牛海绵状脑病检查的预处理方法以及检查的预处理系统

摘要

本发明提供牛海绵状脑病检查的预处理方法，该检查的预处理方法包括：对采集的亲代检测体进行匀浆化的第1工序；分取指定量匀浆化的亲代检测体M为子代检测体N的第2工序；注入指定量的作为试剂A的酶剂蛋白酶K，混合以分解蛋白质的第3工序；用第1水准温度加温的第4工序；加入指定量试剂B，混合至溶液变成蓝色的第5工序；离心分离处理，废弃其上清液的第6工序；注入指定量试剂CL进行浓缩的第7工序；以比较高的第2水准温度加温的第8工序；注入指定量稀释用试剂D进行混合的第9工序；分注指定量在微量滴定板的小孔中，使其吸附，制备出异常朊病毒化验用样品的第10工序。本发明的牛海绵状脑病检查的预处理方法，是具有使快速而又准确地化验出异常朊病毒成为可能，也可以应付大量的检测体等优点的BSE检查的预处理方法。

说明书

技术领域

本发明涉及牛海绵状脑病(以下略称为BSE)检查的预处理方法以及检查的预处理系统。

背景技术

近年来，BSE也感染人类，担心作为变异型的克·雅氏病(クロイツフエルト·ヤコブ病)(vCJD)的发病在英国被公开报道。在日本，就感染源的牛脑和内脏物等来说，对整斗牛是否有异常的朊病毒(プリオン)、即病原性朊病毒蛋白质进行检查。因此，要求有更准确而且快速的检查方法。

作为从来自动物组织物质中化验出病原性朊病毒蛋白质的化验方法，是根据来自作为化验对象的动物组织的物质种类来适当地选择使用的调制剂(特别是表面活性剂)、调制方法、化验方法，即使来自动物组织的物质中含有的病原性朊病毒蛋白质浓度比较低，也能既迅速又简便，而且高灵敏度地化验出的化验方法已被提议(特开平11-032795公报(参考段落[0026])。

根据上述文献所示的化验方法，认为来自动物组织的物质中所含病原性朊病毒蛋白质就是比较低浓度的情况下也可能被化验出。但是，在进行该化验操作时，进行所谓的预处理是必要的。如何确切的进行这样的预处理，会影响综合的检查效果。换句话来说，比如就是采用了上述文献中所示的化验方法，如不准确地进行预处理的话，将不可能综合地进行正确而又快速的检查。

发明内容

本发明是根据这样的情况完成的发明，它的目的是提供了具有以下任一点优点的BSE检查的预处理方法以及检查的预处理系统。

(a)使快速且准确地化验出病原性朊病毒蛋白质成为可能。

(b)也可以充分应付作为检查对象的检查体即使有大量的情况。或

(c)卫生管理令人满意，安全性高。

根据本发明的一个实施方式，牛海绵状脑病检查的预处理包括：对采集的亲代检测体的细胞进行匀浆化的第1工序；使用注射器从第1工序中被匀浆化的亲代检测体中不含固体形状物质地分取指定量，将其作为子代检测体的第2工序；对第2工序中得到的子代检测体进行蛋白质分解的第3工序；在第3工序中被分解的子代检测体用第1水准温度加温温育的第4工序；对第4工序中温育的子代检测体，加入使溶液变成蓝色的试剂并混合的第5工序；使用冷冻离心机对第5工序得到的子代检测体进行离心处理后，废弃其上清液的第6工序；对第6工序中残剩的子代检测体进行浓缩的第7工序；第7工序中浓缩得到的子代检测体用比第1水准温度高的第2水准温度加温温育的第8工序；稀释第8工序温育的子代检测体的第9工序；以及分注指定量的第9工序得到的子代检测体在微量滴定板小孔中，使其吸附，制备出化验病原性朊病毒蛋白质的检查用样品的第10工序。

根据本发明其它的实施方式，预处理系统设计为具有至少有一对带状传送式运送线，可使由容器管座保持检测体容器由上游往下游，或由下游往上游的运送可能的检测体运送传送机；沿这个检测体运送传送机的运送路线分别自动地布置的进行指定的预处理的数个预处理装置，其中，数个预处理装置包含有：

按顺序搬入放置采集的亲代检测体的亲代检测体容器，并搭载在传送检测体的传送机上的搬入组件；

根据这个搬入组件搬入的亲代检测体容器的内含物，发行记录有包含亲代检测体特定信息的指定信息的条形码标签，将该条形码标签贴在与其对应的亲代检测体容器的外周面的第1条形码标签发行粘贴组件；

