离碱更为改善的溶解动力学与口中接触性质(oralexposure)。

反应图5

本发明化合物的医药组合物

本发明亦有关一种包含一种或多种本发明化合物的医药组合物。此等组合物可通过投予至有需要的患者而达成所欲的医药效果。为达本发明的目的，该患者为需要治疗特定病症或疾病的哺乳动物，包括人类。因此，本发明包括一种医药组合物，其包含医药上可接受的载剂与治疗有效量的本发明化合物或其盐。医药上可接受的载剂较佳为在符合活性成份的有效活性的浓度下对患者相当无毒且无害的载剂，因此载剂的任何不良副作用不致于损及活性成份的有利作用。化合物的治疗有效量较佳为可对所处理的特定病症产生效果或发挥影响的用量。本发明化合物可使用相关技艺已知的医药上可接受的载剂，采用任何有效的习知剂量单位形式投药，包括立即释放、缓慢释放与定时释放的制剂、经口、非经肠式、局部、经鼻、经眼部(ophthalmically、optically)、经舌下、经直肠或经阴道。

经口投药时，化合物可调配成固体或液体制剂，如：胶囊、丸剂、锭剂、糖锭、菱形锭、口含锭、粉剂、溶液、悬浮液或乳液，且可依相关技艺已知用于制造医药组合物的方法制备。该固体单位剂型可为胶囊，该胶囊通常可为包含例如界面活性剂、润滑剂与惰性填料(如：乳糖、蔗糖、磷酸钙与玉米淀粉)的硬壳或软壳明胶形式。

在另一项具体实施例中，本发明化合物可使用习知压锭基质(如：乳糖、蔗糖与玉米淀粉)，并组合使用黏结剂(如：金合欢胶、玉米淀粉或明胶)、用于促进投药后的锭剂分解与溶解的崩解剂(如：马铃薯淀粉、藻酸、玉米淀粉与关华豆胶(guar gum)、黄蓍胶、金合欢胶)、改善锭剂颗粒化的流动性并防止锭剂材料黏着在压锭模头与打锭机表面的润滑剂(例如：滑石、硬脂酸、或硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸锌)、以及意欲用于提升锭剂的美观品质并使患者更容易接受的染料、着色剂与调味剂(如：薄荷、冬青油或樱桃香料)压制成锭剂。适用于口服液体剂型的赋形剂包括磷酸二钙与稀释剂诸如：水与醇类(例如：乙醇、苯甲醇与聚乙二醇)，该口服液体剂型可添加或不添加医药上可接受的界面活性剂、悬浮剂或乳化剂。可使用各种不同材料作为包衣(coat ing)或用于修饰剂量单位的物理形式。举例而言，锭剂、丸剂或胶囊可使用虫胶、糖或两者包覆。

匀散性粉剂与粒剂适用于制备水性悬浮液。该匀散性粉剂与粒剂所提供的活性成份与匀散或湿化剂、悬浮剂及一种或多种防腐剂形成混合物。合适的匀散或湿化剂与悬浮剂实例已在上文揭示。此外，亦可包含如上文所述的其他赋形剂，例如：甜味剂、调味剂与着色剂。

本发明的医药组合物亦可呈水包油型乳液。该油相可为植物油，如：液态石蜡或植物油的混合物。合适的乳化剂可为(1)天然胶类，如：金合欢胶与黄蓍胶，(2)天然磷脂类，如：大豆与卵磷脂，(3)衍生自脂肪酸与己糖醇酐的酯或部份酯(partial ester)类，例如：山梨糖醇酐单油酸酯，(4)该部份酯与环氧乙烷的缩合产物，例如：聚氧伸乙基山梨糖醇酐单油酸酯。该乳液亦可包含甜味剂与调味剂。

油性悬浮液可通过下述方式调配：取活性成份悬浮在植物油中，举例而言，例如：花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油，或悬浮在矿物油中，如：液态石蜡。该油性悬浮液可包含增稠剂，举例而言，例如：蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。悬浮液亦可包含一种或多种防腐剂，例如：对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯；一种或多种着色剂；一种或多种调味剂；与一种或多种甜味剂，如：蔗糖或糖精。

糖浆与酏剂可采用甜味剂调配，举例而言，例如：甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖。此等调配物亦可包含缓和剂与防腐剂(如：对羟基苯甲酸甲酯与对羟基苯甲酸丙酯)，以及调味与着色剂。

本发明化合物亦可呈化合物的可注射剂型，进行非经肠式投药，亦即经皮下、静脉内、眼内、滑膜内、肌内或腹膜内投药，该化合物较佳是含在生理上可接受的稀释剂中且使用医药用载剂，该医药用载剂可为无菌液体或下列液体的混合物，如：水、生理食盐水、右旋糖水溶液与相关的糖溶液、醇类(例如：乙醇、异丙醇或十六烷醇)、二醇类(例如：丙二醇或聚乙二醇)，甘油缩酮类(例如：2，2-二甲基-1，1-二氧杂环戊烷-4-甲醇、醚类(例如：聚(乙二醇)400)、油类、脂肪酸、脂肪酸酯、或脂肪酸甘油酯类、或乙酰基化脂肪酸甘油酯类，且可添加或不添加医药上可接受的界面活性剂(例如：皂或清洁剂(detergent))、悬浮剂(例如：果胶、交联聚丙烯酸树脂(carbomer)、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或羧甲基纤维素)、或乳化剂、以及其他医药用辅剂。

可用于制备本发明非经肠式调配物的油实例为石油、动物性、植物性或合成性来源，例如：花生油、大豆油、芝麻油、棉籽油、玉米油、橄榄油、石蜡脂与矿物油。合适的脂肪酸包括：油酸、硬脂酸、异硬脂酸与肉豆蔻酸。合适的脂肪酸酯类为例如：油酸乙酯与肉豆蔻酸异丙酯。合适的皂类包括脂肪酸碱金属盐、铵盐与三乙醇胺盐类，且合适的清洁剂包括阳离子性清洁剂，例如：二甲基二烷基铵卤化物、烷基吡啶鎓卤化物与烷基胺乙酸盐；阴离子性清洁剂，例如：磺酸烷基酯、磺酸芳基酯与磺酸烯烃酯、硫酸烷基酯、硫酸烯烃酯、硫酸醚与硫酸单甘油酯、以及磺基琥珀酸酯；非离子性清洁剂，例如：脂肪胺氧化物、脂肪酸烷醇酰胺与聚(氧伸乙基-氧伸丙基)或环氧乙烷(ethylene oxide)或氧化丙烯(propylene oxide)共聚物；以及两性清洁剂，例如：烷基-β-氨基丙酸酯、与2-烷基咪唑啉四级铵盐，及混合物。

本发明的非经肠式组合物典型地在溶液中包含约0.5重量％至约25重量％的活性成份。亦适宜包含防腐剂与缓冲剂。为了尽量降低或消除注射部位的刺激，此等组合物可包含亲水-亲油平衡值(HLB)较佳在约12至约17的非离子性界面活性剂。此等调配物中的界面活性剂用量较佳在约5重量％至约15重量％的范围内。界面活性剂可为具有上述HLB值的单一成份或可为具有所欲HLB值的二种或更多种成份的混合物。

用于非经肠式调配物的界面活性剂实例为聚乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯类，例如：山梨糖醇酐单油酸酯以及环氧乙烷与疏水性碱(由氧化丙烯与丙二醇缩合形成)的高分子量加成物。

医药组合物可呈无菌注射用水性悬浮液形式。此等悬浮液可依据已知方法，使用合适的匀散或湿化剂与悬浮剂调配，举例而言，例如：羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯啶酮、黄蓍胶与金合欢胶；匀散或湿化剂，其可为天然磷脂类(例如：卵磷脂)、伸烷基氧化物(alkylene oxide)与脂肪酸的缩合产物(例如：聚氧伸乙基硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物(例如：十七伸乙基氧基鲸蜡醇)、环氧乙烷与衍生自脂肪酸与己糖醇的部份酯的缩合产物(例如：聚氧伸乙基山梨糖醇单油酸酯)、或环氧乙烷与衍生自脂肪酸与己糖醇酐的部份酯的缩合产物(例如：聚氧伸乙基山梨糖醇酐单油酸酯)。

无菌注射用制剂亦可为内含在无毒性非经肠式可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或悬浮液。可使用的稀释剂与溶剂为例如：水、林格氏溶液(Ringer’s solution)、等张性氯化钠溶液与等张性葡萄糖溶液。此外，通常使用无菌非挥发性油类作为溶剂或悬浮介质。为达此目的，任何无刺激性的非挥发性油类均可使用，包括合成的单酸-或二酸甘油酯。此外，注射用制剂中亦可使用脂肪酸类，如：油酸。

本发明组合物亦可呈栓剂形式经直肠投予药物。此等组合物通过将药物与合适的无刺激性赋形剂予以混合而制备，该组合物在一般温度下呈固态，但在直肠温度下则转呈液态，因此会在直肠中溶解以释放药物。此等材料为例如：可可脂与聚乙二醇。

本发明方法所使用的另一种调配物采用穿皮式传送装置(“贴布”)。此等穿皮式贴布可用于以控制量提供本发明化合物的连续或不连续输液(infusion)。用于传送药剂的穿皮式贴布的构造与用法为相关技艺所习知(参见例如：1991年6月11日获准的美国专利案第5,023,252号，其揭示内容已以引用方式并入本文中)。此等贴布构造可供连续式、脉冲式或依需要传送药剂。

供非经肠式投药的控制释放型调配物包括相关技艺已知的微脂粒、聚合性微球与聚合胶(polymeric gel)调配物。

可能需要或必要利用机械传送装置将医药组合物送至患者体内。用于传送药剂的机械传送装置的构造与用法为相关技艺所熟知。用于例如直接投药至脑部的直接技术通常涉及将药物传送导管置入患者脑室系统中，以绕过血脑障壁。其中一种用于将药剂传送至体内特定结构区域的植入式传送系统说明在1991年4月30日获准的美国专利案第5,011,472号中。

若必要或需要时，本发明组合物亦可包含其他常用的医药上可接受的化合成份，通常称为载剂或稀释剂。可采用习知制法来制备此等适当剂型的组合物。此等成份与制法包括彼等说明在下列参考文献者，各文献的揭示内容皆以引用方式并入本文中：Powell，M.F.等人的“非经肠式调配物的赋形剂大全(Compendium of Excipients forParenteral Formulations)”PDA Journal of Pharmaceutical Science&Technology 1998，52(5)，238-311；Strickley，R.G“美国市面上小分子医疗剂的非经肠式调配物(Parenteral Formulations of SmallMolecule Therapeutics Marketed in the United States)(1999)-第1册”PDA Journal of Pharmaceutical Science&Technology 1999，53(6)，324-349；与Nema，S.等人的“赋形剂及其在注射用产品中之用途(Excipients and Their Use in Injectable Products)”PDAJournal of Pharmaceutical Science&Technology 1997，51(4)，166-171。

可用于依所需投药途径适当调配组合物之常用医药成份包括：酸化剂(实例包括(但不限于)：乙酸、柠檬酸、富马酸、盐酸、硝酸)；碱化剂(实例包括(但不限于)：氨溶液、碳酸铵、二乙醇胺、单乙醇胺、氢氧化钾、硼酸钠、碳酸钠、氢氧化钠、三乙醇胺、三乙醇胺(trolamine))；

吸附剂(实例包括(但不限于)：纤维素粉末与活性碳)；

气雾剂推进剂(实例包括(但不限于)：二氧化碳、CCl₂F₂、F₂ClC-CClF₂与CClF₃)；

气体置换剂(实例包括(但不限于)：氮气与氩气)；

抗真菌防腐剂(实例包括(但不限于)：苯甲酸、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠)；抗微生物防腐剂(实例包括(但不限于)：氯苄烷铵、氯化苯铵松宁(benzethonium chloride)、苯甲醇、鲸蜡基吡啶鎓氯化物、氯丁醇、酚、苯乙基醇、硝酸苯汞与硫柳汞(thimerosal))；抗氧化剂(实例包括(但不限于)：抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基苯甲醚、丁基化羟基甲苯、次磷酸、单硫代甘油(monothioglycerol)、没食子酸丙酯、抗坏血酸钠、硫酸氢钠、甲醛次硫酸钠、偏亚硫酸氢钠)；

