法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2017-06-09
授权
授权
2008-03-05
实质审查的生效
实质审查的生效
2008-01-16
公开
公开
发明的技术领域
[0001]本发明涉及单独使用性甾体前体或以新的联合疗法在包括 人在内的易感温血动物中治疗或降低获得影响阴道固有层或肌层的问 题的可能性的方法。特别是，联合治疗包括给予选择性雌激素受体调 节剂(SERM)和提高患者的性甾体前体的水平，所述前体选自脱氢 表雄甾酮(DHEA)、硫酸脱氢表雄酮(DHEA-S)、和雄甾-5-烯-3β，17β- 二醇(5-二醇)。也可给予雌激素以抵消(conteract)一些SERMs对热 潮红和其它绝经期症状的潜在作用。还可给予5型cGMP磷酸二酯酶 抑制剂来改善性功能。本发明还涉及实施前述联合的药盒和药物组合 物。
[0002]在US 5,843,932中，报导了在卵巢切除的大鼠背部皮肤的 2cm2面积上以50％乙醇-50％丙二醇溶液形式以每天两次30mg的剂 量用DHEA治疗1、3或6个月对阴道萎缩的影响。病理组织学检查 显示，用DHEA治疗的大鼠阴道上皮增生和粘液化，并且阴道粘膜萎 缩逆转。
[0003]用大鼠进行的研究，当将DHEA应用到背部皮肤1、3和 6个月仅检查了对阴道上皮的作用(Sour Ia等人，1998，J.Steroid Biochem MoI Biol.，66(3)：137-149)，而没有检查另外两层，即固有 层和肌层。然后观察到DHEA在阴道上皮局部应用的效果是在远离阴 道的部位皮肤上施用效果的大约10倍，因此需要全身吸收以发挥其 作用。
[0004]在先前以10％DHEA乳膏在绝经后女性皮肤上给药12个 月对DHEA作用的研究中，仅仅评价了DHEA的雌激素活性(Labrie 等人，1997，J.Clin.Endocrinol.Metab.，82：3498-3505)。其中指 出(第3500页)″阴道细胞学作为DHEA的雌激素作用的特定参数 检查″。这是由于评价的方法，即限于浅表和易移动的上皮细胞的阴 道涂片。
[0005]本发明描述了DHEA和其它成分对阴道的三个层的作用， 即肌层、固有层和上皮层，在这三个水平上都具有新的益处。认为 DHEA对固有层和肌层的有益效果对于5型cGMP磷酸二酯酶抑制剂 的积极作用来说是极其重要的，所述5型cGMP磷酸二酯酶抑制剂例 如是万艾可和其它化合物或前列腺素E1。
相关技术的背景
[0006]阴道干燥影响大约50％的50到60岁的绝经后女性和72％ 的70岁以上的绝经后女性(Rossin-Amar，2000，Gynecol Obstet Fertil，28(3)：245-249)。在这些女性当中，大约80％经历过泌尿生 殖器病症，尤其是阴道炎和性交困难(Pandit and Ouslander，1997， Am J Med Sci，314(4)：228-31)。因为这些问题被认为至少部分与性 甾体丧失相关，因此在绝经期要考虑进行适当的局部激素替代疗法。 近来已经认识到绝经后女性不仅丧失所有的卵巢雌激素而且她们还逐 渐丧失雄激素，这些雄激素源自于外周胞分泌脱氢表雄甾酮(DHEA) 转变的雄激素和雌激素(Labrie等人，1991，MoI Cell Endocrinol， ′78：C113-C118；Labrie等人，1995，Ann NY Acad Sd，774：16-28； Labrie等人，2003，End Rev，24(2)：152-182)。事实上，从30岁 到40岁血清DHEA和DHEA-S日益减少(Labrie等人，2003，End Rev，24(2)：152-182；Orentreich等人，1984，J CKn Endocrinol Metab，59：551-555；Labrie等人，1997，J Clin Endocrinol Metab， 82：2396-2402)。一系列研究表明低水平的DHEA和DHEA-S与一 系列年龄相关的病态和疾病有关(Labrie等人，1997，J.Clin. Endocrinol.Metab.，82：3498-3505；Helzlsouer等人，1992，Cancer Res，52(1)：1-4；Szathmari等人，1994，Osteoporos Int，4(2)：84-88； Thoman and Weigle，1989，Adv Immununol，46：221-261； Barrett-Connor等人，1999，J Reprod Med，44(12)：1012-1020； Barrett-Connor等人，1999，J Am Geriatr Soc，47(6)：685-691)。
[0007]减轻阴道干燥和其它绝经期症状的有效途径是使用激素替 代疗法(HRT)(Greendale and Judd，1993，J Am Geriatr Soc，41(4)： 426-436；Studd等人，1980，Pasetto，Paleotti and Ambrus Eds，MT Press，Lancaster，p：127-139)。然而，近来的临床研究表明联合雌 激素和孕激素增加了乳腺癌的发病率，并且对心血管疾病有潜在的消 极影响(Colditz等人，1995，N Engl J Med，332：1589-1593；Ross 等人，2000，J Natl Cancer Inst，92(4)：328-332；Rossouw等人，2002， JAMA，288(3)：321-333)。同时，虽然对联合的雌激素-雄激素替代 疗法的可能性的兴趣不断增加(Rosenberg等人，1997，J Reprod Med，42(7)：394-404；Burd等人，2001，Curr Women Health Rep， 1(3)：202-205)，但是雌激素成分的使用受到上述潜在并发症的限制。 根据近来我们对人性甾体生理学了解的进展，尤其是在绝经后女性中 (Labrie等人，1991，MoI Cell Endocrinol，78：C113-C118；Labrie 等人，2003，End Rev，24(2)：152-182)，DHEA的使用为绝经后女 性提供适当水平的通过胞分泌机制在特定组织中合成的雄激素和雌激 素成为可能，且没有全身作用(Labrie等人，1997，J.Clin.Endocrinol. Metab.，82：3498-3505：16-28；Labrie等人，2003，End Rev，24(2)： 152-182；Labrie，2001，Ref Gyn Obstet，8：317-322；Lasco等人， 2002，145：457-461)。阴道功能雄激素-敏感原理的修复也应当有助 于5型cGMP磷酸二酯酶抑制剂或前列腺素El的作用。
[0008]选择性雌激素受体调节剂(SERM)Acolbifene(EM-652) 是最初开发用于预防和治疗乳腺癌的苯并吡喃衍生物(Gauthier等 人，1997，J Med Chem，40：2117-2122)。Acolbifene是所有已知化 合物中对ER具有最高亲和力的化合物(Gauthier et al，1997，J Med Chem，40：2117-2122；Labrie等人，1999，J Steroid Biochem MoI Biol，69(1-6)：51-84；Tremblay等人，1997，MoI.Endocrinol.，11： 353-365)，并且其在ERα和Erβ上都产生了活性(Tremblay等人， 1998，Endocrinology，139：111-118)。该化合物至少在大鼠的乳腺 和子宫内膜显示了纯的和高效的抗雌激素活性，同时降低了血清胆固 醇和甘油三酯并预防骨丢失(Labrie等人，1999，J Steroid Biochem MoI Biol，69(1-6)：51-84)。而且，已经证明给予DHEA，不仅不妨 碍，而且在裸小鼠中产生了与纯抗雌激素Acolbifene对人乳房肿瘤生 长相同的额外的抑制作用(Dauvois等人，1991，Cancer Res，51： 3131-3135；Luo等人，1997，Endocrinology，138：4435-4444)。DHEA 和Acolbifene的联合治疗已经被提出作为乳腺癌的有益化学预防和治 疗途径(Labrie，2001，Ref Gynecol Obstet，8：317-322)。事实上， DHEA对人乳腺癌异种移植物在裸小鼠中生长的抑制作用支持了其用 作激素替代疗法(Dauvois等人，1991，Cancer Res，51：3131-3135； Couillard等人，1998，J Natl Cancer Inst，90：772-778)。
[0009] WO 99/63974公开了选择性雌激素受体调节剂与性甾体前 体联合的医疗用途。
发明概述
[00010]因此，本发明的目的是提供治疗可以导致性欲和性功能 降低的阴道问题，更特别是阴道干燥、性交困难和性功能障碍同时使 不希望的副作用最小化的有效方法。
[00011]另一目的是提供降低患上述问题的风险的方法。
[00012]在一个实施方案中，本发明涉及治疗或降低患阴道干燥 的风险的方法，包括在需要所述治疗或所属甾体前体的个体或患者中 增加选自脱氢表雄甾酮(DHEA)、硫酸脱氢表雄酮(DHEA-S)和雄 甾-5-烯-3β，17β-二醇(5-二醇)的性甾体前体的水平，且进一步包括给予 所属患者治疗有效量的选择性雌激素受体调节剂(SERM)作为联合 治疗的部分。
[00013]在另一实施方案中，本发明包括另外给予雌激素以抵消 SERMs对热潮红和其它绝经期症状的作用。
[0014]在另一实施方案中，本发明包括另外给予5型CGMP磷 酸二酯酶抑制剂或前列腺素E1以改善性功能。
