饲料用β－1,3－1,4－葡聚糖酶基因工程菌及其构建

摘要

饲料用β－1，3－1，4－葡聚糖酶基因工程菌及其构建，属于基因工程技术和蛋白质工程技术领域。本发明采用基因重叠延伸技术将来自淀粉液化芽孢杆菌的信号肽和成熟肽N－端15个氨基酸残基替换浸麻芽孢杆菌相应的部分，构建β－1，3－1，4－葡聚糖酶(HAM)杂合基因，将改造后的基因插入到载体pET 30a中，转化E.coli BL21，经筛选，得到一株产β－1，3－1，4－葡聚糖酶(HAM)的大肠杆菌E.coli BL21/pET 30a－HAM，保藏号为：CCTCC NO：M209067。经分析，该酶最适温度为65℃，在55－80℃条件下孵育20min，酶的活性大于80％，最适pH值7.0，在酸性环境较稳定。HAM酶的比活力为1700U/mg，耐热性和耐酸性均比亲本酶淀粉液化芽孢杆菌酶和浸麻芽孢杆菌酶高，适合饲料工业应用要求。