黏结性材料(实例包括(但不限于)：嵌段聚合物、天然与合成橡胶、聚丙烯酸酯、聚氨基甲酸酯、聚硅氧、聚硅氧烷与苯乙烯-丁二烯共聚物)；缓冲剂(实例包括(但不限于)：偏磷酸钾、磷酸二钾、乙酸钠、柠檬酸钠无水物与柠檬酸钠二水合物)；

载剂(实例包括(但不限于)：金合欢胶浆液、芳香族浆液、芳香族酏剂、樱桃浆、可可浆、柳橙浆、糖浆、玉米油、矿物油、花生油、芝麻油、制菌性氯化钠注射液及制菌性注射用水)；

螯合剂(实例包括(但不限于)：乙二胺四乙酸二钠及乙二胺四乙酸)；着色剂(实例包括(但不限于)：FD&C红色3号、FD&C红色20号、FD&C黄色6号、FD&C蓝色2号、D&C绿色5号、D&C橙色5号、D&C红色8号、焦糖与红色氧化铁)；

澄清剂(实例包括(但不限于)：皂土)；

乳化剂(实例包括(但不限于)：金合欢胶、聚西托醇(cetomacrogol)、鲸蜡醇、单硬脂酸甘油酯、卵磷脂、山梨糖醇酐单油酸酯、聚氧伸乙基单硬脂酸酯50)；

囊封剂(实例包括(但不限于)：明胶与纤维素乙酸酯酞酸酯)；

调味剂(实例包括(但不限于)：茴香油、肉桂油、可可、薄荷醇、柳橙油、薄荷油与香草精)；

保湿剂(实例包括(但不限于)：甘油、丙二醇与山梨糖醇)；

磨制剂(levigating agent)(实例包括(但不限于)：矿物油与甘油)；油类(实例包括(但不限于)：花生油(arachis oil)、矿物油、橄榄油、花生油(peanut oil)、芝麻油与植物油)；

油膏基质(实例包括(但不限于)：羊毛脂、亲水性油膏、聚乙二醇油膏、石蜡脂、亲水性石蜡脂、白色油膏、黄色油膏及玫瑰水油膏)；

渗透促进剂(穿皮式传送)(实例包括(但不限于)：单元醇或多元醇、单价或多价醇、饱和或不饱和脂肪醇、饱和或不饱和脂肪酯、饱和或不饱和二羧酸、精油、磷脂酰基衍生物、脑磷脂、萜类、酰胺类、醚类、酮类与脲类)；

增塑剂(实例包括(但不限于)：酞酸二乙酯与甘油)；

溶剂(实例包括(但不限于)：乙醇、玉米油、棉籽油、甘油、异丙醇、矿物油、油酸、花生油、纯水、注射用水、注射用无菌水与点滴用无菌水)；

硬化剂(实例包括(但不限于)：鲸蜡醇、鲸蜡基酯蜡、微晶蜡、石蜡、硬脂醇、白蜡与黄蜡)；

栓剂基质(实例包括(但不限于)：可可脂与聚乙二醇(混合物))；界面活性剂(实例包括(但不限于)：氯苄烷铵、壬苯醇醚(nonoxynol)10、辛苯醇醚(oxtoxynol)9、聚山梨醇酯80、月桂基硫酸钠与山梨糖醇酐单棕榈酸酯)；

悬浮剂(实例包括(但不限于)：洋菜、皂土、交联聚丙烯酸酯、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、高岭土、甲基纤维素、黄蓍胶与硅酸铝镁(veegum))；

甜味剂(实例包括(但不限于)：阿斯巴甜、右旋糖、甘油、甘露糖醇、丙二醇、糖精钠、山梨糖醇与蔗糖)；

锭剂抗黏着剂(实例包括(但不限于)：硬脂酸镁与滑石)；

锭剂黏结剂(实例包括(但不限于)：金合欢胶、藻酸、羧甲基纤维素钠、压缩糖、乙基纤维素、明胶、液态葡萄糖、甲基纤维素、非交联聚乙烯吡咯啶酮与预糊化淀粉)；

锭剂与胶囊稀释剂(实例包括(但不限于)：磷酸氢钙、高岭土、乳糖、甘露糖醇、微晶纤维素、纤维素粉末、沉淀的碳酸钙、碳酸钠、磷酸钠、山梨糖醇与淀粉)；

锭剂包衣剂(实例包括(但不限于)：液态葡萄糖、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、纤维素乙酸酯酞酸酯与虫胶)；

锭剂直接压缩赋形剂(实例包括(但不限于)：磷酸氢钙)；

锭剂崩解剂(实例包括(但不限于)：藻酸、羧甲基纤维素钙、微晶纤维素、普卡林钾(polacrillin potassium)、交联聚乙烯吡咯啶酮、藻酸钠、淀粉乙醇酸钠与淀粉)；

锭剂助流剂(实例包括(但不限于)：胶质氧化硅、玉米淀粉与滑石)；锭剂润滑剂(实例包括(但不限于)：硬脂酸钙、硬脂酸镁、矿物油、硬脂酸与硬脂酸锌)；

锭剂/胶囊遮光剂(实例包括(但不限于)：二氧化钛)；锭剂抛光剂(实例包括(但不限于)：巴西棕榈蜡与白蜡)；增稠剂(实例包括(但不限于)：蜂蜡、鲸蜡醇与石蜡)；等张剂(tonicity agent)(实例包括(但不限于)：右旋糖与氯化钠)；增黏剂(实例包括(但不限于)：藻酸、皂土、交联聚丙烯酸酯、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚乙烯吡咯啶酮、藻酸钠与黄蓍胶)；以及湿化剂(实例包括(但不限于)：十七伸乙基氧基鲸蜡醇、卵磷脂、山梨糖醇单油酸酯、聚氧伸乙基山梨糖醇单油酸酯与聚氧伸乙基硬脂酸酯)。

根据本发明的医药组合物可举例说明如下：

静脉内投药(IV)用的无菌溶液：可使用无菌注射用水制备本发明所欲化合物的5mg/mL溶液，并视需要调整pH值。将该溶液使用无菌5％右旋糖溶液稀释至1至2mg/mL，形成供投药约60分钟的IV输液。

供IV投药用的冷冻干燥粉末：此无菌制剂可使用(i)呈冷冻干燥粉末的100至1000mg所欲的本发明化合物，(ii)32至327mg/mL柠檬酸钠，与(iii)300至3000mg葡聚糖(Dextran)40予以制备。使用无菌注射用生理食盐水或5％右旋糖再组成(reconstitute)浓度10至20mg/mL的调配物，并进一步使用生理食盐水或5％右旋糖稀释至0.2至0.4mg/mL。经IV单次快速注射(bolus)或IV输液历时15至60分钟投药。

肌内投药用悬浮液：可制备下列溶液或悬浮液供肌内注射用：

50mg/mL所欲的水不溶性本发明化合物

5mg/mL羧甲基纤维素钠

4mg/mL TWEEN 80

9mg/mL氯化钠

9mg/mL苯甲醇

硬壳胶囊：大量的单位胶囊的制法为在各个标准的两节式硬明胶胶囊分别填充100mg活性成份粉末、150mg乳糖、50mg纤维素与6mg硬脂酸镁。

软明胶胶囊：制备活性成份与食用油(如：大豆油、棉籽油或橄榄油)的混合物，并利用正流量帮浦(positive displacement pump)将该混合物注入融化的明胶中，形成包含100mg活性成份的软明胶胶囊。洗涤胶囊并干燥。可将活性成份溶在聚乙二醇、甘油与山梨糖醇的混合物中，以制成可与水混溶的医药混合物。

锭剂：依习知方式制备大量锭剂，使得剂量单位为100mg活性成份、0.2mg胶质二氧化硅、5mg硬脂酸镁、275mg微晶纤维素、11mg淀粉及98.8mg乳糖。可施加适当水性与非水性包衣，以提高适口性、改善外观及安定性或延缓吸收。

立即释放型锭剂/胶囊：立即释放型锭剂/胶囊为由习知制法及新颖制法制备的固体口服剂型。此等单位不需喝水即可经口投药，立即溶解且传送药物。活性成份混合在包含例如糖、明胶、果胶与甜味剂等成份的液体中。此等液体可经由冷冻干燥与固态萃取技术固化成固态锭剂或膜衣锭。药物化合物可使用黏弹性糖类与热弹性糖类以及聚合物或发泡成份(effervescent component)压缩，以产生不需要水即可立即释放的多孔性基质。

治疗疾患的方法

本发明是有关一种使用本发明化合物及其组合物来治疗哺乳动物的疾患，特别是过度增生疾患的方法。该等化合物可用于抑制、阻断、减少、降低细胞增生及/或细胞分化等，及/或产生细胞凋亡。此方法包括对有此需要的哺乳动物(包括人类)投予可有效治疗该等疾患的特定量本发明化合物或其医药上可接受的盐、异构体、多晶型、代谢物、水合物、溶剂合物或酯等。过度增生疾患包括(但不限于)：例如，干癣、瘢痕与其他会影响皮肤的过度增生、良性摄护腺肥大(BPH)、固体肿瘤，例如乳癌、呼吸道癌、脑癌、生殖器官癌、消化道癌、泌尿道癌、眼癌、肝癌、皮肤癌、头颈部癌、甲状腺癌、副甲状腺癌与其远处转移。彼等疾患亦包括淋巴瘤、肉瘤与白血病。

乳癌的实例包括(但不限于)：侵入性乳管癌、侵入性小叶癌、原位乳管癌与原位小叶癌。

呼吸道癌的实例包括(但不限于)：小细胞与非小细胞肺癌、以及支气管腺瘤与胸膜肺胚细胞瘤。

脑癌的实例包括(但不限于)：脑干与下视丘神经胶质瘤、小脑与大脑星形细胞瘤、神经管胚细胞瘤、室管膜细胞瘤、以及神经上皮细胞瘤与松果体肿瘤。

男性生殖器官肿瘤包括(但不限于)：摄护腺与睪丸癌。女性生殖器官肿瘤包括(但不限于)：子宫内膜、子宫颈、卵巢、阴道与外阴癌、以及子宫肉瘤。

消化道肿瘤包括(但不限于)：肛门、结肠、结肠直肠、食道、胆囊、胃、胰脏、直肠、小肠与唾液腺癌。

泌尿道肿瘤包括(但不限于)：膀胱、阴茎、肾脏、肾盂、输尿管、尿道与人类乳突状肾癌。

眼癌包括(但不限于)：眼内黑色素瘤与视网膜母细胞瘤。

肝癌的实例包括(但不限于)：肝细胞癌(具有或不具有纤维板层变化(fibrolamellar variant)的肝细胞癌)、胆管癌(肝内胆管癌)与混合型肝细胞胆管癌。

皮肤癌包括(但不限于)：鳞状细胞癌瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi’ssarcoma)、恶性黑色素瘤、莫克(Merkel)细胞皮肤癌与非黑色素瘤皮肤癌。

头颈部癌包括(但不限于)：喉、下咽、鼻咽、口咽癌、唇与口腔癌、以及鳞状细胞。淋巴瘤包括(但不限于)：AIDS-相关的淋巴瘤、非何杰金氏(Hodgkin’s)淋巴瘤、皮肤T-细胞淋巴瘤、伯基特氏(Burkitt)淋巴瘤、何杰金氏症与中枢神经系统淋巴瘤。

肉瘤包括(但不限于)：软组织的肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、淋巴肉瘤与横纹肌肉瘤。

白血病包括(但不限于)：急性骨髓性白血病、急性淋巴母细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病与毛状细胞白血病。

此等疾患已在人类清楚判别出，但亦可能在其他哺乳动物中存在类似的病因学，且可通过投予本发明医药组合物来治疗。

本说明书全文中，术语“治疗”或“处理”一般用于表示例如：处理或照护个体以对抗、缓和、降低、舒解、改善疾病或疾患(如：癌)的症状等。

极光激酶在治疗抗药性(chemoresistance)的其他用途

极光激酶除了在调节细胞周期中扮演基本角色外，亦逐渐发现其可用于抗药性。举例而言，在卵巢癌中，抗药性再现为一个严重临床问题，且限制了第二线疗法的效力；因此极光激酶的运用在逆转药物抗性上的潜在临床角色可能适用于临床上。

已有证据显示极光激酶表现/活性与化疗抗性之间的相关性。举例而言，稳定地过度表现极光激酶-A的细胞株对于紫杉烷所诱发的细胞凋亡展现较高抗性(Anand S等人的Cancer Cell 2003；3：51-62)。罹患具有高含量极光激酶-A mRNA的乳房肿瘤的患者对于多烯紫衫醇(Docetaxel)治疗法的反应率(response rate)低于罹患低含量极光激酶-A mRNA乳房肿瘤的患者-41％对71％(Noguchi S.等人的Cancer Sci2006；97：813-20)。且采用小型干扰RNA系标靶(small interferingRNA-based target ing)向下调节胰脏癌细胞株的极光激酶-A时，会提高对太平洋紫杉醇(paclitaxel)的敏感性(Hata T.等人的Cancer Res2005；65：2899-905)。