[0015]用于本文时，选择性雌激素受体调节剂(SERM)是直接 或通过其活性代谢物用作乳房组织中的雌激素受体拮抗剂(″抗雌激 素″)的化合物，还提供了对骨组织和血清胆固醇水平的雌激素或雌 激素-类似的作用(即通过减少血清胆固醇)。在体外或在人体或大鼠 乳房组织中用作雌激素受体拮抗剂的非甾体化合物(尤其是如果该化 合物用作人乳腺癌细胞的抗雌激素)可能用作SERM。相反，甾体抗 雌激素不倾向于用作SERMs，因为它们对血清胆固醇并不易于显示 任何有益作用。我们已经试验和发现用作SERMs的非甾体抗雌激素 包括EM-800、EM-01538、雷洛昔芬、他莫昔芬、屈洛昔芬、托瑞米 芬、艾多昔芬、TSE-424、ERA-923、拉索昔芬(CP 336156)、阿佐 昔芬(LY 353381)和GW-5638。我们已经试验了甾体抗雌激素ICI 182,780且发现不能用作SERM。根据本发明SERMs可以与这些化合 物用作抗雌激素时本领域已知的相同剂量给予。
[0016]不打算受理论的束缚，认为SERMs，其中的许多，优选， 具有被1到2个碳原子连接的两个芳环，被预期与雌激素受体相互影 响，因为分子前面的部分被该受体最佳地识别。优选的SERMs具有 侧链，其可选择性在乳房组织中引起拮抗性质而在其它组织中没有显 著拮抗性质。因此，这些SERMs可如愿地在乳房中用作抗雌激素， 同时令人惊奇地和如愿地在骨组织和对血液成分(脂质和/或胆固醇的 浓度被有利的影响)用作雌激素(或提供雌激素样作用)。对胆固醇 和/或脂质的有利作用有可能地转变为对动脉粥样硬化的有利作用，已 知动脉粥样硬化被胆固醇和脂质的不正当水平不利地影响。
[0017]在另一实施方案中，本发明包括方法、药物组合物和药盒， 其中的选择性雌激素受体调节剂具有有下述特征的分子式：
a)被1到2个1 to 2插入碳原子间隔的2个芳环，两个芳环未被 取代或者被羟基或在体内转变为羟基的基团取代；
b)具有芳环和叔胺官能团或其盐的侧链。
优选侧链选自：
和
[0018]还优选2个芳环都是苯基，且侧链具有选自次甲基、亚甲 基、-CO、-O-和-S-、芳环和叔胺官能团或其盐的部分。
[0019]在另一实施方案中，选择性雌激素受体调节剂选自苯并噻 吩衍生物、三苯乙烯衍生物、吲哚衍生物、苯并吡喃衍生物、5，6，7，8- 四氢萘和苯并二氢吡喃衍生物。
[0020]在一个实施方案中，优选的是选择性雌激素受体调节剂为 下式的苯并噻吩衍生的化合物：
其中R1和R2独立地选自：氢、羟基、和在体内转变为羟基的部 分；
其中R3和R4独立地选自：C1-C4烷基，或者其中的R3、R4和它 们结合的氮，一起为选自吡咯烷并、二甲基-1-吡咯烷子基、甲基-1-吡 咯烷基、哌啶子基、六亚甲基亚氨基(hexamethyleneimino)和吗啉 代的任何结构；
其中A选自-CO-、-CHOH和-CH2-；
其中B选自次苯基、吡啶亚基(pyridylidene)和-环C4H2N2-。
特别地，选择性雌激素受体调节剂选自雷洛昔芬、阿佐昔芬(LY 353381)和LY 335563。
[0021]在另一实施方案中，优选的是选择性雌激素受体调节剂为 下式的三苯乙烯衍生的化合物：
其中D是-OCH2CH2N(R3)R4或-CH＝CH-COOH(R3和R4都独立 地选自C1-C4烷基，或者R3、R4和它们结合的氮原子一起为选自吡 咯烷并、二甲基-1-吡咯烷并、甲基-1-吡咯烷基、哌啶子基、六亚甲 基亚氨基和吗啉代的环状结构)；
其中E和K独立地是氢或羟基；
其中J是氢或卤素。
特别地，选择性雌激素受体调节剂是他莫昔芬、OH-他莫昔芬、 屈洛昔芬、托瑞米芬、Iodoxifene和GW 5638。
[0022]在另一实施方案中，优选的是选择性雌激素受体调节剂为 下式的吲哚衍生的化合物：
其中D选自-OCH2CH2N(R7)R8、-CH＝CH-CO N(R7)R8、-CC- (CH2)n-N(R7)R8(R7和R8都独立地选自C1-C6烷基、或R7、R8和它们 结合的氮原子一起为选自吡咯烷并、二甲基-1-吡咯烷子基、甲基-1-吡 咯烷基、哌啶子基、六亚甲基亚氨基、吗啉代、环的环状结构)；
其中X选自：氢和C1-C6烷基；
其中R1、R2、R3、R4、R5和R6独立地选自：氢、羟基、C1-C6烷基、和在体内转变为羟基的部分。
特别地，选择性雌激素受体调节剂是TSE-424和ERA-923。
[0023]在另一实施方案中，优选的是选择性雌激素受体调节剂是 下式的化合物：
其中R1和R2独立地选自：氢、羟基、和在体内转变为羟基的部 分；
其中R5和R6独立地是氢或C1-C6烷基；
其中D是-OCH2CH2N(R3)R4(R3和R4都独立地选自C1-C4烷基， 或者R3、R4和它们结合的氮原子一起为选自吡咯烷并、二甲基-1-吡 咯烷子基、甲基-1-吡咯烷基、哌啶子基、六亚甲基亚氨基、吗啉代的 环状结构)。
其中X选自-O-和-CH2-。
特别地，化合物选自：(-)-顺式-(5R，6S)-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1- 基乙氧基)苯基]-5，6，7，8-四氢萘-2-醇，D-(-)-酒石酸盐(拉索昔芬)和(3，4- 反式-2，2-二甲基-3-苯基-4-[4-(2-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)-7-甲氧 基色满]。
[0024]在另一实施方案中，优选的是选择性雌激素受体调节剂具 有下式结构：
其中R1和R2独立地是氢、羟基或在体内转变为羟基的部分；
其中Z是二价封闭部分，特别地，Z选自-O-、-NH-、-S-和-CH2-；
其中R100是通过4-10个插入原子将L隔离B环的二价部分；
其中L是选自-SO-、-CON-、-N＜和-SON＜的二价或三价极性部 分；
其中G1选自氢、C1到C5的烃或连接G2和L以形成5-到7-元杂 环的二价部分、和卤素或前述基团的不饱和衍生物。
其中G2不存在或选自氢、C1到C5的烃或连接G1和L以形成5- 到7-元杂环的二价部分、和卤素或前述基团的不饱和衍生物；
其中G3选自氢、甲基和乙基。
更特别的是，优选下述通式结构的苯并吡喃衍生物：
其中D是-OCH2CH2N(R3)R4(R3和R4都独立地选自C1-C4烷基， 或R3、R4和它们结合的氮原子一起为选自吡咯烷并、二甲基-1-吡咯 烷子基、甲基-1-吡咯烷基、哌啶子基、六亚甲基亚氨基、吗啉代、环 的环状结构)。
其中R1和R2独立地选自：氢、羟基、和在体内转变为羟基的部 分。
[0025]还优选的是苯并吡喃衍生物是在碳2上具有绝对构型S的 旋光性化合物或其药学可接受的盐，所述化合物具有下述分子结构：
其中R1和R2独立地选自羟基和在体内转变为羟基的部分；
其中R3是选自饱和的、不饱和的或取代的吡咯烷基，饱和的、 不饱和的或取代的哌啶子基，饱和的、不饱和的或取代的哌啶基，饱 和的、不饱和的或取代的吗啉代，含氮环状部分，含氮多环部分和 NRaRb(Ra和Rb独立地是氢、直连或支链C1-C6烷基、直连或支链 C2-C6链烯基和直连或支链C2-C6炔基)。
[0026]在一个实施方案中，苯并吡喃衍生物是选自乙酸、已二酸、 苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、富马酸、氢碘酸、氢溴酸、盐 酸、双氢氯噻嗪酸、羟萘甲酸、乳酸、马来酸、甲磺酸、甲基硫酸、 1，5-萘二磺酸、硝酸、棕榈酸、三甲基醋酸、磷酸、丙酸、琥珀酸、 硫酸、酒石酸、对苯二甲酸、对-甲苯磺酸和戊酸的酸的盐。
[0027]优选的选择性雌激素受体调节剂是：
Acolbifene
雷洛昔芬、阿佐昔芬、他莫昔芬、屈洛昔芬、托瑞米芬、Iodoxifene、 GW 5638、TSE-424、ERA-923和拉索昔芬。
附图的简要说明
[0028]图1表示从外口(阴道口)(第1节段)到子宫水平(第 7节段)(阴道部子宫)，沿着大鼠阴道的纵轴分成7个横节段。
[0029]图2表示9组大鼠第5节段的阴道上皮组织形态学。Bar in(J)，40μm。
(A)作为雌激素作用的典型，动情期周期大鼠的复层鳞状上皮由四 个主要的层组成：1个细胞层的基底层(b)，6到7个细胞层的棘层(s) 和5到6层颗粒层(g)覆盖角质层(c)形成紧密填充的扁平角质化细胞。
(B)用受雌激素-妊娠前影响的发情前期的周期大鼠举例说明粘液 化。在大多数第2到7节段，1层基底细胞层(b)被5到6个细胞层的 棘层(s)覆盖，底层粘液化(m)包括3-4层粘液细胞。
(C)在OVX对照中，基底细胞层(b)被1层萎缩立方细胞(a)覆盖。
(D)用日口服剂量的Acolbifene治疗OVX大鼠的阴道上皮，(2.5 mg/kg)显示萎缩，而外层低柱状粘液细胞(m)覆盖着基底细胞层(b)。
(E)用日口服剂量的倍美力(0.5mg/kg)治疗的OVX大鼠的阴道 上皮。与动情期发现的相比，OVX-诱导的萎缩被雌激素模式代替。
(F)在接受倍美力+Acolbifene的OVX动物中，尽管观察到了较大 的粘液细胞，与Acolbifene-治疗的动物的形态学相似，萎缩占优势。
(G)接着在2×2cm的背部皮肤上每日1次表皮应用DHEA(80 mg/kg)治疗OVX动物，观察到由3-5层的粘液细胞(m)构成的肥大 上皮覆盖着基底层(b)。一些内陷成为该上皮的特征(箭头)。
(H)在用DHEA+Acolbifene-治疗的动物的阴道上皮的大多数区 域，粘液细胞(m)层停留在基底细胞层(b)，尽管在许多区域，许多层 粘液细胞覆盖着基底细胞层。一些内陷成为该上皮的特征(箭头)。
(I)用DHEA+倍美力治疗在3只动物中导致混合上皮，该混合上 皮由被3-5层粘液细胞(m)覆盖的3到7个细胞层-厚复层鳞状上皮(s) 组成。在2只动物中，复层鳞状上皮的区域是主要的(插入)。Bar in insert，30μm。