依据上文所讨论的理由，由极光激酶抑制剂与标准化疗剂如(但不限于)紫杉烷类(太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多西紫杉醇(docetaxel))投药的医疗组合应可有效降低对彼等化疗剂的药物抗性。

剂量与投药法

依据习知用于评估适用于治疗过度增生疾患与血管新生疾患的化合物的标准实验室技术，采用用于测定上述哺乳动物病症治疗法的标准毒性试验及标准药物分析法，以及比较此等结果与已知用于治疗此等病症的医药结果，即可轻易决定欲用于治疗各适应症的化合物的有效剂量。用于治疗其中一种病症的活性成份投药量可随例如：所使用的特定化合物与剂量单位、投药模式、处理周期、患者年龄与性别、以及所处理病症的性质与程度等因素而大幅变化。

活性成份的总投药量范围通常为每天约0.001mg/kg至约200mg/kg体重，且较佳为每天约0.01mg/kg至约20mg/kg体重。临床上适用的剂量疗程范围为一天投药1至3次至每4周投药一次。此外，患者在某一段时间内不接受药物投予的“药物假期”可能有利于药物效应与耐受性间的整体平衡。单位剂量可包含约0.5mg至约1500mg活性成份，且可每天投予一次或多次，或低于一天一次。经注射(包括经静脉内、肌内、皮下与非经肠式注射，以及使用输液技术)投予的平均每日剂量较佳为0.01至200mg/kg总体重。平均每日直肠剂量疗程较佳为0.01至200mg/kg总体重。平均每日阴道剂量疗程较佳为0.01至200mg/kg总体重。平均每日局部剂量疗程较佳为0.1至200mg，一天可投予1至4次。穿皮式投药浓度最好要求维持每日剂量为0.01至200mg/kg。平均每日吸入剂量疗程较佳为0.01至100mg/kg总体重。

每位患者的特定初始与持续剂量疗程当然将随主治医师所诊断的病症性质与严重性、所使用的特定化合物的活性、患者的年龄与一般状况、投药时间、投药途径、药物排泄速率、药物组合而变化。本发明化合物或其医药上可接受的盐或酯或组合物所欲的治疗模式与剂量数可由习此相关技艺的人士采用一般治疗试验决定。

组合疗法

本发明化合物与组合物可作为单一药剂投药或与一种或多种额外的活性药剂组合投药，其中该组合不会引起无法接受的不良效应。举例而言，本发明化合物与组合物可组合使用已知的抗过度增生药剂或其他适应症药剂等以及其混合物与组合。

该额外的活性剂可为：阿地白介素(aldesleukin)、阿忍卓酸(alendronic acid)、阿发干扰素(alfaferone)、阿利维A酸(alitretinoin)、安乐普利诺(allopurinol)、别嘌呤醇(aloprim)、呕立舒(aloxi)、六甲嘧胺(altretamine)、氨基格鲁米特(aminoglutethimide)、胺磷汀(amifostine)、胺柔比星(amrubicin)、安啶(amsacrine)、安美达(anastrozole)、安美(anzmet)、安纳(aranesp)、阿卡宾(arglabin)、三氧化砷(arsenic trioxide)、爱罗辛(aromasin)、5-氮杂胞苷(5-azacytidine)、咪唑硫嘌呤(azathioprine)、BCG或tice BCG、氨肽酶抑制剂(bestatin)、贝他美松乙酸盐(betamethasone acetate)、贝他美松磷酸钠、蓓萨罗丁(bexarotene)、博来霉素硫酸盐(bleomycin sulfate)、安布茶碱(broxuridine)、硼替左米(bortezomib)、白消安(busulfan)、降血钙素(calcitonin)、坎帕斯(campath)、截瘤达(capecitabine)、卡铂(carboplat in)、可苏多(casodex)、希吩松(cefesone)、西莫白介素(celmoleukin)、司比定(cerubidine)、瘤克宁(chlorambucil)、顺铂(cisplatin)、克拉屈滨(cladribine)、克拉屈滨、氯膦酸(clodronicacid)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、阿糖胞苷(cytarabine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、放线菌素D(dactinomycin)、脂质体柔红霉素(DaunoXome)、地卡腙(decadron)、地卡腙磷酸盐(decadronphosphate)、戊酸雌二醇(delestrogen)、白喉毒素融合蛋白(denileukin dift itox)、狄普美卓(depomedrol)、德舍瑞林(deslorelin)、右雷佐生(dexrazoxane)、二乙烯二苯乙烯雌酚(diethylstilbestrol)、泰复肯(diflucan)、多西紫杉醇(docetaxel)、去氧氟尿(doxifluridine)、多柔比星(doxorubicin)、卓那比诺(dronabinol)、DW-166HC、伊利格(eligard)、伊利特(elitek)、表柔比星(ellence)、止敏吐(emend)、泛艾霉素(epirubicin)、人类红血球生长素-α(epoetin alfa)、红血球生成素(epogen)、依铂(eptaplatin)、尔吉咪唑(ergamisol)、伊特丝(estrace)、雌二醇(estradiol)、磷雌氮芥(estramustine)磷酸钠、乙炔雌二醇(ethinylestradiol)、益护尔(ethyol)、依替膦酸(etidronic acid)、依托泊苷(etopophos)、灭必治(etoposide)、法屈唑(fadrozole)、法丝通(farston)、非格司亭(filgrastim)、柔沛(finasteride)、利格司亭(fligrastim)、氟脲苷(floxuridine)、氟康唑(fluconazole)、氟达拉滨(fludarabine)、5-氟去氧尿苷单磷酸盐、5-氟尿嘧啶(5-FU)、氟美特隆(fluoxymesterone)、氟他胺(flutamide)、福美斯坦(formestane)、氟他宾(fosteabine)、福莫司汀(fotemustine)、氟维斯群(fulvestrant)、加玛格(gammagard)、吉西他汀(gemcitabine)、吉妥单抗(gemtuzumab)、基利克(gleevec)、格立得(gliadel)、戈舍瑞林(goserelin)、格拉司琼盐酸盐(granisetron HCl)、组氨瑞林(histrelin)、癌康定(hycamtin)、氢可酮(hydrocortone)、赤式-羟基壬基腺嘌呤(eyrthro-hydroxynonyladenine)、羟基脲、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、去甲氧基柔红霉素(idarubicin)、异环磷酰胺(ifosfamide)、干扰素-α、干扰素-α2、干扰素α-2a、干扰素α-2B、干扰素α-n1、干扰素α-n3、干扰素β、干扰素γ-1a、介白素-2、干扰能A(intron A)、艾瑞莎(iressa)、依瑞替肯(irinotecan)、克奇(kytril)、香菇多醣(lentinan)硫酸盐、来曲唑(letrozole)、若克瘤(leucovorin)、柳培林(leuprolide)、柳培林乙酸盐、左美素(levamisole)、左亚叶酸(levofolinic acid)钙盐、利弗抑(levothroid)、利法希(levoxyl)、洛莫司汀(lomustine)、氯尼达明(lonidamine)、麻利诺(marinol)、甲氯胺(mechlorethamine)、甲钴胺(mecobalamin)、助孕酮乙酸盐(medroxyprogesterone acetate)、甲地孕酮(megestrol)乙酸盐、美法仑(melphalan)、曼尼斯(menest)、6-氢硫基嘌呤、美司那(Mesna)、胺甲蝶呤(methotrexate)、美菲克斯(metvix)、灭特复星(miltefosine)、美诺四环素(minocycline)、丝裂霉素C(mitomycin C)、米托坦(mitotane)、米托蒽醌(mitoxantrone)、曲洛司坦(Modrenal)、脂质体阿霉素(Myocet)、奈达铂(nedaplatin)、新拉丝坦(neulasta)、纽美加(neumega)、纽普金(neupogen)、尼鲁米特(nilutamide)、诺瓦得士(nolvadex)、NSC-631570、OCT-43、奥曲肽(octreotide)、奥丹亚龙(ondansetron)HCl、磷酸泼尼松龙(orapred)、奥沙利铂(oxaliplatin)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、泼第瑞(pediapred)、培门冬酶(pegaspargase)、聚乙二醇干扰素(Pegasys)、喷司他丁(pentostatin)、溶链菌制剂(picibanil)、毛果芸香碱(pilocarpine)盐酸盐、吡柔比星(pirarubicin)、普卡霉素(plicamycin)、福得灵(porfimer)钠盐、泼尼莫司汀(prednimustine)、氢化泼尼松(prednisolone)、泼尼松(prednisone)、普力马林(premarin)、丙卡巴肼(procarbazine)、玻克利(procrit)、雷替曲塞(raltitrexed)、利比(rebif)、铼-186羟乙膦酸盐(etidronate)、利希美(rituximab)、洛菲能-A(roferon-A)、罗莫肽(romurtide)、舒乐津(salagen)、散德思汀(sandostatin)、沙格司亭(sargramostim)、西氮芥(semustine)、西佐喃(sizofiran)、索布佐生(sobuzoxane)、苏乐美卓(solu-medrol)、膦门冬酸(sparfosic acid)、干细胞疗法、链脲佐菌素(streptozocin)、锶-89氯化物、新乐抑(synthroid)、泰莫西芬(tamoxifen)、塔苏乐辛(tamsulosin)、塔索明(tasonermin)、塔利酮(tastolactone)、克癌易(taxotere)、替西白介素(teceleukin)、替莫唑胺(temozolomide)、替尼泊苷(teniposide)、睪固酮丙酸盐、特斯奇(testred)、硫鸟嘌呤(thioguanine)、三胺硫磷(thiotepa)、促甲状腺素(thyrotropin)、替鲁膦酸(tiludronic acid)、拓扑替康(topotecan)、托瑞米芬(toremifene)、托希姆迈(tositumomab)、曲妥珠(trastuzumab)、曲奥舒凡(treosulfan)、维生素A酸(tretinoin)、奇赛(trexall)、三甲基蜜胺、三甲曲沙(trimetrexate)、曲普瑞林乙酸盐(triptorelin acetate)、曲普瑞林双羟萘酸盐、UFT、尿苷、戊柔比星(valrubicin)、维司力农(vesnarinone)、长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春地新(vindesine)、长春瑞宾(vinorelbine)、菲乐景(virulizin)、辛卡德(zinecard)、净司他丁斯酯(zinostatin stimalamer)、卓弗兰(zofran)、ABI-007、阿考比芬(acolbifene)、阿地明(actimmune)、爱吩塔(affinitak)、氨基蝶呤(aminopterin)、阿佐普芬(arzoxifene)、黄体酮拮抗剂(asoprisnil)、阿他美坦(atamestane)、阿曲生坦(atrasentan)、BAY43-9006(索拉非尼(sorafenib))、癌思停(avastin)、CCI-779、CDC-501、希乐葆(celebrex)、爱必妥(cetuximab)、克纳妥(crisnatol)、乙酸环丙孕酮(cyproterone acetate)、地西他滨(decitabine)、DN-101、道索红霉素(doxorubicin)-MTC、dSLIM、适尿通(dutasteride)、抑卡留灵(edotecarin)、依氟鸟氨酸(eflornithine)、依喜替康(exatecan)、芬维A胺(fenretinide)、组织胺二盐酸盐、组氨瑞林(histrelin)水凝胶植入物、钬-166DOTMP、伊班膦酸(ibandronic acid)、干扰素γ、干扰能-PEG(intron-PEG)、伊沙匹隆(ixabepilone)、钥孔虫戚血蓝蛋白(keyhole limpethemocyanin)、L-651582、兰瑞(lanreotide)、拉索昔芬(lasofoxifene)、利百(libra)、洛纳法美(lonafarnib)、米泼昔芬(miproxifene)、米诺膦酸(minodronate)、MS-209、微脂粒MTP-PE、MX-6、纳法瑞林(nafarelin)、奈莫柔比星(nemorubicin)、鲨癌灵(neovastat)、诺拉曲特(nolatrexed)、欧比森(oblimersen)、onco-TCS、欧斯汀(osidem)、紫杉酚(paclitaxel)聚麸胺酸盐、帕米卓酸(pamidronate)二钠盐、PN-401、QS-21、四氟硫安定(quazepam)、R-1549、拉乐希吩(raloxifene)、豹蛙酶(ranpirnase)、13-顺式-视黄酸、塞特铂(satraplatin)、西奥骨化醇(seocalcitol)、T-138067、得舒缓(tarceva)、塔索普辛(taxoprexin)、胸腺肽α1(thymosin alpha1)、噻唑呋林(tiazofurine)、特法尼(tipifarnib)、狄帕明(tirapazamine)、TLK-286、托瑞米芬(toremifene)、TransMID-107R、瓦斯普达(valspodar)、伐普(vapreotide)、瓦他拉尼(vatalanib)、菲特普吩(verteporfin)、长春氟宁(vinflunine)、Z-100、唑来磷酸(zoledronic acid)或其组合。