(J)当联合DHEA、倍美力和Acolbifene时，上皮与 DHEA+Acolbifene组的相似。
[0030]图3表示OVX动物的阴道粘膜，在(A)中，显示了以伴随 上皮内微脓肿(M)的病灶白细胞浸润为特征的严重炎症变换和，在(B) 中，显示了以上皮厚度减少和作为上皮完全消失显现的溃疡为特征的 病灶腐蚀。
[0031]图4显示了Acolbifene对阴道上皮内层第1节段(外部 开放)的雌激素样作用，相关组进行比较。在动情期未受损大鼠(A) 和倍美力-治疗的动物(D)中，上皮为10-15层的厚度且角质化，在OVX 对照组(B)中，上皮厚度减少到4-6层，并且没有角质化(没有看见颗 粒层)，而在Acolbifene-治疗的动物(C)中，厚度恢复到9-11层，且角 质化。
[0032]图5显示了单独或联合用DHEA、倍美力和Acolbifene治 疗OVX动物36周厚，大鼠阴道第5节段水平上三个不同阴道间隔的 厚度(μm)：a)上皮，b)固有层，c)肌层和d)总厚度。增加动情期和动 情前期正常无伤动物作为参考对照。具有相同字母的组在p＜0.05下没 有统计学差异。
[0033]图6显示了第5节段图解的固有层胶原纤维的紧密度，如 低(A)，中(B)或高(C)。
[0034]图7显示了三个阴道间隔的显微照片：(E)上皮，(L)固有 层和(M)肌层，在不同的组中，在大鼠阴道的第5节段水平强调相对 肌层厚度。用条分开的3个阴道壁层表明最佳地评价了不同组的厚度 分布。A)未受损的，B)OVX，和用C)Acolbifene治疗的OVX，D)倍 美力，E)倍美力+Acolbifene，F)DHEA，G)DHEA+Acolbifene， H)DHEA+倍美力，I)DHEA+倍美力+Acolbifene。
[0035]图8显示了36周后测量的OVX和单独或联合用 Acolbifene、倍美力和DHEA治疗的OVX动物的阴道重量。加入未 受损动物作为对照。
[0036]图9显示了不同组中在第5节段水平上AR、ERα和PR 在(E)上皮、(L)固有层和(M)肌层中的免疫组织化学定位。这些条表示 三个阴道间隔间的分离。
[0037]图10和11显示了大鼠中不同SERMs间的比较：阴道上 皮形态学。
[0038]图12显示了载玻片的图象，该图象为了显示8个阴道节 段的定位(整个上排和右下角的部分)，接着相应于最初解剖学位置的 顺序的4个子宫节段(1节段子宫颈和2个子宫角的3节段-每几个角2 个部分)。第8节段包括邻近子宫颈开始初的侧面阴道皱褶。
[00239]图13显示了影响未受损大鼠
动情期(左栏)，第4节段的阴道上皮12-18层厚，第6节段12-15 层厚。
动情后期(右栏)，第4节段的阴道上皮6到10细胞层，第6节段 5到7层。
[0040]图14显示了影响OVARIECTOMIZED UNTOUCHED大 鼠。在第4节段，阴道被2到6细胞层的鳞状复层上皮排列。在第6 节段，观察到完全的萎缩，伴随平坦的2到3个细胞层。通过整个阴 道可以观察到一些小圆柱状粘液细胞的稀疏病灶。
[0041]图15显示了安慰剂/栓剂的作用。与OVX未改变组相比， 安慰剂组的阴道鳞状复层上皮略微厚一些，第4节段显示4到8个细 胞层。在第6节段，观察到了与OVX未改变组相同的形态学，具有 2-3个上皮细胞层。可以在阴道中发现小圆柱状粘液细胞病灶，与OVX 未改变的动物相比略多。
[0042]图16显示了DHEA 0.33mg/栓剂的作用。在第4节段， 阴道上皮被3到7个细胞层分层为磷状。大约20到60％的阴道内层 由对齐的粘液细胞和15到50％的肥大的粘液细胞交替组成，覆盖1 层或多层鳞状复层上皮层，和非粘液化区域。在第6节段，上皮厚度 减少到几乎在OVX未改变的动物中发现的厚度：被圆柱状粘液细 胞覆盖的的2-5个细胞层。在粘液细胞的发生中观察到巨大的变化， 这些细胞覆盖着5到75％的阴道表面，与非粘液化区域交替。
[0043]图17显示了DHEA 0.66mg/栓剂的作用。在第4节段， 复层鳞状上皮3到6细胞层厚。大约5到20％的阴道内层由对齐的粘 液细胞和10到75％的肥大的粘液细胞交替组成，覆盖着1或多层鳞 状复层上皮层。也存在非粘液化上皮区域。在第6节段，上皮厚度减 少，且由2到4个细胞层的鳞状复层上皮组成，被对齐的粘液细胞层 超越。粘液化区域与非粘液化区域交替在20到80％的阴道表面变化。
[0044]图18显示了DHEA 1mg/栓剂的作用。在第4节段，复 层鳞状上皮显示了3到9个细胞层。覆盖3到4鳞状细胞层的肥大粘 液细胞覆盖了50到70％的阴道表面，同时对齐的粘液细胞排列了5 到30％的阴道表面。非粘液化区域插在粘液化细胞中间。在第6节段， 上皮厚度也减小，且由2到4个细胞层组成。覆盖1到3个鳞状细胞 层的肥大粘液细胞覆盖了大约30到100％的阴道表面，而对齐的粘液 细胞覆盖了0到70％。还观察到了一些散开的非粘液化区域。
[0045]图19是用DHEA(栓剂)在OVX大鼠阴道内应用14天治 疗对体重影响的图表。与安慰剂组相比，以0.33mg和0.66mg剂量 给予DHEA的组的体重轻微降低，而在1mg的组中增加较显著。
[0046]图20是将0.33mg、0.66mg或1mg阴道内应用到OVX 大鼠后DHEA的血清浓度的图表。当DHEA分别以0.33mg、0.66mg 或1mg的剂量给予时，DHEA治疗7小时后的曲线下面积(AUC)值 是32+4ng.h/ml、50±7ng.h/ml和131±23ng.h/ml。
发明的详细描述
[0047]在绝经期卵巢分泌雌激素停止后，实际上所有的雄激素和 雌激素都是通过胞分泌机制由肾上腺起源的脱氢表雄甾酮(DHEA)在 外周靶组织中合成的。事实上，在卵巢雌激素的缺失中，血清DHEA的 逐渐降低似乎在常与绝经期相关的阴道干燥、炎症、性交困难和性功 能障碍中起重要作用。为了评价潜在的新的激素替代疗法的特定的雌 激素和/或雄激素作用，该激素替代疗法在其它有益效果中可减轻阴道 干燥，我们检查了卵巢切除(OVX)8个月后大鼠阴道的生态学和以单 独给药或联合的形式用DHEA，结合雌激素(倍美力)和选择性雌激素 受体调节剂Acolbifene治疗OVX动物。在动情期未受损动物和用倍 美力治疗的OVX大鼠中，典型的阴道雌激素模式是角质化的复层鳞 状上皮。OVX导致了与炎症相关的普遍萎缩，而Acolbifene降低了 炎症发病率且增加了阴道上皮中粘液细胞的数量和大小。在使用的剂 量上，倍美力完全逆转了OVX-诱导的上皮萎缩，而DHEA部分逆转 了萎缩。事实上，用DHEA治疗的OVX动物的阴道上皮变成了增生 3-5层柱状粘液和杯状细胞典型的雄激素作用。将倍美力加入到DHEA 中导致了上皮厚于未受损动物。而且，DHEA增加了固有层中胶原纤 维的紧密度。另一方面，单独用Acolbifene治疗显示了增加固有层厚 度的倾向，当与DHEA联合是达到了未受损动物的数值。
[0048] OVX之后，阴道肌层减少了46％，通过DHEA和倍美力 逆转的作用分别是41％和100％。在另一方面，OVX后阴道壁厚度 降低50％，通过DHEA和倍美力分别逆转42％和93％，而DHEA 和Acolbifene的联合将总阴道壁厚度逆转到了与未受损对照动物没有 显著差异的值。
[0049]免疫组织化学在所有DHEA治疗组中显示了强的雄激素 受体(AR)标记。在另一方面，在任何Acolbifene治疗组中没有检测到 雌激素受体α(ERα)和黄体酮受体(PR)标记。
[0050]因此，用DHEA或联合DHEA和Acolbifene治疗通过主 要的雄激素作用部分或完全地阻止了在阴道壁的各层中观察到的 OVX-诱导的萎缩改变，如通过上皮粘液化和AR增量调节所显示的。 本发明的数据也显示了DHEA对三层阴道壁特别令人关注的作用，即 高度粘液化的上皮，固有层中胶原纤维紧密度的增加和肌层厚度的增 加。因此，DHEA对阴道粘膜发挥了雄激素和雌激素作用，从而进一 步提供了生理学替代疗法。虽然被检查的每个化合物都具有对阴道功 能的潜在有益效果，单独的DHEA或与其联合可缓解阴道干燥和恢复 总体阴道生理学和帮助纠正与绝经期相关的性功能障碍。DHEA和其 它成分可局部或全身施用。
[0051]本发明的选择性雌激素受体调节剂具有有下述特征的分子 式：a)被1到2个插入碳原子间隔的两个芳环，两个芳环都未被取代 或者被羟基或在体内转变为羟基的基团取代；和b)具有芳环和叔胺官 能团或其盐的侧链。
[0052]本发明的一个优选的SERM是PCT/C A96/00097(WO 96/26201)中报导的EM-800。EM-800的分子结构是：
[0053]本发明另一优选的SERM是US 6,710,059 B1中报导的 acolbifene(EM-1538，也称为EM-652.HC1)
是有效的抗雌激素EM-652的盐酸盐。与EM-800相比，EM-1538 合成更加安全、简单和容易。给予EM-800或EM-1538，被认为在体 内产生相同的活性化合物。
[0054]另一优选的SERM是拉索昔芬(CP-336，156；(-)-顺式- (5R，6S)-6-苯基-5-[4-(2-吡咯烷-1-基乙氧基)苯基]-5，6，7，8-四氢萘-2- 醇，D-(-)-酒石酸盐)(可从Pfizer Inc.，USA获得)。
[0055]本发明其它优选的SERMs包括他莫昔芬((Z)-2-[4-(1，2-二 苯基-1-丁烯基)]-N，N-二甲基乙胺)(可从Zeneca，UK获得)、托瑞米芬 (可从Orion-Farmos Pharmaceutica，Finland，or Schering-Plough获 得)、屈洛昔芬和雷洛昔芬(Eli Lilly and Co.，USA)、阿佐昔芬(LY 335563)和LY 353381(Eli Lilly and Co.，USA)、Ospemifene(FC 1271)(可 从Orion-Farmos Pharmaceutica，Finland获得)、 Iodoxifene(SrnithKline Beecham，USA)、左美洛昔芬(3，4-反式-2，2-二 甲基-3-苯基-4-[4-(2-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)-7-甲氧基色 满](Novo Nor disk，A/S，Denmark)，其公开于Shalmi等人WO 97/25034，WO 97/25035，WO 97/25037，WO 97/25038；和Korsgaard 等人WO 97/25036中)、GW-5638(被Willson等人，1997，Endocrinol， 138(9)：3901-3911公开)、由Aventis(France)开发的SERM 3339和吲 哚衍生物(Miller等人EP 0802183A1公开)和TSE-424和由Wyeth Ayers(USA)开发，公开于JP 10036347中的ERA-923(American home products corporation)和公开于WO 97/32837中的非甾体雌激素衍生 物。
[0056]当需要效能时使用的任何SERM都可以使用，如制造者 推荐的那些。合适的剂量在本领域中是已知的。任何商业上可获得的 其它非甾体抗雌激素都可根据本发明使用。可以使用任何具有与 SERMs相似活性的化合物(例如：雷洛昔芬)。
[0057]当口服给药时，根据本发明施用的SERMs优选以0.01 到10mg/kg体重每天(优选0.05到1.0mg/kg)的剂量范围给药，对于 平均体重的人来说每天10mg，尤其是每天20mg，优选以两个相等 的分剂量，或当胃肠外给药(即，肌内、皮下或经皮给药)时，以0.003 到3.0mg/kg体重每天(优选0.015到0.3mg/ml)的剂量范围给药，对 于平均体重的人来说每天1.5mg，尤其是每天3.0mg，优选为两个相 等的分剂量。优选SERMs与下述药学可接受的稀释剂或载体一起给 予。
[0058]优选的5型cGMP磷酸二酯酶抑制剂是由Pfizer USA以 商品名″万艾可″推向市场的昔多芬、Eli Lilly USA以商品名″Cialis″ 推向市场的Tadalafil、Bayer(德国)以商品名″Levitra″推向市场的伐 地那非。还优选当前正在开发的5型cGMP磷酸二酯酶抑制剂：Dong-A Pharm Tech(韩国)开发的DA-8159、Merck(德国)开发的EMR-62203、 Seiyaku(日本)开发的TA-1790、Schering-Plough(美国)开发的SCH- 446132和Pfizer(美国)开发的UK-371800。
[0059]1个优选的前列腺素是由NexMed(美国)以商品名″Alprox- TD″推向市场的前列腺素E1。
[0060]对于本文推荐的所有剂量，主治临床医生应当监测个体患 者反应，并相应调整剂量。
本发明效力的实施例
实施例1
材料和方法
动物和处理
[0061]在实验开始时使用体重大约220-270g的10到12周龄的 雌性Sprague-Dawley大鼠(Crl:CD(SD)Br VAF/PlusTM)(Charles River Laboratory，St-Constant，Canada)。在开始实验前，使动物适应环 境条件至少一周(温度：22±3℃；湿度：50±20％；12-h光照-12-h 黑暗循环，在07:15h开灯)。将动物单独圈养，它们可自由接近水和 啮齿动物食物(Lab Diet 5002，Ralston Purina，St-Louis，MO)。本 实验是根据在动物实验室中保护和使用实验动物的CCAC指南进行 的，该指南是由加拿大动物保护理事会(CCAC)和实验动物保护鉴定 和委派协会(AAALAC)批准的。
[0062]将总共126只雌性大鼠随机分成9组，每组14只动物， 分组如下：1)未受损对照组；2)切除卵巢对照组(OVX)；3) OVX+Acolbifene(2.5mg/kg)；4)OVX+倍美力(0.5mg/kg)；5)OVX+ 倍美力+Acolbifene；6)OVX+DHEA(80mg/kg)；7) OVX+DHEA+Acolbifene；8)OVX+DHEA+倍美力；9) OVX+DHEA+Acolbifene+倍美力。在研究的第一天，在异氟烷-诱导 麻醉下将各组动物(除了第1组)双侧切除卵巢(OVX)。通过口服强饲 法(0.5ml/大鼠)施用作为0.4％甲基纤维素混悬液中的倍美力和 Acolbifene，同时将50％乙醇-50％丙二醇中的DHEA(0.5ml/大鼠)局 部应用到脱了毛的2×2cm背部皮肤上。倍美力的剂量选择对应于足 以逆转OVX-引起的子宫萎缩的最小剂量，而Acolbifene则以足以引 起与OVX类似的子宫萎缩的剂量给药，在它对倍美力-处理的OVX 动物给药以后。所用的DHEA剂量使得DHEA血中浓度为70-100 nmol/L。在研究的第2天开始处理，化合物每天给药一次，共给药36 周。未受损对照组和OVX对照组的动物只接受赋形剂。
[0063]最后一次给药后24小时，在异氟烷麻醉下通过腹主动脉 处放血将通宵禁食的动物处死(9只动物每组)，或者通过心内灌注10％ 中性缓冲福尔马林将通宵禁食的动物处死(5只动物每组)。从非灌注 动物中收集阴道并称重，而从灌注动物中收集的阴道则用黑墨水在腹 侧标记，然后如下所述进行修剪。
组织学手术
[0064]将各只灌注动物的未受损阴道后固定(post-fixed)在10％中 性缓冲福尔马林中。然后将各个阴道分成7个相等的横节段，如图1 所示，常规处理，并完全包埋在同一个石蜡块中。在石蜡块内部，将 7个阴道圆柱状节段按照它们原来的解剖位置的顺序放置，并与石蜡 块表面垂直定向放置，然后在横切面上切割各节段。每只动物都切割 4μm厚的石蜡切片，并用苏木精-曙红染色，以进行形态学检查。
组织形态测定术
[0065]在第5节段上进行不同阴道层的测量(图1)，该第5节段 大约在中间区域和阴道部子宫(第7节段)之间的一半位置处。发现该 第5节段具有典型的上皮表面和足够厚的平滑肌。用DC-330 3CCD 彩色照相机(Dage-MTI，Michigan City，IN，USA)拍照，并用Image-Pro Plus 3.0软件(Media Cybernetics，Silver Spring，MD，USA)进行定 量。如此，使用×5物镜(Leica Microsystems，Willowdale，Ont.， Canada)，从上皮层和肌层的典型区域中得到了每层3-4个厚度的测 量结果，和3个阴道层总共的测量结果。如此测量总的阴道厚度、上 皮层厚度和肌层厚度。从总的阴道厚度中减去上皮层和肌层的厚度得 到固有层的厚度。
免疫组织化学
[0066]用Zymed SP试剂盒(San Francisco，CA)进行免疫染色。 在甲醇中使石蜡切片(4μm)脱石蜡，并通过乙醇再水合。用3％H2O2的甲醇溶液预培养30min消除内源性过氧化物酶活性。应用采用柠 檬酸盐缓冲液的微波回收技术(microwave retrieval technique)(Tacha and Chen，1994)。载玻片冷却以后，用10％山羊血清阻断非特异性 结合20min。然后在室温下分别用1∶200、1∶250和1∶250浓度的 ERα(AB-1，Calbiochem，California)、AR(N-20，Santa Cruz Biotechnology，California)或PR(Ab-4，NeoMarkers，California)抗 体培养切片1.5h。在PBS缓冲液中清洗以后，用生物素化的抗家兔 二次抗体培养各切片10min，此后用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物 酶再培养10min。将二氨基联苯用作色原体使生物素/链霉菌抗生物 素蛋白-过氧化物酶复合物在显微镜监测下显影。用#2 Gill′s苏木精复 染30秒。为了对照，用培养抗体的过量的肽进行免疫吸附法，或用 非免疫家兔IgG来代替。如表2所示进行免疫染色过的细胞核的数量 和强度的半定量评价。
表1.7个大鼠阴道节段中的上皮层、固有层和肌层的组织学评价
E＝上皮形态：KS(角化复层鳞状)，LHM(大的肥大粘液细胞)，
SCM(小的对齐的柱状或立方粘液细胞)，MSM(被粘液细胞混合 复层鳞状覆盖)，
A(萎缩：小的立方细胞)。
对于给定节段的两种不同的缩写表示两种不同的模式，第一种是 主要的。
′L＝固有层厚度：T(厚)，MT(中等厚)，t(薄)；′胶原纤维的紧密程度：H(高)，M(中)，L(低)；
M＝肌层厚度：T(厚)，MT(中等厚)，t(薄)，s(不足)。
表2.在大鼠阴道第5节段的上皮层、固有层和肌层中免疫染色 过的细胞核的AR、Erα和PR的数量和强度的半定量评价。
-雄激素受体(AR)，雌激素受体α(ERα)，黄体酮受体(PR)，上皮 层(E)，固有层(L)，肌层(M)。
-代表标记细胞核的半定量评价数字：0＝无，1＝低，2＝中，3＝ 高
-标记强度表示为：低+，中++，和高+++
统计分析
[0067]数据表示为每组8-9只动物的阴道重量的平均数±SEM或 每组5只动物的阴道层厚度测定的平均数±SEM。根据Duncan-Kramer 的多范围检验测定统计学显著性(Kramer，1956，Biometrics，12： 307-310)。
结果
大鼠阴道各层的形态学和厚度