可使用作为额外的活性剂的视需要选用的抗过度增生剂包括(但不限于)：在第11版默克指引(Merck Index)(1996)(其揭示内容已以引用方式并入本文中)的癌症化疗药物疗程中所列的化合物，例如：天冬胺酸酶、博来霉素(bleomycin)、卡铂(carboplatin)、卡氮芥(carmustine)、瘤克宁(chlorambucil)、顺铂(cisplatin)、克普酶(colaspase)、环磷酰胺、阿糖胞苷(cytarabine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、多柔比星(doxorubicin)(阿德里亚霉素(adriamycine))、泛艾霉素(epirubicin)、灭必治(etoposide)、5-氟尿嘧啶、六甲蜜胺、羟基脲、异环磷酰胺(ifosfamide)、依瑞替肯(irinotecan)、若克瘤(leucovorin)、洛莫司汀(lomustine)、甲氯胺(mechlorethamine)、6-氢硫基嘌呤、美司那(mesna)、胺甲蝶呤(methotrexate)、丝裂霉素C(mitomycin C)、米托蒽醌(mitoxantrone)、氢化泼尼松(prednisolone)、泼尼松(prednisone)、丙卡巴肼(procarbazine)、拉乐希吩(raloxifen)、链脲佐菌素(streptozocin)、泰莫西芬(tamoxifen)、硫鸟嘌呤(thioguanine)、拓扑替康(topotecan)、长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)与长春地新(vindesine)。

适用为额外的活性剂的其他抗过度增生剂包括(但不限于)彼等说明在Goodman and Gilman的“医疗法的药学基础(ThePharmacological Basis of Therapeutics)(第9版)，Molinoff等人编辑，McGraw-Hill出版，第1225-1287页(1996)(其揭示内容已以引用方式并入本文中)的已知可用于治疗新生赘瘤疾病的化合物，例如：氨基格鲁米特(aminoglutethimide)、L-天冬胺酸酶、咪唑硫嘌呤(azathioprine)、5-氮杂胞苷克拉屈滨(cladribine)、白消安(busulfan)、二乙烯二苯乙烯雌酚(diethylstilbestrol)、2’，2’-二氟去氧胞苷、多西紫杉醇(docetaxel)、赤式-羟基壬基腺嘌呤(eyrthro-hydroxynonyladenine)、乙炔基雌二醇、5-氟去氧尿苷、5-氟去氧尿苷单磷酸、氟达拉滨磷酸盐(fludarabine phosphate)、氟美特隆(fluoxymesterone)、氟他胺(flutami de)、羟基黄体酮己酸盐(hydroxyprogesterone caproate)、去甲氧基柔红霉素(idarubicin)、干扰素、助孕酮乙酸盐(medroxyprogesterone acetate)、甲地孕酮乙酸盐(megestrol acetate)、美法仑(melphalan)、米托坦(mitotane)、太平洋紫杉醇(palitaxel)、喷司他丁(pentostatin)、N-膦酸基乙酰基-L-天冬胺酸盐(PALA)、普卡霉素(plicamycin)、西氮芥(semustine)、替尼泊苷(teniposide)、睪固酮丙酸盐、三胺硫磷(thiotepa)、三甲基蜜胺、尿苷与长春瑞宾(vinorelbine)。

适用于作为额外的活性剂而与本发明化合物或组合物併用的其他抗过度增生剂包括(但不限于)其他抗癌剂，例如：艾普隆(epothilone)与其衍生物、依瑞替肯(irinotecan)、拉乐希吩(raloxifene)与拓扑替康(topotecan)。

实施例

缩写字与首字母缩略字

习此有机化学相关技艺的人士所采用的缩写列表可参见“ACS指南(The ACS Style Guide)(第3版)或有机化学期刊作者指南(theGuidelines for Authors for the Journal of Organic Chemistry)。该列表所包含的缩写字及习此有机化学相关技艺的人士所采用的所有缩写字已以引用方式并入本文中。为达本发明的目的，化学元素是依据“化学与物理手册(Handbook of Chemistry and Physics)”，第67版，1986-87，CAS版的元素周期表(the Periodic Table of theElements)表示。

更具体地，当本揭示内容全文采用下列缩写字时，其具有下列定义：

ATM      大气压

br s     宽单峰

C        摄氏温度

Celite      Celite公司的硅藻土助滤剂

d           双峰

dd          双重双峰

DMF         N，N-二甲基甲酰胺

DMF-DMA     N，N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛

DMSO        二甲亚砜

ES-MS       电喷洒质谱

g           公克

h           小时

¹H NMR      质子核磁共振

HPLC        高效液相层析法

J           偶合常数(NMR光谱)

L           公升

M           莫耳/公升(体积莫耳浓度)

m           多峰

MHz         百万赫兹

min         分钟

mL          毫升

μM         微莫耳浓度

mol         莫耳

MS          质谱

m/z         质量-电荷比例

N           当量/公升(当量浓度)

NMR         核磁共振

pH          氢离子浓度的负对数值

q           四峰

RT          滞留时间(HPLC)

rt          室温

s           单峰

triple      三峰

THF         四氢呋喃

下列实施例中所出示的产率百分比以所使用的起始成分的最低莫耳量为基准计。对空气及湿度敏感的液体与溶液是利用针筒或导管转移，且穿过橡皮塞而加至反应瓶中。所采用的商品级试剂与溶剂均未再纯化即使用。术语“减压浓缩”是采用布氏(Buchi)旋转蒸发器，在约15mm汞柱下进行。所有温度均未校正，以摄氏温度(℃)表示。薄层层析法(TLC)是在预先涂覆的玻璃衬硅胶60A F-254250μm板进行。

本发明化合物的结构式是利用下列一种或多种方法证实。

NMR

取得各化合物的NMR光谱，且符合所示的结构式。

一般的一维NMR光谱是在300或400MHz VarianMercury-plus光谱仪上进行。样品溶在氘化溶剂中。以ppm量度记录化学位移，并参照适当的溶剂讯号，如：¹H光谱中DMSO-d₆的2.49ppm，CD₃CN的1.93ppm，CD₃OD的3.30ppm，CD₂Cl₂的5.32ppm与CDCl3的7.26ppm。

GC/MS

电子撞击质谱(EI-MS)由加装Hewlett Packard 6890气相层析仪且使用J&W HP-5管柱(0.25μM涂层；30m×0.32mm)的HewlettPackard 5973质谱仪取得。离子源维持在250℃，光谱每次在50至550amu扫瞄0.34秒。

LC/MS

除非本文中另有说明，否则所有滞留时间均得自LC/MS且相应于分子离子(molecular ion)。高压液相层析仪-电喷洒质谱(LC/MS)是采用下列一种方法取得：

方法A(LCQ)

Hewlett-Packard 1100HPLC，其装备四元帮浦、设定在254nm的可变波长检测器、Waters Sunfire C18管柱(2.1×30mm，3.5μm)、Gilson自动取样器与具有电喷洒离子化作用的Finnigan LCQ离子阱质谱仪。依据离子源中的离子数量，采用可变离子时间，自120至1200amu扫瞄得到光谱。溶离液(eluent)为A：2％乙腈的水溶液，含0.02％TFA；以及B：2％水的乙腈溶液，含0.018％TFA。采用3.5分钟自10％B至95％B的梯度溶离，流速1.0mL/min，初期保持0.5分钟，最后保持在95％B下0.5分钟。总操作时间为6.5分钟。

方法B(LCQ5)

Agilent 1100HPLC系统。在Agilent 1100HPLC系统加装Agilent1100自动取样器、四元帮浦、设定在254nm的可变波长检测器。所采用的HPLC管柱为Waters Sunfire C-18管柱(2.1×30mm，3.5μm)。由HPLC溶离液直接偶合，不需要分流至具有电喷洒离子作用的Finnigan LCQ DECA离子阱质谱仪。依据离子源中的离子数量，使用正离子模式，采用可变离子时间，自140至1200amu扫瞄得到光谱。溶离液为A：2％乙腈的水溶液，含0.02％TFA；以及B：2％水的乙腈溶液，含0.02％TFA。采用3.0分钟自10％B至90％B的梯度溶离，流速1.0mL/min，初期保持1.0分钟，最后保持在95％B下1.0分钟。总操作时间为7分钟。

方法C(LTQ)

Agilent 1100HPLC系统。在Agilent1100HPLC系统加装Agilent1100自动取样器、四元帮浦与二极体阵列。所使用的HPLC管柱为Waters Sunfire C18管柱(2.1×30mm，3.5μm)。由HPLC溶离液分成1∶4直接偶合具有电喷洒离子作用的Finnigan LTQ离子阱质谱仪。依据离子源中的离子数量，使用正或负离子模式，采用可变离子时间，自50至8000amu扫瞄得到光谱。溶离液为A：水，含0.1％甲酸；以及B：乙腈，含0.1％甲酸。采用3.0分钟自10％B至90％B的梯度溶离，流速1.0mL/min，初期保持2.0分钟，最后保持在95％B下1.0分钟。总操作时间为8.0分钟。

制备型HPLC：

制备型HPLC是以逆相模式，典型地使用加装两个Gilson 322帮浦、一个Gilson 215自动取样器、Gilson二极体阵列检测器与一支C-18管柱(例如：YMC Pro 20×150mm，120A)的Gilson HPLC系统进行。使用溶剂A：水，含0.1％TFA；以及溶剂B：乙腈，含0.1％TFA进行梯度溶离。将溶液注入管柱后，典型地以混合溶剂梯度(如：10至90％溶剂B含于溶剂A)，以15分钟时间，流速25mL/min溶离化合物。在254或220nm的UV监测下，收集含所欲产物的溶离份(fract ion)。

制备型MPLC：

制备型中压液相层析法(MPLC)是使用标准硅胶“快速层析法”技术(例如：Still，W.C.等人的J.Org.Chem.1978，43，2923-5)或使用硅胶卡管(cartridge)与装置(如：Biotage Flash Systems)进行。依实验方法的说明，使用多种不同溶离溶剂。

为了可更了解本发明，出示下列实施例。此等实施例仅供说明，不应理解为以任何形式限制本发明的范围。本文所述及所有文献的揭示内容皆以引用方式完全并入本文中。

中间物

中间物A

3-(3-氟-4-硝基苯基)-3-侧氧基丙酸乙酯制法

滴加(30min)亚硫酰氯(96.4g，810mmol)至含有3-氟-4-硝基苯甲酸(100g，540mmol)的1，2-二氯乙烷(500mL)与DMF(1mL)溶液中。反应加温(70℃)4小时，冷却至室温。减压蒸发挥发性物质，产生中间物酰基氯。此物质溶于THF(500mL)后，过滤移除残留固体。

添加氯化镁至冷却(10℃)的含有丙二酸单乙酯钾盐(276g，1620mmol)与三乙基胺(164g，1620mmol)的THF(1500mL)悬浮液中。在室温下激烈搅拌此混合物(顶置式搅拌器)12小时后，冷却(0℃)。滴加(30min)过滤的酰基氯的THF溶液。使反应回升至室温，搅拌12小时后，冷却(10℃)。慢慢添加4N盐酸(1L)，同时维持反应温度在20℃以下。加水(1L)稀释中止反应后，以乙酸乙酯(3X 1L)萃取。合并的有机萃取液经饱和碳酸氢钠水溶液(2X 1L)、水(1L)与盐水(1L)洗涤，经硫酸钠脱水，减压蒸发，产生所欲产物(134g，97％)，为互变异构体的混合物。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)互变异构体1：δ12.24(s，1H)，7.85-8.32(m，3H)，6.22(S，3H)，4.25(q，J＝7.0Hz，2H)，1.26(t，J＝7.0Hz，3H)：互变异构体2：δ7.90-8.38(m，3H)，4.30(s，2H)，4.11(q，J＝7.1Hz，2H)，1.17(t，J＝7.1Hz，3H)；ES-MS m/z254.1(M-H)-；HPLC RT(方法C)3.14分钟。