[0068]为了精确详细的检查大鼠阴道壁的三个层，也就是上皮 层、固有层和肌层，首先检查沿着纵轴获得的7个节段(图1)。虽然 在各组之间观察到了显著的形态差异，但是一般而言，在同一组的所 有动物中差异是一致的，并且第2、3、4、5、6和7节段已经显示出 了相似的上皮形态。观察到的极少数例外的情况将在后面提及。因此 将第5节段用于举例说明各种处理对阴道上皮的影响。
[0069]在OVX组中，卵巢刺激的缺乏导致阴道上皮萎缩，其特 征在于所有节段(表1和图2C)都存在一些小的粘液细胞区域。最重要 的是，经常发现伴随着上皮内微脓肿的很多病灶集中点(上皮组织内成 团的白细胞的小区域)的中度到重度炎症。这些改变经常伴随着病灶侵 蚀(上皮层部分消失的区域)和溃疡(上皮层完全消失)(图3)。
[0070]在用Acolbifene处理的OVX动物中，第1节段显示出了 与未受损组类似的角化复层鳞状上皮，除了它包括9-11个细胞层以 外，而相比较的是，在动情期动物中或当OVX动物接受倍美力时， 是10-15层(图4)。因此，经Acolbifene处理的动物第1节段的上皮厚 度高于OVX大鼠，它只含有4-6个细胞层。在其它节段中(表1)，基 底层被低柱状粘液细胞层所覆盖(图2D)，后者比OVX动物发育得更 多。在OVX+Acolbifene组中，在5只动物中只有3只显示出了最小 炎症的迹象，而在所有的OVX动物中普遍发现了中度到重度的炎症 改变。
[0071]在所有的组中，第1节段显示出了类似的复层鳞状上皮， 除了在OVX组的动物中，在该组中，萎缩是主要的特征(图4)。而且， 在OVX+DHEA和OVX+DHEA+Acolbifene组中，粘液细胞经常伴随 着第1节段的占优势的复层鳞状上皮(未显示)。
[0072]接受DHEA的OVX动物阴道上皮的7个节段由大型多层 柱状粘液细胞组成，该细胞具有扩张的细胞质液泡，这是雄性作用的 典型特征(表1，图2G)。多个大型内陷具有DHEA处理后的上皮的特 征。在OVX+DHEA+Acolbifene组的所有节段中发现了类似的上皮形 态，除了粘液细胞的大小和它们的层数增多了以外(表1，图2H)。在 DHEA+倍美力处理的动物中，从第2节段到第5节段观察到了由被 多层粘液细胞覆盖的不同比例鳞状上皮组成的″混合″类型的厚复层上 皮(表1，图21)，从而揭示了联合的雌激素作用和雄激素作用。在该 组中，3只动物在上述节段上显示出了粘液化，而在另外2只动物中， 在所有节段中均观察到了复层鳞状上皮(表1)。当倍美力与DHEA和 Acolbifene联合时，上皮就类似于DHEA+Acolbifene组，从而说明了 雌激素引起的鳞状细胞增殖被Acolbifene阻断(表1和图2J)。
[0073]DHEA向OVX动物给药将阴道上皮的厚度增加到了38±4 μm，而Acolbifene向DHEA的加入并没有改变上皮厚度，它仍旧保 持在37±5μm。当倍美力和DHEA联合对OVX动物给药时，观察 到了84±6μm的极大的厚度，这个值与单独接受倍美力的动物组的 值没有显著区别。最后，倍美力、DHEA和Acolbifene的联用导致了 32±3μm-厚的上皮，这个值与单独接受DHEA的组或接受DHEA与 Acolbifene联用的组的值类似。
固有层
[0074]将阴道内胶原纤维的紧密程度分为低度、中度和高度(图 6)，如在接近上皮的地方所观察到的。《低度》和《中度紧密》分别与松 弛地或较不松弛地聚集在一起的粗胶原纤维的存在有关，而《高度紧 密》是用于描述紧密填充的精细胶原纤维的术语，这样的胶原纤维显 示出了光滑的有织纹的外观。在所有的动物中，相对于胶原的量存在 有相对较少比例的纤维细胞，它们主要表现为鳞状和萎缩。
[0075]仔细检查每只动物(表1)发现，一般而言，第1节段中胶 原纤维的紧密程度是中度(除了在动情期大鼠和倍美力-处理的OVX动 物中它是低的，或在OVX大鼠和DHEA-处理的OVX大鼠中它是高 的)，而在第2和3节段中紧密程度增大至达到平台，一般保持不变直 至第7节段。因此，沿着动情期未受损大鼠阴道的纵轴，胶原纤维的 紧密程度在第1-3节段中是低的，在第4-7节段中是高的。萎缩经常 与OVX组和OVX+Acolbifene组中胶原纤维的紧密程度增加有关(表 1)。在倍美力-处理的OVX动物中，第1节段的紧密程度是低的，第 2和3节段是中度，而在其他节段中，胶原纤维的紧密程度逐渐增大， 在第6和7节段变得最大。
[0076]沿着阴道的固有层厚度的可见光学显微镜检查普遍揭示了 第1节段是中等厚度，而在第2-4节段中较厚。在第5-7节段中，厚 度渐进地增大到与第1节段相似的水平。在第5节段中测量到的固有 层厚度的对应平均值(图5B)表明，OVX导致固有层厚度显著增大(在 未受损组中是76±2μm对135±28μm)，而Acolbifene引起了非显 著的减小(60±8μm)。在OVX动物中在倍美力或倍美力+Acolbifene 给药以后观察到的增加维持在低于未受损组的水平(100±9μm和90+3 μm，分别相对于135±28μm)。DHEA的给药也导致了固有层厚度的 统计学非显著的增加(96±20μm)，并且Acolbifene的加入导致了厚 度进一步增加(136±17μm)，达到了未受损动物的水平。用倍美力 +DHEA处理OVX动物显著增大了厚度(144±14μm)，当与单独DHEA 给药相比时。最后，用倍美力+DHEA+Acolbifene处理的动物显示出 厚度(99±9μm)类似于单独用DHEA处理的组，并且低于倍美力 +DHEA组，虽然这种差别在统计学上并不显著。
[0077] DHEA导致肌层厚度中度增加(50±2μm)，通过加入 Acolbifene该厚度稍微减小(41±3μm)。最后，用倍美力和DHEA联 合处理导致厚度显著增加(62±3μm)，当与单独用DHEA处理的动物 相比时。当把Acolbifene加入到倍美力和DHEA中时，肌层厚度减 小(46±5μg)至与DHEA和Acolbifene给药相当的数值。
[0078]当测量总阴道壁厚度时(图5D)，构成外膜的结缔组织的外 部薄层没有被包括在内。OVX导致了显著的(51％)阴道壁萎缩(128±3 μm，相对于未受损动物的262±39μm)，并且Acolbifene加入到OVX 没有作用(108±8μm)(图7A、B和C)。倍美力处理将总厚度维持在 与未受损动物相似的数值上(253±10μm)，而Acolbifene向倍美力中 加入则逆转了倍美力的作用(150±4μm)(分别是图7O和E)。DHEA 处理所达到的总阴道厚度(184±21μm)比倍美力单独处理组低大约 25％(图7F)。另一方面，Acolbifene加入到DHEA导致了非显著的厚 度增加(213±20μm)，这种增加非显著地区别于未受损组(图7G)。最 后，倍美力和DHEA对OVX动物联合给药将厚度(290±13μm)显著 增加至与未受损动物相似的数值(图7H)。Acolbifene向DHEA和倍美 力的加入将数值(176±11μm)逆转到与DHEA单独给药没有显著区别 的程度(图7I)。
阴道重量
[0079]处理了8个月以后，在不同组之间观察到的阴道重量的改 变(图8)通常随着上述形态学观察而出现。的确，OVX以后阴道重量 减小了大约50％(101±5mg)，与未受损组相比(205±11mg)，而用 Acolbifene单独处理OVX动物对于阴道重量却没有影响。另一方面， 倍美力给药导致了阴道重量增加，但仍然没有达到未受损动物的数值 水平(170±9mg)，而Acolbifene加入到倍美力中则将雌激素-引起的 重量增加逆转至与OVX动物类似的数值水平(96±4mg)。相反，当 DHEA对OVX动物给药时，阴道重量增加至与倍美力-处理组类似的 数值水平(171±12mg)，并且Acolbifene和DHEA的联用导致了重量 减小(135±9mg)，该数值仍然高于OVX组。最后，倍美力和DHEA 对OVX动物联合给药导致阴道重量增加(179±10mg)达到了与 OVX+DHEA组和OVX+倍美力组类似的数值。Acolbifene向该联用 的加入没有显著影响(194±12mg)。
[0080]OVX动物的DHEA处理导致三个阴道层很多细胞核的强 烈标记或AR，这是当采用DHEA+Acolbifene联用和DHEA+倍美力 联用时所发现的相同的模式，而后一组上皮浅层中较少数量的标记细 胞核则除外。DHEA、倍美力和Acolbifene的联合也导致了三个阴道 壁层大部分细胞核的强染色。
讨论
[0081]阴道干燥或萎缩性阴道炎，也被称为泌尿生殖器萎缩，连 同性功能障碍是绝经后女性的常见问题(Notelovitz，2000， Menopause，7(3)：140-142)。最常见的症状是干燥、灼热、搔痒、刺 激和性交困难，从而导致性欲降低和生活质量下降(Berman等人， 1999，Curr Opin Urol，9(6)：563-568)。由于已知存在雌激素丧失， 因此雌激素替代疗法(ERT)和HRT是治疗的选择。然而，由于对女性 性甾体生理学的新的信息强烈建议了雄激素的重要作用(Labrie等人， 2003，End Rev，24(2)：152-182)，因此本研究比较了HRT或ERT 的备选方案的全身激素作用，也就是DHEA单独或与纯抗雌激素 Acolbifene联合，以及与倍美力一起对大鼠阴道形态和性甾体受体表 达的影响。DHEA经皮给药避免了通过肝脏的首过效应(Labrie等人， 1996，Endocrinol，150：S107-S118)。
[0082]最后，我们的结果显示出了用倍美力处理有显著的阴道重 量增加，当与OVX动物相比时，该值类似于在DHEA-处理组中观察 到的值。适当的回顾如下，虽然啮齿动物阴道和子宫重量增加通常被 用作动情力的衡量标准，然而在其它化合物中，这些器官也可以响应 黄体酮和睾酮(Emmens and Martin，1964，Dorfman Ed，Ed Academic Press NY：1)。