中间物B

2-(3-氟-4-硝基苯甲酰基)-3-(二甲基氨基)丙烯酸乙酯制法

滴加(10min)N，N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(100g，810mmol)至冷却(0℃)的含中间物A(138g，540mmol)的甲苯(540mL)溶液中。使反应升温(50℃)2.5小时后，减压蒸发移除挥发性物质，产生所欲产物(167g，100％)，其纯度(NMR测定＞95％)足以继续进行反应，不需要再纯化。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ8.24-8.29(m，1H)，7.92(s，1H)，7.60-7.74(m，1H)，7.58-7.62(m，1H)，3.97(q，J＝7.0Hz，2H)，3.44(s，3H)，2.81(s，3H)，0.99(t，J＝7.0Hz，3H)；ES-MS m/z 310.9(MH)⁺；HPLC RT(方法B)2.87分钟。

中间物C

5-胺甲酰基-4-(3-氯-4-硝基苯基)-1H-吡咯-3-甲酸乙酯制法

添加2-氨基丙二酰胺(36.5g，312mmol)至含中间物B(74.4g，240mmol)的乙酸(300mL)搅拌溶液中。使悬浮液升温(80℃)2小时后，减压蒸发乙酸。残质溶在三氟乙酸(300mL)，所得溶液升温(60℃)4小时。减压蒸发三氟乙酸，以冷乙醇(2X 50mL)与乙醚(3×50mL)洗涤固体，产生所欲产物(58.8g，76％)。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ12.35(s，1H)，8.12(dd，J＝8.3，8.3Hz，1H)，7.63(s，1H)，7.52(d，J＝12.3Hz，1H)，7.25-7.50(m，2H)，6.74(s，1H)，4.06(q，J＝7.1Hz，2H)，1.11(t，J＝7.1Hz，3H)；ES-MS m/z 322.0(MH)⁺；HPLC RT(方法B)2.79分钟。

中间物D

5-氰基-4-(3-氟-4-硝基苯基)-1H-吡咯-3-甲酸乙酯制法

添加磷酰氯(87.0g，565mmol)至加装顶置式搅拌器的含中间物C(121g，377mmol)的甲苯(750mL)悬浮液中。加热悬浮液(80℃)，在定期添加甲苯(共200mL)下搅拌6小时，洗下烧瓶壁上的固体后，减压蒸发挥发性物质。残质悬浮在甲苯(500mL)，蒸发移除残留的磷酰氯(重复此操作2次)。添加冷水(750mL)，使用5N氢氧化钠水溶液调整混合物至pH 8。过滤收集固体并干燥，产生所欲产物(110g，96％)；¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ12.90(s，1H)，7.75(s，1H)，7.07(dd，J＝8.2，8.2Hz，1H)，7.77(dd，J＝12.4，1.8Hz，1H)，7.51-7.62(m，1H)，4.16(q，J＝7.1Hz，2H)，1.19(t，J＝7.1Hz，3H)；ES-MS m/z304.1(MH)⁺；HPLC RT(方法A)3.19分钟。

中间物E：

4-(4-氨基-3-氟苯基)-5-氰基-1H-吡咯-3-甲酸乙酯制法

添加铁(Alrich目录编号20930-9，24.9g，445mmol)与氯化铵(4.80g，89.7mmol)至加装顶置式搅拌器的含中间物D(45.0g，148mmol)的乙醇(540mL)与水(180mL)悬浮液中。使反应升温(70℃)2小时后，冷却至室温。以甲醇(500mL)稀释混合物后，经寅氏盐(Celite)填料过滤。滤饼经甲醇(1L)与乙腈(2L)彻底洗涤，蒸发合并的滤液。残质溶在乙酸乙酯(1.5L)后，以水(500mL)与盐水(500mL)洗涤。有机层经硫酸钠脱水并减压蒸发，产生含量微量杂质(＜5％)的所欲产物(38.0g，94％)。该产物未再纯化即用于下一个步骤。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ13.36(s，1H)，8.25(dd，J＝12.8，2.0Hz，1H)，6.92-6.97(m，1H)，6.72-6.79(m，1H)，5.35(s，2H)，4.10(q，J＝7.0Hz，2H)，1.16(t，J＝7.0Hz，3H)；ES-MS m/z 274.3(MH)⁺；HPLC RT(方法A)2.62分钟。

中间物F

1-氨基-4-(4-氨基-3-氟苯基)-5-氰基-1H-吡咯-3-甲酸乙酯制法

分批添加氢化钠(60％油匀散液，1.7g，43mmol)至含中间物E(9.0g，33mmol)的DMF(290mL)溶液中。搅拌悬浮液30min后，添加(氨基氧基)(二苯基)膦氧化物(9.9g.43mmol)。反应升温(60℃)4小时后，冷却至室温。慢慢添加水(10mL)中止反应，减压蒸发溶剂。残质溶在乙酸乙酯(500mL)，以饱和碳酸氢钠水溶液(2×250mL)与盐水(250mL)洗涤溶液。有机层经硫酸钠脱水并蒸发。残质与乙醚磨制，产生所欲产物(7.8g，82％)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ7.57(s，1H)，7.05(dd，J＝12.7，2.0Hz，1H)，6.91-6.95(m，1H)，6.75(dd，J＝9.5，8.4Hz，1H)，6.57(s，2H)，5.36(s，2H)，4.09(q，J＝7.0Hz，2H)，1.16(t，J＝7.0Hz，3H)；ES-MS m/z 289.0(MH)⁺；HPLC RT(方法B)2.61分钟。

中间物G

4-氨基-5-(4-氨基-3-氟苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酸乙酯制法

添加甲脒乙酸盐(22.4g，215mmol)至含有中间物F(6.2g，21.5mmol)的正丁醇(100mL)悬浮液中。反应加热(100C)16小时后，冷却至室温。减压移除溶剂后，添加乙醇(50mL)与水(200mL)。搅拌混合物30min，过滤收集所得沉淀。以水(2×50mL)洗涤固体并干燥，产生所欲产物(5.80g，85％)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ8.08(s，1H)，8.00-8.10(br s，1H)，7.90(s，1H)，7.03(dd，J＝12.3，1.9Hz，1H)，6.77-6.88(m，2H)，5.36(s，2H)，5.21-5.31(br  s，1H)，4.06(q，J＝7.1Hz，2H)，1.11(t，J＝7.1Hz，3H)；ES-MS m/z 316.4(MH)⁺；HPLCRT(方法B)2.39分钟。

中间物H

4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酸乙酯

添加中间物G(7.00g，22.2mmol)至含有(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酸苯基酯(10.1g，44.4mmol)与三乙基胺(9.3mL，66.6mmol)的DMF(50mL)溶液中。在室温下搅拌反应混合物16小时后，加水(300mL)稀释。以乙酸乙酯(3×100mL)萃取混合物，合并的有机萃取液经水(2×200mL)与盐水(200mL)洗涤。有机层经硫酸钠脱水并蒸发。所得固体与乙醚磨制，产生所欲产物(8.8g，88％)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.94(s，1H)，8.36(dd，J＝8.5，8.5Hz，1H)，8.14(s，1H)，7.95-8.09(br s，1H)，7.94(s，1H)，7.66(dd，J＝7.8，7.8Hz，1H)，7.35(dd，J＝11.9，2.0Hz，1H)，7.16(dd，J＝8.5，1.8Hz，1H)，6.95-7.03(m，1H)，6.90(d，J＝7.4Hz，1H)，5.26-3.34(br s，1H)，4.08(q，J＝7.2Hz，2H)，2.46(s，3H)，1.10(t，J＝7.2Hz，3H)；ES-MSm/z 450.2(MH)⁺；HPLC RT(方法A)2.86分钟。

中间物I

4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酸制法

添加1N氢氧化钠水溶液(20mL，20mmol)至含有中间物H(4.50g，10.0mmol)的THF(35mL)与乙醇(35mL)悬浮液中。加热反应混合物(65℃)16小时后，冷却至室温。添加盐酸(4N的1，4-二烷溶液，7.5mL，30mmol)，减压移除挥发性物质。残质经水洗涤后，与丙酮与乙醚磨制，产生所欲产物(3.0g，71％)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ12.32-12.49(br s，1H)，9.93(s，1H)，8.34(dd，J＝8.5，8.5Hz，1H)，8.06(s，1H)，7.95-8.03(br s，1H)，7.91(s，1H)，7.66(dd，J＝7.8，7.8Hz，1H)，7.34(dd，J＝12.0，1.9Hz，1H)，7.15(dd，J＝8.5，1.8Hz，1H)，6.96-7.03(m，1H)，6.90(d，J＝7.4Hz，1H)，5.25-3.34(brs，1H)，2.46(s，3H)；ES-MS m/z 422.3(MH)⁺；HPLC RT(方法B)2.13分钟。

中间物J

4-氨基-5-(4-氨基-3-氟苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酸制法

采用中间物I的制法制备标题化合物，但其中改用中间物G替代中间物H。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ12.20-12.30(br s，1H)，8.03(s，1H)，7.94-8.05(br s，1H)，7.89(s，1H)，7.02(dd，J＝12.4，2.0Hz，1H)，6.73-6.92(m，2H)，5.22-5.47(br s，1H)，5.12-5.25(br s，1H)；ES-MS m/z 288.0(MH)⁺HPLC RT(方法A)1.13分钟。

中间物K

4-氨基-5-(4-氨基-3-氟苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

添加中间物J(24.6g，85.6mmol)至含有2，2，2-三氟-1-氨基乙烷(42.4g，428mmol)、苯并三唑基氧基参(二甲基氨基)鏻PF6(56.8g，128mmol)与4-甲基吗啉(43.3g，428mmol)的DMF(500mL)混合物中。在室温下搅拌反应混合物16小时。过滤单离所得沉淀后，以丙酮与乙醚洗涤，产生所欲产物(22g，70％)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ8.37(dd，J＝8.5，8.5Hz，1H)，8.12(s，1H)，7.94(s，1H)，7.92-8.03(br s，1H)，7.89(s，1H)，6.99(dd，J＝12.2，1.8Hz，1H)，6.85(dd，J＝12.2，1.8Hz，1H)，6.74-6.6.82(m，1H)，5.35(s，2H)，5.13-3.22(br s，1H)，3.87-4.01(m，2H)；ES-MS m/z 369.2(MH)⁺；HPLC RT(方法B)2.05分钟。

中间物L

4-氨基-5-(4-氨基-3-氟苯基)-N-叔丁基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

采用中间物K的制法制备标题化合物，但其中改用叔丁基胺替代2，2，2-三氟-1-氨基乙烷。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ7.96(s，1H)，7.87(s，1H)，7.07(dd，J＝12.3，1.9Hz，1H)，6.92(dd，J＝8.1，1.9Hz，1H)，6.81-6.6.89(m，1H)，5.44(s，2H)，1.16(s，9H)；ES-MSm/z 343.1(MH)⁺；HPLC RT(方法A)2.11分钟。

中间物M

3-(3-氯-4-硝基苯基)-3-侧氧基丙酸乙酯制法

采用中间物A的制法制备标题化合物，但其中改用3-氯-4-硝基苯甲酸替代3-氟-4-硝基苯甲酸。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)互变异构体1：δ12.47(s，1H)，8.21(d，J＝1.8Hz，1H)，8.16(d，J＝8.6Hz，1H)，8.04(dd，J＝8.5，1.9Hz，1H)，6.24(s，1H)，4.25(q，J＝7.1Hz，2H)，1.26(t，J＝7.1Hz)；互变异构体2：δ8.27(d，J＝1.8Hz，1H)，8.22(d，J＝6.6Hz，1H)，8.09(dd，J＝8.4，1.9Hz，1H)，4.32(s，2H)，4.11(q，J＝7.1Hz，2H)，1.17(t，J＝7.1Hz，3H)；ES-MS m/z 270.0(M-H)^-；HPLCRT(方法C)4.80分钟。

中间物N

2-(3-氯-4-硝基苯甲酰基)-3-(二甲基氨基)丙烯酸乙酯制法

采用中间物B的制法制备标题化合物，但其中改用中间物M替代中间物A。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ8.09(d，J＝8.5Hz，1H)，7.83(s，1H)，7.77(s，1H)，7.65(dd，J＝8.2，1.7Hz，1H)，3.87(q，J＝7.1Hz，2H)，3.32(s，3H)，2.71(s，3H)，0.89(t，J＝7.1Hz，3H)；ES-MS m/z326.8(MH)⁺；HPLC RT(方法A)3.00分钟。