[0083]在可能的三联组合中，马雌激素倍美力的目标是作用于脑 以缓解血管舒缩症状。事实上，纯选择性抗雌激素Acolbifene与雌激 素联合给药以中和雌激素不希望出现的外周效应的益处已经由Labrie 等人充分描述了(Labrie等人，2003，Endocrinol，144(11)：4700-4706)。 在本研究中，当Acolbifene对OVX动物施用时，由SERM引起的最 典型的形态学特征是覆盖基底细胞层的壁对齐的小粘液细胞浅层的出 现，这是在倍美力+Acolbifene组中略微更显著的模式，这种模式在用 Acolbifene处理的所有组中仍然具有优势，包括当把SERM加入到 DHEA中时。在未成年大鼠(Anderson and Kang，1975，Am J anat， 144(2)：197-207)和成年大鼠(Yoshida等人，1998，Cancer Lett，134(1)： 43-51)中已经报道了在抗雌激素处理下的阴道上皮粘液化。虽然已经 将这种形态模式与黄体酮引起的粘液化进行了对比(Anderson and Kang，1975，Am J anat，144(2)：197-207)，但是由抗雌激素引起的 上皮粘液化的分子机制仍然是未知的。
[0084]已经在绝经后女性中报道了DHEA的很多有益效果 (Labrie等人，1997，J.Clin.Endocrinol.Metab.，82：3498-3505；Labrie 等人，1991，Mol Cell Endocrinol，78：C113-C118)。由于对DHEA 特异的受体还没有被表征，所以在大鼠阴道DHEA处理以后观察到的 形态学改变反映出它胞分泌转变成通过胞分泌机制具有雄激素作用和/ 或雌激素作用的活性性甾体(Labrie等人，1991，Mol Cell Endocrinol， 78：C113-C118)。那些改变包括强烈的上皮粘液化、高度敏锐的紧密 性、具有细微纹理的固有层胶原纤维和中度的肌层厚度都增加了，当 与OVX动物相比时。两种最先的形态学改变是典型的雄激素作用， 而第三是显示出了雌激素样活性，这从伴随着的肌层内黄体酮受体表 达增加得到了进一步的支持。
[0085]由于DHEA在外周组织中转变成了雄激素和雌激素二者 之一或这二者，所以在本研究中用DHEA处理OVX动物后观察到的 稠粘液化的多层上皮表明了大鼠阴道内粘液化的占优势的雄激素作 用，这种作用可以在上皮水平掩盖任何可能的共存的少量雌激素作 用。先前的研究已经显示出了大鼠阴道内相同的粘液化作用(Sourla 等人，1998，J Steroid Biochem.Mol.Biol.，66(3)：137-149)。在那 项先前的研究中，阴道内应用DHEA取得了显著的作用，其剂量比 DHEA应用于背部皮肤之后产生作用所需的剂量低十倍。
[0086]目前的数据表明在大鼠阴道内共同存在有主要的雄激素作 用和次要的雌激素作用。而且，目前的结果得到了OVX动物阴道上 皮的观察结果的很好的支持，所述动物接受同样局部应用的DHEA， 和我们的研究中所用的相比，还加上皮下剂量的抗雄激素氟他胺 (FLU)(未公布的结果)。的确，由DHEA的雄激素成分产生的粘液化 的雄激素作用被FLU完全逆转了，并且产生了复层鳞状上皮，这是 典型的雌激素作用(数据未显示)。如果DHEA在大鼠阴道中具有特殊 的雄激素作用(粘液化)，那么这种作用将被FLU逆转，然后又会观察 到与OVX动物类似的萎缩的上皮。在性腺切除的雄性和雌性大鼠中 进行的先前的研究已经清楚地证明了DHEA的处理会导致对前列腺、 精囊和子宫产生刺激的雄激素和/或雌激素作用，这取决于所研究的靶 组织(Labrie等人，1988，Endocrinol，123：1412-1417)。
[0087]另一方面，DHEA+Acolbifene的联合显示出了上皮粘液 化程度减少，从而表现出很好对齐的粘液细胞层--Acolbifene作用 --和多层肥大粘液细胞内陷的交替，这对应于DHEA的雄激素作 用。因此，Acolbifene抑制DHEA的部分雌激素作用，而DHEA的 主要雄激素对应成分(counterpart)则被保留，并加入了Acolbifene的 少许雌激素样作用，后者在阴道口水平上能看得最清楚。在Acolbifene 加入到DHEA之后观察到的阴道重量减少比Acolbifene加入到倍美 力之后获得的阴道重量减少要小，这说明了被抗雌激素逆转的DHEA 的雌激素成分较少，而主要的雄激素成分未受影响。另外，在 DHEA+Acolbifene组中固有层厚度和胶原纤维紧密程度的增加，当分 别与OVX组和未受损动物相比较时，再次表明了雄激素在增加胶原 紧密程度和厚度方面的潜在作用，因为DHEA的雌激素成分被 Acolbifene阻断了。
[0088]其它研究已经证明了DHEA对大鼠乳腺(Sourla等人， 1998，Endocrinol，139：753-764)、皮肤皮脂腺(Sourla等人，2000， J Endocrinol，166(2)：455-462)和骨矿物质密度(Martel等人，1998， J Endocrinol，157：433-442)的作用几乎是唯一的雄激素作用。然而， 大鼠阴道内DHEA的雌激素作用的存在先前已经在用该化合物处理过 的未成熟大鼠中通过诱导阴道开放和早熟排卵而证明过了，而DHT， 一种不能芳构化成雌激素的雄激素，没有产生这种作用(Knudsen and Mahesh，1975，Endocrinol，97(2)：458-468)。大鼠阴道组织使雄激 素尤其是Testo芳构化的能力很有可能解释DHEA在该器官中的大部 分雌激素作用(Lephart等人，1989，Biol Reprod，40(2)：259-267)。 雄甾-5-烯-3β，17β-二醇(5-二醇)，已知与雌激素受体结合的一种DHEA 代谢产物(Shao等人，1950，J Biol Chem，250：3095-3100；Poortman 等人，1975，J Clin Endocrinol Metab，40(3)：373-379；Van Doorn 等人，1981，Endocrinol，108：1587-1594；Adams等人，1981，Cancer Res，41：4720-4726)，也可能促成雌激素作用(Poulin and Labrie，1986， Cancer Res，46：4933-4937)。因此，抗雌激素Acolbifene与DHEA 的计划联用将会避免5-二醇的任何不希望的刺激作用。另一方面，通 过防止骨流失，acolbifene还将显示出额外的益处(Martel等人，2000， J Steroid Biochem Mol Biol，74(1-2)：45-56)。
[0089]在我们的知识的最大范围之内，先前还没有研究显示出 DHEA对固有层胶原纤维的紧密度和形态具有刺激作用，范围缩小一 些，甚至没有显示出对肌层的刺激作用。这种DHEA-衍生的雄激素 和雌激素作用对于绝经后女性的阴道功能可能会具有有益的影响，并 且将为5型磷酸二酯酶抑制剂如昔多芬或tadalafil的作用提供所需的 底物，所述作用有可能是经由雄激素或雌激素-诱导的内皮一氧化氮合 酶(eNOS)-介导的促进阴道平滑肌舒张(综述在Munarriz等人，2003， J Urol，170(2 Pt 2)：S40-S44，Discussion S44-S45)。事实上，已经发 现了Acolbifene引起了人类和大鼠上皮细胞的eNOS(Simoncini等人， 2002，Endocrinol，143(6)：2052-2061)。
[0090]在用DHEA处理的所有组中获得的结果显示，从大鼠阴 道内DHEA胞分泌转化衍生的雄激素在三个组织隔层中以类似的方式 上调了AR表达。
[0091]伴随着雄激素对大鼠阴道AR的强烈调节所观察到的有益 的形态学改变说明，绝经后女性DHEA-衍生的雄激素的血清水平下 降可能会促成这个年龄组的阴道健康下降并最终促成性欲缺乏和性快 感丧失。确实在为性欲降低寻求咨询的女性中发现了下降的血清总 Testo、游离Testo和DHEA-S(Guay and Jacobson，2002，J Sex Marital Ther，28 Suppl 1：129-142)。
[0092]在本研究中，我们已经显示了用DHEA或用DHEA与 Acolbifene的联合以及用DHEA与Acolbifene和倍美力的联合处理 OVX雌性大鼠，经由AR，通过占优势的雄激素作用，逆转了在阴道 中发现的OVX-引起的萎缩改变，这反应在强烈的上皮粘液化和固有 层内胶原纤维的紧密度增加。单独用DHEA处理也适当地增大了肌层 厚度。该数据强调了从外周靶组织中的DHEA和DHEA-S局部合成 的性甾体的重要性。除了这些有益作用以外，Acolbifene还降低了炎 症的发病率，这很可能是通过阴道口的保护角质化鳞状上皮的雌激素- 样诱导作用和内部粘液化的抗雌激素作用。
[0093]已经进行了各种尝试来解决阴道干燥的问题，该问题通常 与性交困难和性快感丧失相关联。举例来说，通常开出局部阴道雌激 素制剂的药方来提供缓解，但是子宫内膜可能被非对抗性雌激素刺激 (Mattson等人，1989，Maturitas，11：217-222)。在切除子宫的绝经 后女性中，ERT仍然被使用，但公知具有发展成乳腺癌的增加的风险。 而且，ERT通过增加性激素结合球蛋白而降低血浆雄激素水平，这可 能会引起相对的卵巢和肾上腺雄激素缺乏，从而为同时存在的生理雄 激素替代创造了额外的理论(Casson等人，1997，Obstet Gynecol， 90(6)：995-998).
实施例2
方法
动物和处理
[0094]使用切除了卵巢的体重215-265g的10到12周龄的雌性 Sprague-Dawley大鼠(CrL:CD(SD)Br)(Charles River Laboratory，St- Constant，Canada)。将动物单独圈养在环境控制室内(温度：22±3℃； 湿度：50±20％；12-h光照-12-h黑暗循环，在07:15h开灯)。动物 可自由接近自来水和合格的啮齿动物食物(Lab Diet 5002(团粒)， Ralston Purina，St-Louis，MO)。本实验是在动物实验室中根据保护 和使用实验动物的CCAC指南进行的，该实验室是由加拿大动物保护 理事会(CCAC)和实验动物保护鉴定和委派协会(AAALAC)批准的。
[0095]进行不同的实验：两项20天的研究和两项8个月的研究。 在这两项第一个实验的每一个中，将动物随机分成3组，每组13或14 只动物，分组如下：1)未受损对照组；2)切除卵巢(OVX)对照组；3)OVX+ 雷洛昔芬(0.5mg/kg)，或3)OVX+LY 363381(0.5mg/kg)。在第一项8 个月的研究中，将动物随机分成5组，每组7-8只动物，分组如下：1) 未受损对照组；2)切除卵巢(OVX)对照组；3)OVX+Acolbifene(0.5 mg/kg)；4)OVX+ERA-923(0.5mg/kg)；5)OVX+TSE-424(0.5mg/kg)。 在另一项8个月的研究中，将动物随机分成3组，每组10-11只动物， 分组如下：1)未受损对照组；2)切除卵巢(OVX)对照组；3)OVX+拉索 昔芬(0.5mg/kg)。在研究的第一天，将适当组的动物在异氟烷麻醉下 双侧切除卵巢(OVX)。然后从研究的第1天到第20天，或者从研究的 第1天到第32周通过口服强饲法每天一次给予作为0.4％甲基纤维素 混悬液(0.5ml/大鼠)中的试验化合物。
[0096]最后一次给药后24小时，在异氟烷麻醉下通过放血将动 物处死。收集阴道并在切除后立即将其浸入10％中性缓冲福尔马林。 然后将阴道切成7个横节段(用于Acolbifene、ERA-923和TSE-424)， 或者只将样品切成中部横节段(雷洛昔芬、拉索昔芬或LY 363381)。 然后常规处理各节段，并包埋在石蜡块中。适当的时候，将所有节段 按照它们原来的解剖位置的顺序放置在石蜡块中，并与石蜡块表面垂 直定向放置，从而能在横切面上切割各节段。每只动物都切割4μm 厚的石蜡切片，并用苏木精-曙红染色，以进行形态学检查。
[0097]在图10和11中显示了不同SERM之间的比较：在放大 率200×下，OVX大鼠的阴道上皮形态。图A到D显示了阴道第1 节段(阴道口)的上皮形态。虽然OVX动物的上皮是薄的(4-6个细胞 层)，萎缩的，并且在A中没有显示出可见的颗粒层，但是在3个SERMs 中同样的上皮却是厚的(8-11个细胞层)，并且在B、C和D中显示出 了多层颗粒隔层。在E到K中，描述了位于阴道中部的节段。在OVX 动物中，E中的阴道上皮是薄的和萎缩的(2-3个细胞层)，然而在所有 的处理组中该厚度却增加了(F到K)，这是由于覆盖基底细胞层的一 个(Acolbifene、ERA-923和TSE-424)或多个(雷洛昔芬、拉索昔芬或 LY 363381)粘液细胞层的存在。
实施例3
材料和方法
[0098]实验开始时，使用体重大约250-275g的10到12周龄的 雌性Sprague-Dawley大鼠(CrL:CD(SD)Br)(Charles River Laboratory，St-Constant，Canada)。在实验开始前使动物适应环境 条件(温度：22±3℃；湿度：50±20％；12-h光照-12-h黑暗循环， 在07:15h开灯)至少一周。将动物单独圈养，并可自由接近水和啮齿 动物食物(Lab Diet 5002，Ralston Purina，St-Louis，MO)。本实验 是根据保护和使用实验动物的CCAC指南进行的，该指南是由加拿大 动物保护理事会(CCAC)和实验动物保护鉴定和委派协会(AAALAC) 批准的。
[0099]将总共25只雌性大鼠随机分成5组，分组如下：1)3只切 除卵巢的不受影响的对照组(OVX)；2)4只OVX+安慰剂栓剂；3)6只 OVX+0.33mg DHEA栓剂；4)6只OVX+0.66mg DHEA栓剂；5)6只 OVX+1.00mg DHEA栓剂。在研究的第1天，在异氟烷-诱导麻醉下 将所有组的动物都进行双侧卵巢切除(OVX)。在研究的第5天开始将 一个栓剂插入阴道，并持续每天一次，直至研究的第18天，总共处 理14天。将栓剂轻轻地放在阴道开口处，然后在小光滑玻璃棒的帮 助下在阴道内小心推大约2-3mm，玻璃棒用70％乙醇消毒，并在各 只动物使用之间使其干燥。
[0100]最后一次给药后24小时，在异氟烷麻醉下通过放血将动 物处死。收集阴道——包括尿道——和子宫，然后如下所述进行修建。 为了进行进一步的分析，抽取两片腹股沟乳腺的样品，还抽取大约2 ×2cm的脱毛背部皮肤正方形片的样品，将后者放在一张卡片纸上并 轻轻地弄平。
栓剂的制备
[0101]用Whitepsol H-15基质制备DHEA栓剂(Medisca， Montreal，Canada)。也可以使用任何其它的亲脂性基质，如Fattibase、 Wecobee、可可脂、可可豆油或Whitepsol基质的其它联合。称取适 量DHEA，得到最终体积50μl±3μl，0.33mg或0.66mg或1.00mg 每栓剂的最终浓度。根据先前测量过的栓剂基质密度计算要称重以获 得所需最终体积的栓剂基质小丸的适当的量，是47.5mg每50μl。将 栓剂基质放入小烧杯中，以50％功率用微波熔化大约3min和30sec， 然后转移到加热板上，将其调节到最低功率，以保持栓剂基质温度为 50±3℃。然后将DHEA微粉(从Scheweizerhall Inc.得到，纯度100％) 一次性全部加入基质中，在被光滑的圆端玻璃棒小心缓慢压碎和溶解 之前，让整团物质下沉并润湿3min。最后，用带有预热吸管端的1000 μl-Gilson移液管将含有溶解的DHEA的基质(安慰剂是不含DHEA的 基质)倾倒入含有一连串50μl-模具的管架内。这些模具是由微量离心 管制成的，它们中的每一个之前都用50μl水标过刻度，并在水平面 处拉出的水平线处切断。室温冷却30min以后，将栓剂在4℃下再 放置30min。最后，用保险刀片修建溢出的基质，从模具中将栓剂取 出，并在4℃下保存在密封玻璃瓶中直至使用。在给动物应用之前， 使它们恢复到室温。
组织学手术
[0102]切除后立即将器官浸入10％中性缓冲福尔马林中。将各 个阴道和子宫分成8个相等的横节段和4个横节段，这4个横节段中 分别包括来自子宫颈的2个节段和来自两个邻近的角(proximal horn) 和远端的角(distal horn)之一的2个节段。将这些节段常规处理，并全 部一起包埋在同一个石蜡块中。在石蜡块内部，将所有的节段按照它 们原来的解剖位置的顺序放置，并与石蜡块表面垂直定向放置，然后 在横切面上切割各节段。每只动物都切割4μm厚的石蜡切片，并用 苏木精-曙红染色，以进行形态学检查。
结果
上皮形态
[0103]在检查了所有阴道节段以后，发现第4和6节段对于各处 理组之间的比较是典型的。第4节段最接近阴道口，它不显示出外部 皮肤的特征，并且不受或最低限度地受通常在对照动物的阴道粘膜外 部区域中发现的轻度到中度炎症改变的影响。第6节段代表了较深的 阴道粘膜，是从子宫颈分离出的唯一一个节段。一般而言，与背侧相 比，阴道腹侧存在较厚的和分泌更多粘液的上皮。
未受损
[0104]如图13所示，在动情期，阴道上皮主要受雌激素影响， 较厚且角质化。这出现在第4节段的12-18个细胞层中，和第6节段 的12-15层中。与在阴道口处看到的厚复层鳞状上皮相反，颗粒层在 内部阴道上皮中并不明显。在动情后期，在最低限度激素的影响下， 阴道上皮变薄。这出现在第4节段的6-10个细胞层中，和第6节段的 5-7层中。