中间物O

5-胺甲酰基-4-(3-氯-4-硝基苯基)-1H-吡咯-3-甲酸乙酯制法

采用中间物C的制法制备标题化合物，但其中改用中间物N替代中间物B。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ12.25(s，1H)，8.00(d，J＝8.5Hz，1H)，7.59-7.63(m，2H)，7.42(dd，J＝8.5，1.8Hz，1H)，7.25-7.38(br s，1H)，6.68-7.79(brs，1H)，4.02(q，J＝7.1Hz，2H)，1.07(t，J＝7.1Hz，3H)：ES-MS m/z 337.9(MH)⁺；HPLC RT(方法A)2.89分钟。

中间物P

4-(3-氯-4-硝基苯基)-5-氰基-1H-吡咯-3-甲酸乙酯制法

采用中间物D的制法制备标题化合物，但其中改用中间物O替代中间物C。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ13.30(s，1H)，8.14(d，J＝8.4Hz，1H)，7.91(s，1H)，7.87(d，J＝2.0Hz，1H)，7.65(dd，J＝8.4，1.8Hz，1H)，4.12(q，J＝7.1Hz，2H)，1.14(t，J＝7.1Hz，3H)；ES-MS m/z318.1(M-H)^-：HPLC RT(方法A)4.88分钟。

中间物Q

1-氨基-4-(3-氯-4-硝基苯基)-5-氰基-1H-吡咯-3-甲酸乙酯制法

以15分钟时间分3批添加氢化钠(60％矿物油匀散液，1.36g，33.9mmol)至含有中间物P(8.34g，26.1mmol)的DMF(230mL)溶液中。在室温下搅拌混合物30分钟。一次添加全量(氨基氧基)(二苯基)膦氧化物(8.51g，37.3mmol)。加热混合物(60℃)一夜。混合物冷却至室温，以乙酸乙酯(500mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(250mL)与水(500mL)稀释。分层，水层经乙酸乙酯(2×500mL)萃取。合并的有机萃取液经水与盐水洗涤，经硫酸钠脱水并减压浓缩，产生全收量(quantitativeyield)粗产物，其未再纯化即用于下一个步骤。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ8.14(d，J＝8.3Hz，1H)，7.85(d，J＝1.7Hz，1H)，7.72(s，1H)，7.62(dd，J＝8.5，1.9Hz，1H)，6.72(s，2H)，4.11(q，J＝7.1Hz，2H)，1.14(t，J＝7.1Hz，3H)；ES-MS m/z 335.1(MH)⁺HPLC RT(方法A)3.40分钟。

中间物R

4-氨基-5-(3-氯-4-硝基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酸乙酯制法

添加甲脒乙酸盐(27.1g，260mmol)至含有中间物Q(8.70g，26.0mmol)的正丁醇(120mL)溶液中。加热反应(100℃)16小时后，冷却至室温。减压蒸发溶剂。残质经硅胶层析法，使用10至50％梯度的乙酸乙酯的己烷溶液作为溶离液纯化，产生所欲产物(4.10g，44％)。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ8.20(s，1H)，8.08(d，J＝8.2Hz，1H)，7.97(s，1H)，7.79(d，J＝1.8Hz，1H)，7.54(dd，J＝1.7，8.4Hz，1H)，4.08(q，J＝7.1Hz，2H)，1.09(t，J＝7.1Hz，3H)；ES-MS m/z 362.1(MH)⁺；HPLC RT(方法A)3.06分钟。

中间物S

4-氨基-5-(4-氨基-3-氯苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酸乙酯制法

取含有中间物R(0.74g，2.05mmol)、阮来镍(约300至500mg)与乙醇(20mL)的混合物在氢气(1atm)下搅拌一夜。悬浮液经乙醇(500mL)稀释，经寅氏盐垫过滤，使用乙醇润洗。滤液减压浓缩至干。残质经HPLC使用35至60％梯度的乙腈水溶液纯化，产生所欲产物(0.36g，53％)。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ8.11(s，1H)，8.00-8.09(br s，1H)，7.93(s，1H)，7.24(d，J＝2.0Hz，1H)，7.04(dd，J＝8.2，2.0Hz，1H)，6.85(d，J＝8.3Hz，1H)，5.59(s，2H)，5.20-5.30(br s，1H)，4.10(q，J＝7.1Hz，2H)，1.13(t，J＝7.1Hz，3H)；ES-MS m/z 332.2(MH)⁺；HPLCRT(方法B)2.64分钟。

中间物T

4-氨基-5-(3-氯-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酸乙酯制法

采用中间物H的制法制备标题化合物，但其中改用中间物S替代中间物G。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ10.03(s，1H)，8.43(d，J＝8.5Hz，1H)，8.15(s，1H)，7.99-8.11(br s，1H)，7.94(s，1H)，7.62-7.70(m，1H)，7.54(d，J＝1.9Hz，1H)，7.32(dd，J＝8.6，1.9Hz，1H)，6.91-7.02(br s，1H)，6.90(d，J＝7.4Hz，1H)，5.37-5.48(brs，1H)，4.08(q，J＝7.1Hz，2H)，2.47(s，3H)，1.11(t，J＝7.1Hz，3H)；ES-MS m/z 466.2(MH)⁺；HPLC RT(方法B)3.13分钟。

中间物U

4-氨基-5-(3-氯-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酸制法

采用中间物I的制法制备标题化合物，但其中改用中间物T替代中间物H。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ10.03(s，1H)，8.41(d，J＝8.6Hz，1H)，8.12(s，1H)，8.00-8.16(br s，1H)，7.95(s，1H)，7.62-7.70(m，1H)，7.53(d，J＝2.1Hz，1H)，7.32(dd，J＝8.5，2.0Hz，1H)，6.92-7.04(br s，1H)，6.90(d，J＝7.3Hz，1H)，5.42-5.54(brs，1H)，2.47(s，3H)；ES-MS m/z 438.2(MH)⁺；HPLC RT(方法A)2.57分钟。

中间物V

4-氨基-5-(3-氯-4-硝基苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酸制法

采用中间物I的制法制备标题化合物，但其中改用中间物R替代中间物H。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ12.47-12.56(br s，1H)，8.15(s，1H)，8.07(d，J＝8.2Hz，1H)，7.96(s，1H)，7.77(d，J＝1.8Hz，1H)，7.55(dd，J＝8.3，1.8Hz，1H)；ES-MS m/z 334.1(MH)⁺；HPLC RT(方法B)2.45分钟。

中间物W

4-氨基-5-(3-氯-4-硝基苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

采用中间物K的制法制备标题化合物，但其中改用中间物V替代中间物J。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ8.79(t，J＝6.3Hz，1H)，8.28(s，1H)，8.06(d，J＝8.3Hz，1H)，7.97(s，1H)，7.68(d，J＝1.8Hz，1H)，7.48(dd，J＝8.2，1.9Hz，1H)，3.91-4.01(m，2H)；ES-MS m/z415.1(MH)⁺；HPLC RT(方法A)2.83分钟。

中间物X

4-氨基-5-(4-氨基-3-氯苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

采用中间物S的制法制备标题化合物，但其中改用中间物W替代中间物R。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ8.44(t，J＝6.3Hz，1H)，8.13(8.1H)，7.91-8.02(br s，1H)，7.89(s，1H)，7.17(d，J＝2.0Hz，1H)，6.99(dd，J＝8.2，2.0Hz，1H)，6.80(d，J＝8.5Hz，1H)，5.54(s，2H)，5.08-5.24(br s，1H)，3.88-4.00(m，2H)；ES-MS m/z 385.1(MH)⁺；HPLC RT(方法A)2.27分钟。

中间物Y

(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酸苯基酯制法

滴加氯甲酸苯基酯(232mL，1.84mol)(1.5小时)至冷却(0℃)的2-氨基-6-皮考啉(2-amino-6-picoline)(200g，1.84mol)与吡啶(448mL，5.55mol)的THF(1.6L)溶液中。搅拌反应并继续冷却15小时。慢慢(30min)加水(500mL)后，以乙酸乙酯(2L)稀释混合物。分层，有机层经1N盐酸(3×1L)、1N氢氧化钠水溶液(500mL)与盐水(500mL)洗涤。有机层经硫酸钠脱水并减压浓缩。残质悬浮在己烷(500mL)中30分钟后，过滤，产生含有一些微量杂质的所欲产物(220g，52％)。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ10.68(s，1H)，6.93-7.74(m，8H)，2.42(s，3H)；ES-MS m/z 229.4(MH)⁺；HPLC RT(方法A)2.94分钟。

中间物Z

(6-乙基吡啶-2-基)胺甲酸苯基酯制法

采用中间物Y的制法制备标题化合物，但其中改用2-氨基-6-乙基吡啶替代2-氨基-6-皮考啉。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ10.60(s，1H)，6.67-7.73(m，8H)，2.64(q，J＝7.5Hz，2H)，1.24(t，J＝7.5Hz，3H)；ES-MS m/z 243.1(MH)⁺；HPLC RT(方法A)2.46分钟。

实施例

实施例1

4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

添加中间物I(75mg，0.18mmol)至含有甲基胺盐酸盐(60mg，0.89mmol)、苯并三唑基氧基参(二甲基氨基)鏻PF6(118mg，0.27mmol)与4-甲基吗啉(90mg，0.89mmol)的DMF(2mL)混合物中。在室温下搅拌反应16小时后，过滤。滤液经HPLC，使用25％至85％梯度的乙腈水溶液溶离纯化，产生所欲产物(25mg，32％)；¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.93(s，1H)，8.32(dd，J＝8.4，8.4Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.90(s，1H)，7.88-7.97(br s，1H)，7.66(dd，J＝7.8，7.8Hz，1H)，7.30(dd，J＝11.9，1.9Hz，1H)，7.12(dd，J＝8.4，1.8Hz，1H)，6.93-7.03(brd，1H)，6.90(d，J＝7.4Hz，1H)，2.63(d，J＝4.6Hz，3H)，2.46(s，3H)：ES-MS m/z 435.1(MH)⁺；HPLC RT(方法A)1.80分钟。

实施例2

4-氨基-N-乙基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

采用实施例1的制法制备标题化合物，但其中改用乙基胺盐酸盐替代甲基胺盐酸盐。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.93(s，1H)，8.32(dd，J＝8.4，8.4Hz，1H)，8.09(s，1H)，7.90(s，1H)，7.84-7.95(br s，1H)，7.66(dd，J＝7.7，7.7Hz，1H)，7.30(dd，J＝12.0，1.8Hz，1H)，7.12(dd，J＝8.4，1.7Hz，1H)，6.96-7.05(br d，1H)，6.90(d，J＝7.4Hz，1H)，3.06-3.19(m，2H)，2.46(s，3H)，1.08(t，J＝7.2Hz，3H)；ES-MS m/z449.1(MH)⁺；HPLC RT(方法B)2.44分钟。

实施例3

4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-丙基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

采用实施例1的制法制备标题化合物，但其中改用丙基胺替代甲基胺盐酸盐。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.93(s，1H)，8.32(dd，J＝8.5，8.5Hz，1H)，8.09(s，1H)，7.90(s，1H)，7.86(dd，J＝5.7，5.7Hz，1H)，7.66(dd，J＝7.8，7.8Hz，1H)，7.30(dd，J＝12.2，2.0Hz，1H)，7.12(dd，J＝8.3，1.7Hz，1H)，6.95-7.04(br d，1H)，6.90(d，J＝7.4Hz，1H)，3.05(q，J＝6.5Hz，2H)，2.45(s，3H)，1.33-1.44(m，2H)，0.79(t，J＝7.4Hz，3H)；ES-MS m/z 463.1(MH)⁺；HPLC RT(方法B)2.59分钟。

实施例4

4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

采用实施例1的制法制备标题化合物，但其中改用2，2，2-三氟-1-氨基乙烷替代甲基胺盐酸盐。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.94(s，1H)，8.58(dd，J＝6.4，6.4Hz，1H)，8.33(dd，J＝8.4，8.4Hz，1H)，8.20(s，1H)，7.93(s，1H)，7.66(dd，J＝7.9，7.9Hz，1H)，7.30(dd，J＝12.2，1.9Hz，1H)，7.12(dd，J＝8.4，1.8Hz，1H)，6.96-7.04(br d，1H)，6.91(d，J＝7.5Hz，1H)，3.90-4.01(m，2H)，2.46(s，3H)；ES-MS m/z503.2(MH)⁺；HPLC RT(方法A)3.00分钟。

实施例5

4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-异丁基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

采用实施例1的制法制备标题化合物，但其中改用异丁基胺替代甲基胺盐酸盐。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.93(s，1H)，8.33(dd，J＝8.5，8.5Hz，1H)，8.09(s，1H)，7.91(s，1H)，7.81(dd，J＝5.7，5.7Hz，1H)，7.66(dd，J＝7.8，7.8Hz，1H)，7.30(dd，J＝12.1，1.9Hz，1H)，7.13(dd，J＝8.2，1.6Hz，1H)，6.96-7.04(br d，1H)，6.90(d，J＝7.4Hz，1H)，2.92(t，J＝6.4Hz，2H)，2.45(s，3H)，1.61-1.72(m，2H)，0.78(d，J＝7.6Hz，3H)：ES-MS m/z 477.1(MH)⁺HPLC RT(方法A)3.02分钟。

实施例6

4-氨基-N-环丙基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

采用实施例1的制法制备标题化合物，但其中改用环丙基胺替代甲基胺盐酸盐。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.95(s，1H)，8.34(dd，J＝8.3，8.3Hz，1H)，8.09(s，1H)，7.98(d，J＝4.1Hz，1H)，7.92(s，1H)，7.68(dd，J＝7.9，7.9Hz，1H)，7.31(dd，J＝12.2，1.8Hz，1H)，7.13(dd，J＝8.4，1.7Hz，1H)，6.98-7.08(br d，1H)，6.92(d，J＝7.4Hz，1H)，2.62-2.71(m，2H)，2.48(s，3H)，0.58-0.65(m，2H)，0.40-0.47(m，2H)；ES-MS m/z 461.2(MH)⁺；HPLC RT(方法A)2.56分钟。

实施例7

4-氨基-N-乙基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-甲基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

采用实施例1的制法制备标题化合物，但其中改用N-乙基-N-甲基胺替代甲基胺盐酸盐。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.93(s，1H)，8.36(dd，J＝8.5，8.5Hz，1H)，7.91(s，1H)，7.87(s，1H)，7.66(dd，J＝7.4，7.4Hz，1H)，7.28-7.37(m，1H)，7.10-7.15(m，1H)，6.95-7.03(br d，1H)，6.90(d，J＝7.4Hz，1H)，3.05-3.37(m，2H)，2.81and 2.60(2s，3H)，2.44(s，3H)，0.78-0.96(m，3H)；ES-MS m/z463.1(MH)⁺；HPLC RT(方法A)2.90分钟。

实施例8

4-氨基-N-[2-(二甲基氨基)乙基]-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

采用实施例1的制法制备标题化合物，但其中改用N，N-二甲基乙二胺替代甲基胺盐酸盐。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.94(s，1H)，8.37(dd，J＝8.4，8.4Hz，1H)，8.06(s，1H)，7.90(s，1H)，7.66(dd，J＝7.7，7.7Hz，1H)，7.30-7.40(m，1H)，7.13-7.19(m，1H)，6.96-7.03(br d，1H)，6.90(d，J＝7.4Hz，1H)，3.17(q，J＝6.6Hz，2H)，2.45(s，3H)，2.21(t，J＝6.6Hz，2H)，2.03(s，6H)；MS[M+H]⁺＝492.1；LCMS RT＝1.97分钟(方法B)。ES-MS m/z 492.1(MH)⁺；HPLCRT(方法B)1.97分钟。

实施例9

4-氨基-N-叔丁基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

采用实施例1的制法制备标题化合物，但其中改用叔丁基胺替代甲基胺盐酸盐。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.94(s，1H)，8.37(dd，J＝8.4，8.4Hz，1H)，8.05(s，1H)，7.89(s，1H)，7.66(dd，J＝8.0，8.0Hz，1H)，7.33(dd，J＝12.0，1.9Hz，1H)，7.13(dd，J＝8.5，1.7Hz，1H)，6.97-7.04(br d，1H)，6.93(s，1H)，6.90(d，J＝7.4Hz，1H)，2.45(s，3H)，1，20(s，9H)；ES-MS m/z 477.2(MH)⁺HPLC RT(方法A)2.67分钟。

实施例10

4-氨基-N-叔丁基-5-(4-{[(6-乙基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}-3-氟苯基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

采用中间物H的制法制备标题化合物，但其中改用中间物L替代中间物G，及改用(6-乙基吡啶-2-基)胺甲酸苯基酯替代(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酸苯基酯。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.93(s，1H)，8.35(dd，J＝8.4，8.4Hz，1H)，8.05(s，1H)，7.89(s，1H)，7.68(dd，J＝8.2，7.5Hz，1H)，7.32(dd，J＝11.8，2.0Hz，1H)，7.15(dd，J＝8.5，1.8Hz，1H)，6.98-7.06(br d，1H)，6.89-6.95(m，2H)，2.73(q，J＝7.4Hz，2H)，1.26(t，J＝7.4Hz，3H)，1.21(s，9H)；ES-MS m/z 491.3(MH)⁺；HPLC RT(方法A)3.10分钟。

实施例11

4-氨基-5-(4-{[(6-乙基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}-3-氟苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

采用中间物H的制法制备标题化合物，但其中改用中间物K替代中间物G，及改用(6-乙基吡啶-2-基)胺甲酸苯基酯替代(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酸苯基酯。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.93(s，1H)，8.58(dd，J＝6.4，6.4Hz，1H)，8.32(dd，J＝8.4，8.4Hz，1H)，8.20(s，1H)，7.93(s，1H)，7.68(dd，J＝7.8，7.8Hz，1H)，7.29(dd，J＝12.0，1.9Hz，1H)，7.12(dd，J＝8.5，2.0Hz，1H)，6.98-7.05(br d，1H)，6.91(d，J＝7.5Hz，1H)，3.89-4.00(m，2H)，2.72(q，J＝7.6Hz，2H)，1.25(t，J＝7.6Hz，3H)；ES-MS m/z 517.2(MH)⁺；HPLC RT(方法B)2.89分钟。

实施例12

4-氨基-5-(3-氯-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}-苯基)-N-乙基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

采用实施例1的制法制备标题化合物，但其中改用中间物U替代中间物I，及改用乙基胺盐酸盐替代甲基胺盐酸盐。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ10.01(s，1H)，8.38(d，J＝8.6Hz，1H)，8.10(s，1H)，7.95(dd，J＝5.5，5.5Hz，1H)，7.91(s，1H)，7.62-7.70(m，1H)，7.49(d，J＝2.1Hz，1H)，7.28(dd，J＝8.6，2.0Hz，1H)，6.91-7.00(brs，1H)，6.90(d，J＝7.4Hz，1H)，5.27-5.38(br s，1H)，3.07-3.17(m，2H)，2.47(s，3H)，1.11(t，J＝7.2Hz，3H)；ES-MS m/z 465.2(MH)⁺；HPLC RT(方法A)2.90分钟。

实施例13

4-氨基-5-(3-氯-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-丙基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

采用实施例1的制法制备标题化合物，但其中改用中间物U替代中间物I，及改用正丙基胺替代甲基胺盐酸盐。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ10.01(s，1H)，8.38(d，J＝8.5Hz，1H)，8.10(s，1H)，7.89-7.96(m，2H)，7.62-7.70(m，1H)，7.49(d，J＝1.8Hz，1H)，7.28(dd，J＝8.5，2.0Hz，1H)，6.91-6.99(br s，1H)，6.90(d，J＝7.4Hz，1H)，5.24-5.37(br s，1H)，3.06(q，J＝6.5Hz，2H)，2.47(s，3H)，1.35-1.46(m，2H)，0.80(t，J＝7.4Hz，3H)；ES-MS m/z 479.2(MH)⁺；HPLC RT(方法B)2.79分钟。

实施例14

4-氨基-5-(3-氯-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-环丙基吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

采用实施例1的制法制备标题化合物，但其中改用中间物U替代中间物I，及改用环丙基胺替代甲基胺盐酸盐。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ10.02(s，1H)，8.38(d，J＝8.5Hz，1H)，8.08(s，1H)，8.01(d，J＝3.8Hz，1H)，7.90(s，1H)，7.62-7.70(m，1H)，7.49(d，J＝2.1Hz，1H)，7.29(dd，J＝8.5，2.1Hz，1H)，6.91-7.01(br s，1H)，6.90(d，J＝7.5Hz，1H)，5.21-5.39(br s，1H)，2.62-2.69(m，1H)，2.47(s，3H)，0.56-0.63(m，2H)，0.38-0.45(m，2H)；ES-MS m/z 477.2(MH)⁺；HPLC RT(方法B)2.89分钟。

实施例15

4-氨基-5-(3-氯-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-[2-(二甲基氨基)乙基]吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

采用实施例1的制法制备标题化合物，但其中改用中间物U替代中间物I，及改用N，N-二甲基乙二胺替代甲基胺盐酸盐。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ10.03(s，1H)，8.42(d，J＝8.5Hz，1H)，8.07(s，1H)，7.91(s，1H)，7.62-7.70(m，1H)，7.51(d，J＝2.0Hz，1H)，7.45-7.51(br s，1H)，7.31(dd，J＝8.5，1.9Hz，1H)，6.91-7.00(brs，1H)，6.90(d，J＝7.4Hz，1H)，5.21-5.34(br s，1H)，3.18(q，J＝6.1Hz，2H)，2.47(s，3H)，2.20-2.27(m，2H)，2.06(s，6H)；ES-MSm/z 508.1(MH)⁺；HPLC RT(方法B)2.17分钟。

实施例16

4-氨基-5-(3-氯-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

采用中间物H的制法制备标题化合物，但其中改用中间物X替代中间物G。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ10.01(s，1H)，8.63(t，J＝6.4Hz，1H)，8.39(d，J＝8.4Hz，1H)，8.21(s，1H)，7.93(s，1H)，7.62-7.70(m，1H)，7.48(d，J＝1.8Hz，1H)，7.28(dd，J＝8.6，2.0Hz，1H)，6.91-6.99(br s，1H)，6.90(d，J＝7.3Hz，1H)，5.31-5.42(brs，1H)，3.91-4.01(m，2H)，2.47(s，3H)；ES-MS m/z 519.2(MH)⁺；HPLC RT(方法B)2.87分钟。

实施例17

4-氨基-5-(3-氯-4-{[(6-乙基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺制法

采用中间物H的制法制备标题化合物，但其中改用中间物X替代中间物G，及改用(6-乙基吡啶-2-基)胺甲酸苯基酯替代(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酸苯基酯。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ10.02(s，1H)，8.63(t，J＝6.3Hz，1H)，8.36(d，J＝8.7Hz，1H)，8.21(s，1H)，7.93(s，1H)，7.65-7.72(m，1H)，7.48(d，J＝2.0Hz，1H)，7.28(dd，J＝8.5，2.0Hz，1H)，6.97-7.06(br  s，1H)，6.91(d，J＝7.4Hz，1H)，5.29-5.39(br s，1H)，3.90-4.01(m，2H)，2.75(q，J＝7.6Hz，2H)，1.23(t，J＝7.6Hz，3H)；MS[M+H]⁺＝533.2；LCMS RT＝3.02分钟(方法B)。ES-MS m/z 533.2(MH)⁺；HPLC RT(方法B)3.02分钟。

实施例18

4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺二甲磺酸盐制法

在4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2.1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺(5.9g)中添加THF(650mL)。加热混合物至溶解为止(达80℃)。在另一支烧瓶中，以THF(25mL)稀释甲磺酸(2.5mL)。添加17mL甲磺酸的THF溶液至含有4-氨基-5-(4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺的THF溶液中。搅拌混合物16小时。使用0.2μM过滤膜滤出固体。固体干燥，产生7.91g(97％)标题化合物。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.95(s，1H)，8.68(t，1H)，8.60(br  s，1H)，8.38(t，1H)，8.30(s，1H)，8.03(s，1H)，7.70(t，1H)，7.30(d，1H)，7.18(d，1H)，7.02(bd，1H)，6.85(d，1H)，3.98(m，2H)，2.54(s，3H)，2.32(s，6H)；ES-MS m/z503.30(MH)⁺，HPLC RT(方法A)2.64分钟。DSCmp.＝249.97℃(在MeOH中搅拌1周并干燥后，mp.＝258.99℃)C₂₂H₁₈F₄N₈O₂·2(CH₄O₃S)的分析计算值：C，41.50％；H，3.77％；F，10.94％；N，16.13％；O，18.43％；S，9.23％。实测值：C，41.21％；H，3.51％；N，15.69％。卡尔-费雪滴定法(Karl Fischer Titration)：0.96％水。