切除卵巢的不受影响的
[0105]如图14中所示，在第4节段中，阴道排列着2-6个细胞 层的鳞状复层上皮。在动物之间，这个节段的厚度差别很大。在第6 节段中，观察到了完全的萎缩，只有2-3个扁平细胞层。可以在这些 动物的整个阴道中看到一些罕见的小柱状粘液细胞病灶集中点。在该 组的3只动物中，有2只在外部的3个节段中出现了轻度炎症改变。
安慰剂
[0106]如图15中所示，与OVX不受影响的组相比，安慰剂组的 阴道鳞状复层上皮稍微厚一些，第4节段具有4-8个细胞层。然而在 第6节段中，观察到了在OVX不受影响的组中发现的相同的形态， 即2-3个上皮细胞层。和OVX不受影响的动物一样，在整个阴道中 可以发现小柱状粘液细胞病灶集中点，当与OVX不受影响的动物相 比时稍微多一些。在该组的4只动物中，3只动物在外部的3个节段 中出现了轻度炎症改变。
DHEA 0.33mg/栓剂
[0107]如图16中所示，一般而言，在低剂量时，DHEA的形态 学影响以对齐得很好的圆柱状粘液细胞为特征，而在较高剂量时，粘 液细胞扩大(肥大)，形成空泡并且混乱。在本组中，DHEA的作用在 第2节段中轻微可辨，在第3-4节段逐渐增加，在第3-4节段中，对 齐得很好的和肥大的粘液细胞交替存在。DHEA的作用在第5和6节 段中缓慢减小，在那里几乎只能观察到对齐得很好的粘液细胞。这种 作用在第7节段中变得几乎不存在了，并且在第8节段的侧面阴道皱 褶中消失了(第8节段包括子宫颈的开始部分)。这样，在第4节段中， 阴道上皮是3-7个细胞层的复层鳞状上皮。大约20到60％的阴道内 层由对齐得很好的粘液细胞间隔着15到50％的肥大粘液细胞组成， 覆盖着一个或多个鳞状复层上皮层，且具有不分泌粘液的区域。在第 6节段中，上皮厚度减小至几乎与在OVX不受影响的动物中所发现 的厚度一样。它由2-5个细胞层的鳞状复层上皮组成，被对齐得很好 的粘液细胞层所覆盖。在存在的粘液细胞中观察到了大量的变化，这 些细胞覆盖了5到75％的阴道表面，间隔着不分泌粘液的区域。在6 只处理过的动物中，它们中的4只出现了轻度炎症，炎症不平坦地分 布在整个阴道上。
DHEA 0.66mg/栓剂
[0108]如图1 7中所示，在这一组中，在第2节段中可辨别出DHEA 的作用，在第3-4和5节段中这种作用显著加大，在那里观察到了大 部分肥大粘液细胞。肥大粘液细胞的数量在第6和7节段中减少，在 那里大部分细胞是对齐得很好的粘液细胞。因此，在第4节段中，复 层鳞状上皮是3-6个细胞层厚。大约5到20％的阴道里层由对齐得很 好的粘液细胞间隔着10到75％的肥大粘液细胞组成，覆盖着一个或 多个鳞状复层上皮层。还存在不分泌粘液的区域。在第6节段中，上 皮厚度减小，且由2-4个细胞层的鳞状复层上皮组成，该上皮被对齐 得很好的粘液细胞层覆盖。分泌粘液的区域的数量占阴道表面的20 到80％，且间隔着不分泌粘液的区域。在6只处理过的动物中，2只 动物在3个外部节段中显示出了轻度炎症。
DHEA 1.00mg/栓剂
[0109]如图18中所示，在这一组中，DHEA的作用在第2节段 中也可辨别，但这种作用在第3-4和5节段中显著增大，在第3-4和 5节段中观察到了非常大量的肥大粘液细胞，这种作用在第6-7和8 节段中很缓慢地减小，在第6-7和8节段中观察到了非常大量的对齐 得很好的粘液细胞。因此，在第4节段中，复层鳞状上皮具有3-9个 细胞层。覆在3-4个鳞状细胞层上面的肥大粘液细胞覆盖了50-70％ 的阴道表面，而对齐得很好的粘液细胞则覆盖了5-30％的阴道表面。 不分泌粘液的区域分散在分泌粘液的细胞之间。在第6节段中，上皮 厚度也减小了，且由2-4个细胞层组成。覆在1-3个鳞状细胞层上面 的肥大粘液细胞覆盖了大约30-100％的阴道表面，而对齐得很好的粘 液细胞则覆盖了0-70％。还观察到了极少数散在的不分泌粘液的区 域。在6只处理过的动物中，它们中的4只在4个外部节段中出现了 轻度炎症。
结论
[0110]
1.用于大鼠阴道内处理的赋形剂具有令人想要的特性：
a.在标有刻度的模具中很容易制备；
b.完全溶解DHEA微粉的极好的能力，从而确保标准化剂量；
c.阴道粘膜没有显著的组织反应和形态改变：在前3-4个节段中 只观察到了轻微的厚度增加，这很可能是由于插入栓剂所用的操作手 法的问题。
2.DHEA以最低试验剂量(0.33mg/栓剂)对阴道上皮形态产生了 影响。这种影响从第3节段到第5节段变得最大，然后逐渐减小至在 第7节段消失。
3.在0.66mg/栓剂的DHEA剂量下，这种作用也在第3节段中 存在，并在第6节段中仍然很强。
4.在1.00mg/栓剂的DHEA剂量下，这种作用从第2-3节段到 邻近子宫颈的深阴道皱褶处都很强。
药物组合物实施例
[0111]如下所列，通过实施例的方式而非限制，是利用优选的活 性SERM Acolbifene、优选的活性性甾体前体DHEA、优选的激素17β- 雌二醇或倍美力、优选的5型cGMP磷酸二酯酶抑制剂昔多芬或 Tadalafil的数种药物组合物。活性成分的浓度可在本文讨论的很大范 围内变化。可包括在内的其它成分的量和类型是本领域公知的。
实施例A
片剂
实施例B
胶囊
实施例C
片剂
实施例D
胶囊
实施例E
片剂
实施例F
胶囊
实施例G
片剂
实施例H
明胶胶囊
实施例I
片剂
实施例J
明胶胶囊
实施例K
阴道乳膏
实施例L
阴道栓剂
用Whitepsol H-15基质(Medisca，Montreal，Canada)制备DHEA 栓剂。可使用任何其它亲脂性基质，如Fattibase、Wecobee、可可脂、 可可豆油或Whitepsol基质的其它组合。
药盒实施例
[0112]如下所列，通过实施例的方式而非限制，是利用优选的活 性SERM Acolbifene、优选的活性性甾体前体DHEA、优选的激素17β- 雌二醇或倍美力、优选的5型cGMP磷酸二酯酶抑制剂昔多芬或 Tadalafil的数种药盒。活性成分的浓度可在本文讨论的很大范围内变 化。可包括在内的其它成分的量和类型是本领域公知的。
实施例A
SERM、雌激素和5型cGMP磷酸二酯酶抑制剂口服给药，而性 甾体前体局部应用或经皮给药。
口服给药的SERM组合物(胶囊)
口服给药的SERM+雌激素组合物(胶囊)
口服给药的SERM+雌激素+5型cGMP磷酸二酯酶抑制剂组合物 (胶囊)
局部给药的性甾体前体组合物(凝胶)
实施例B
SERM和性甾体前体口服给药
口服给药的非甾体抗雌激素组合物
(胶囊)
口服给药的性甾体前体组合物
(明胶胶囊)
[0113]在上述制剂中其它的SERMs(托瑞米芬、Ospemifene、雷 洛昔芬、阿佐昔芬、拉索昔芬、TSE-424、ERA-923、EM-800、SERM 3339、GW-5638)可替换Acolbifene，其它的性甾体抑制剂可替换 DHEA，其它的雌激素可替换倍美力，其它类型的5 cGMP磷酸二酯 酶抑制剂或前列腺素El可替换昔多芬或Tadalafil。可包括一种以上 的SERM或一种以上的前体或雌激素或5型cGMP磷酸二酯酶抑制 剂，在这种情况下加起来的重量百分数优选是上述实施例中给出的单 个前体或单SERM的重量百分数。
[0114]已经以优选的实施方案和实施例的方式描述的本发明，但 并不因此而受限制。本领域的技术人员将容易地辨别出较宽的适用性 和仅受专利权利要求限制的本发明的范围。
机译： 单独或与选择性雌激素受体调节剂和/或与雌激素和/或5型cgmp磷酸二酯酶抑制剂合用的性甾体前体，用于预防和治疗绝经后妇女的阴道干燥和性功能障碍
机译： 单独或与选择性雌激素受体调节剂和/或与雌激素和/或5型CGMP磷酸二酯酶抑制剂组合使用的性甾体前体，可用于预防和治疗绝经后妇女的阴道干燥和性功能障碍。
机译： 单独或与选择性雌激素受体调节剂和/或与雌激素和/或5型cgmp磷酸二酯酶抑制剂合用的性甾体前体，用于预防和治疗绝经后妇女的阴道干燥和性功能障碍