实施例19

4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺盐酸盐制法

采用实施例18的制法制备标题化合物，但其中改用盐酸替代甲磺酸。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ10.03(s，1H)，9.08(brs，1H)，8.75(t，1H)，8.47(m，2H)，8.17(s，1H)，7.68(t，1H)，7.34(d，1H)，7.15(d，1H)，7.05(bd，1H)，6.93(d，1H)，3.98(m，2H)，2.54(s，3H)；ES-MSm/z 503.10(MH)⁺，HPLC RT(方法A)2.80分钟。DSC mp.＝248.84℃(在甲醇中搅拌一周并干燥后，mp＝251.43℃)。C₂₂H₁₈F₄N₈O₂·HCl的分析计算值：C，49.03％；H，3.55％；N，20.79％。实测值：C，48.89％；H，3.55％；N，20.46％。

实施例20

4-氨基-5-[3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基]-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺二[(2Z)-丁-2-烯二酸盐制法

在含有4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺(3.7g，7.36mmol)的THF(480mL)溶液中添加马来酸溶液(22mL，22mol，2.9g溶在25mL THF，制成1M溶液)，在室温下搅拌混合物16小时。使用0.2μM过滤膜滤出固体，在高度真空烘箱中干燥，产生(4.87g，90％)标题化合物。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.95(s，1H)，8.60(t，1H)，8.36(t，1H)，8.21(s，1H)，7.94(s，1H)，7.66(1.1H)，7.30(d，1H)，7.11(d，1H)，6.96(bd，1H)，6.89(d，1H)，6.25(s，4H)，3.98(m，2H)，2.50(s，3H)；ES-MS m/z 503.30(MH)⁺，HPLC RT(方法A)2.64分钟。DSC mp.＝201.29℃C₂₂H₁₈F₄N₈O₂·2(C₄H₄O-₄)的分析计算值：C，49.05％；H，3.57％；N，15.25％。实测值：C，49.19％；H，3.63％；N 15.06％。

实施例21

4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺(2E)-丁-2-烯二酸盐(2∶1)制法

取含有4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺(8.0g)的THF(800mL)溶液加热至溶解为止(达80℃)。反应混合物冷却至室温，添加富马酸(1.38g，11.9mmol)。搅拌混合物16小时。使用0.2μM过滤膜滤出固体。固体干燥，产生6.35g(71％)标题化合物。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.95(s，1H)，8.68(t，1H)，8.35(t，1H)，8.23(s，1H)，7.95(s，1H)，7.65(t，1H)，7.32(d，1H)，7.17(d，1H)，7.05(bd，1H)，6.95(d，1H)，6.61(s，1H)，3.98(m，2H)，2.54(s，3H)；ES-MS m/z 503.30(MH)⁺，HPLC RT(方法A)2.63分钟。DSCmp.＝229.54℃。C₂₂H₁₈F₄N₈O₂·0.5(C₄H₄O₄)的分析计算值：C，51.43％；H，3.60％；F，13.56％；N，19.99％；O，11.42％；实测值：C，50.90％；H，3.78％；N，19.67％。

实施例22

4-氨基-5-[3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基]-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺氢溴酸盐制法

采用实施例18的制法制备标题化合物，但其中改用氢溴酸(30％乙酸溶液)替代甲磺酸。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.95(s，1H)，8.68(t，1H)，8.60(br s，1H)，8.38(t，1H)，8.30(s，1H)，8.03(s，1H)，7.70(t，1H)，7.30(d，1H)，7.18(d，1H)，7.02(bd，1H)，6.85(d，1H)，3.98(m，2H)，2.54(s，3H)；ES-MS m/z 503.26(MH)⁺。HPLC RT(方法A)2.74分钟。DSC mp.＝249.18℃C₂₂H₁₈F₄N₈O₂·HBr的分析计算值：：C，45.30％；H，3.28％：Br，13.70％；F，13.03％；N，19.21％；O，5.49％。实测值：C，45.30％：H，3.28％；N，19.21％。

实施例23

4-氨基-5-[4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基]-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺草酸盐制法

在含有4-氨基-5-(3-氟-4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺(100mg，0.2mmol)的THF(5mL)溶液中添加1M草酸溶液(0.2mL，0.2mmol，225mg溶在2.5mL THF，制成1M溶液)，在室温下搅拌混合物16小时。使用0.2μM过滤膜滤出固体，在高度真空烘箱中干燥，产生(60mg，51％)标题化合物。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.95(s，1H)，8.60(t，1H)，8.36(t，1H)，8.21(s，1H)，7.94(s，1H)，7.66(t，1H)，7.30(d，1H)，7.11(d，1H)，6.96(bd，1H)，6.89(d，1H)，3.98(m，2H)，2.50(s，3H)；ES-MS m/z 503.30(MH)⁺，HPLC RT(方法A)2.64分钟。DSC mp.＝210.36℃。C₂₂H₁₈F₄N₈O₂·C₂H₂O₄的分析计算值：C，48.66％；H，3.40％；N，18.91％。实测值；C，48.62％；H，3.24％；N，18.69％。

另一项实验中，草酸用量在1至10当量的间变化，均单离出单草酸盐。

实施例24

4-氨基-5-(4-{[(6-甲基吡啶-2-基)胺甲酰基]氨基}苯基)-N-(2，2，2-三氟乙基)吡咯并[2，1-f][1，2，4]三嗪-6-甲酰胺双苯磺酸盐制法

采用实施例18的制法制备标题化合物，但其中改用苯磺酸(1当量)替代甲磺酸。尽管仅使用1当量，仍可单离出双(苯磺酸)盐(产率45％)。¹H-NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ9.95(s，1H)，8.68(t，1H)，8.60(br s，1H)，8.38(t，1H)，8.30(s，1H)，8.03(s，1H)，7.70(t，1H)，7.60(m，4H)，7.30(m，7H)，7.18(d，1H)，7.02(bd，1H)，6.92(d，1H)，3.98(m，2H)，2.54(s，3H)；ES-MS m/z 503.32(MH)⁺，HPLC RT(方法A)2.67分钟DSC mp.＝232.60℃。单脉冲600MHz NMR证实游离碱相对于苯磺酸的比例。

生理活性

本发明化合物的效用，举例而言，可通过其在上述极光激酶1与2生化分析法以及极光激酶1自体磷酸化分析法中所测定的活体外活性来加以说明。极光激酶抑制作用与活性的相关性已在小鼠的人类肿瘤异种移植模式中证实(Harrington等人的Nature Medicine 2004，10(3)，262)。此外，相关技艺已清楚证实人类肿瘤异种移植模式中的活性与临床上的抗肿瘤活性相关。举例而言，紫杉醇(Silvestrini等人的Stem Cells 1993，11(6)，528-35)、克癌易(taxotere)(Bissery等人的Anti Cancer Drugs 1996，6(3)，339)与拓朴异构酶抑制剂(Edelman等人的Cancer Chemother.Pharmacol.1996，37(5)，385-93)的医疗效用已采用活体内肿瘤异种移植模式证实。

本发明化合物的活体外效应可在下列分析法中证实：

采用亲近闪烁分析法(scintillation proximity assay；SPA)模式，以囓齿类极光激酶1(mAur1)与囓齿类极光激酶2(mAur2)生化分析法来测定mAur2将受质(生物素化肽830(biotinylated Peptide830)(DRT，Protein Sciences))磷酸化的能力。一旦经酵素标记放射性后，生物素化受质即被涂覆有卵白素的SPA珠粒捕捉，并测定近似SPA珠粒的放射活性。为了产生IC₅₀曲线，依下列条件在96孔同位素盘(Wallac 1450-514)进行反应：取10mM化合物母液(含于100％二甲亚砜；DMSO)在100％DMSO中稀释10倍。然后在100％DMSO中序列稀释化合物1∶5，制作曲线上8个剂量点。添加1μL稀释化合物至反应缓冲液(由25mM HEPES pH 7.5、1mm MnCl₂、1mM MgCl₂、1mM DTT、0.01％Tween20组成)中。然后在每孔中添加最终浓度为1μM冷ATP、0.1μCi³³P-ATP(Amersham AH9968)与1μM生物素化肽830的混合物。添加与人类INCENP(氨基酸704-919)(DRT，Protein Sciences)共同表现的重组体(标记GST的mAur 1)(氨基酸67-345)(其最终浓度为12nM)或N-端标记His的mAur2(氨基酸98-395；DRT，Protein Sciences)(其最终浓度为20nM)来启始反应。各孔的最终反应体积为100μL，化合物在1％DMSO中的最终浓度介于10μM至128pM的范围内。使反应混合物在温和搅拌下，在25℃培养1至2小时。然后在各孔中添加涂覆有卵白素的SPA珠粒(Amersham RPNQ0007；0.5mg珠粒溶在165mM EDTA的溶液50μL)来中止反应，再持续在25℃下培养15分钟。培养盘以2000rpm离心10分钟。采用Wallac 1450Microbeta Plus液体闪烁计数器测定肽受质的磷酸化作用。在此等方法下，所有实施例均在极光激酶1与极光激酶2囓齿类生化分析法中证实其IC₅₀小于0.1μM。

为了测定化合物在细胞中抑制极光激酶1活性的能力，在HT29结肠癌细胞中发展出测定极光激酶1自体磷酸化作用的捕捉式ELISA(Yasui Y等人2004)。简单地说，在涂覆胶原的96孔盘的RPMI+10％FBS中接种15,000个细胞/孔，在37℃与5％CO₂中培养一夜。次日，在37℃下，以166nM诺考达唑(nacadazole)化合物处理细胞24小时。同步生长的细胞进一步使用化合物处理2小时。由0.1mM DMSO母液制备化合物稀释液，因此添加1.1μL各稀释液时，可依三分之一对数步骤，得到最终浓度在10μM至13nM范围内。继化合物处理后，分析盘以1000rpm离心2分钟，以100μL冷的无菌TBS洗涤2次。然后溶解细胞(100μL 150mM NaCl、20mM Tris，pH 7.5、1mM EDTA、1mM EGTA、1％Triton-x-100加蛋白酶与磷酸酶抑制剂)，在4℃下振荡1小时。将细胞溶解物移至预先涂覆抗磷酸mAur1(Rockland，600-401-677)的分析盘，以5％阻断剂A的TBS溶液(来自Meso ScaleDiscovery)阻断反应。在室温下培养1小时后，以300μL TBST洗涤分析盘共3次。移除上清液，换上50μL稀释的初级抗体(抗-极光激酶1，Pharmingen，611083)(在2％阻断剂A的TBS溶液中以1∶1000稀释)，在室温下培养1小时。移除各孔中的抗体缓冲液，以300μL冷TBS-T(50uM Tris pH 8.0、138mM NaCl、2.7mM KCl、0.05％Tween20)洗涤3次。将洗涤缓冲液换成50μL次级抗体(Sulfa TAG抗-小鼠，Meso Scale Discovery)(在2％阻断剂A中以1∶1000稀释)，在室温下培养1小时。采用Sector 6000得到最后读数，添加150μL读取缓冲液T(reading buffer T)，立即读取分析盘。采用此方法证实所有实施例化合物的IC₅₀均小于0.1μM。

A.与医药组合物相关的操作实施例

根据本发明的化合物可依下列方法转化成医药制剂：

锭剂：

组成：

100mg实施例1的化合物、50mg乳糖(单水合物)、50mg玉米淀粉(天然)、100mg聚乙烯吡咯啶酮(来自德国Ludwigshafen的BASF公司)与2mg硬脂酸镁。

锭剂重量212mg，直径8mm，弯曲半径12mm。

制法：

取含有活性成分、乳糖与淀粉的混合物与5％(m/m)PVP的水溶液制成颗粒。干燥后，颗粒与硬脂酸镁混合5分钟。此混合物使用一般压锭机模塑(如上述锭型)。典型施加的模塑力为15kN。

经口投药用悬浮液

组成：

1000mg实施例1的化合物、1000mg乙醇(96％)、400mg罗德胶(Rhodigel)(来自美国宾州FMC公司的黄原胶)与99g水。10ml口服悬浮液中提供单一剂量100mg的本发明化合物。

制法：

取罗德胶(Rhodigel)悬浮在乙醇，并添加活性成份至悬浮液中。搅拌加水。续搅拌约6小时，直到罗德胶完全膨胀为止。