通过第1条形码标签发行粘贴组件，将被贴有条形码标签的亲代检测体容器内的亲代检测体的细胞破碎，将细胞匀浆化的破碎装置；

从通过细胞破碎装置匀浆化的亲代检测体M中不含固体形状物质地分取指定量，以此作为子代检测体N分注到子代检测体容器的分注组件；

根据该分注组件分注的子代检测体容器内含物，发行记录有包含指定信息的条形码标签，将该条形码标签贴在该子代检测体容器的外周面的第2条形码标签发行粘贴组件；

将根据需要退还回分注组件可能状态的内装有亲代检测体残剩物的亲代检测体容器冷冻保存的亲代检测体冷冻箱；

对子代检测体容器，通过注入指定量试剂A并混合以分解蛋白质的第1注入混合组件；

用设定的第1水准温度对装有用第1注入混合组件分解蛋白质的子代检测体的容器进行加温温育的第1温育装置；

对用第1温育装置温育的子代检测体，加入指定量的试剂A，混合至其溶液变成蓝色的第2注入混合组件；

通过用冷冻离心分离机对用第2注入混合组件得到的子代检测体进行离心分离处理，废弃其上清液的离心分离处理组件；

对用离心分离处理组件离心分离处理的子代检测体进行浓缩的浓缩组件；

用设定的比第1水准温度高的第2水准温度对装有用浓缩组件浓缩的子代检测体的容器进行加温温育的第2温育装置；

稀释用第2温育装置温育的子代检测体的稀释组件；

通过分注指定量稀释组件稀释的子代检测体在微量滴定板的小孔中，使其吸附，制成病原性朊病毒蛋白质化验用的检查用样品的检查用样品制作装置；

将用该检查用样品制作装置制成的检查用样品搬出检查室的搬出组件；以及

冷冻保存检查用样品的子代检测体冷冻箱。

附图的简单说明

图1是表示本发明的第1实施方式所涉及的BSE检查的预处理方法的处理程序的流程图

图2是表示第1实施方式所涉及的BSE检查的预处理系统构成的斜视图

图3A是表示第1实施方式所涉及的采集亲代检测体方法的图

图3B是表示第1实施方式所涉及的检测体容器的一例的图

图4是表示第1实施方式的温育装置构成例的截面图

发明的具体实施方式

参照以下的图，对本发明的牛海绵状脑病检查的预处理方法以及检查的预处理系统的实施例进行说明。

第1实施例

图1是表示本发明的第1实施方式所涉及的BSE检查的预处理方法的处理程序的流程图。根据以下流程图对BSE检查的预处理方法进行说明。

步骤S1：使用采集注射器采集作为亲代检测体的牛的脑或脊髓350±40mg左右于滑动试管(グライデインゲチユ一ブ)中。

步骤S2：在装有采集的亲代检测体的滑动试管上贴上记录有指定信息的条形码标签。或，预先也可以在滑动试管上贴的白纸标签上直接打印指定的信息。

步骤S3：用细胞破碎装置将滑动试管中的亲代检测体的细胞充分地匀浆化。

步骤S4：使用采集注射器从匀浆化的亲代检测体中不含固体形状物质地只分取液体成分500μl(微升)左右，将其作为子代检测体分注于2ml(毫升)试管中。

步骤S5：在分注子代检测体的上述试管上贴上记录有指定信息的条形码标签。在此，也可以预先在试管上贴的白纸标签上直接打印指定信息。

步骤S6：冷冻保存残剩的亲代检测体(-20℃下可以保存几周，解冻只能一次)。

步骤S7：另一方面，对子代检测体来说，分取稀释250倍的酶剂蛋白酶K500μl(微升)左右，5分钟以内在装有前述的子代检测体的试管中注入试剂A，然后通过充分混合，以分解蛋白质。

步骤S8：将蛋白质分解后的子代检测体放入温育容器，在37±1℃，10±1分钟加温温育。

步骤S9：对温育的子代检测体来说，2分钟以内加入500μl(微升)左右的试剂B(与试剂A相同，稀释250倍的酶剂蛋白酶K)，混合至溶液变蓝为止。

步骤S10：由冷冻离心分离机将混合变蓝的子代检测体在20000G的条件下5分钟，然后15000G的条件下7分钟进行离心分离处理以后，5分钟以内将上清液废弃(试管倒置5分钟，或用抽吸机吸引干燥5分钟)。

步骤S11：10分钟以内在废弃上清液的子代检测体中注入50μl(微升)左右的试剂CL(リ一ジエントCl)。由此来进行浓缩。但注意不要进行混合。

步骤S12：浓缩的子代检测体放入温育容器中，在100±1℃，5±1分钟加温温育。

步骤S13：在温育的子代检测体中加入作为试剂D的化验用SE盒剂的稀释液(R6)250μl(微升)左右，很好地混合。

步骤S14：分注子代检测体100μl(微升)左右于上述盒剂的微量滴定板(micro-titer plate)的小孔中，使其吸附，提供制作化验病原性朊病毒蛋白质的检查用样品。

步骤S15：上述各步骤的预处理结束后立即进行子代检测体的检查是通常的，为日后再检查的需要，也有进行冷冻保存的(在5～8℃可以保存5小时，在2～8℃可以保存8小时，在-20℃可以保存几周)。

图2是表示实施上述BSE检查的预处理方法时使用的BSE检查的预处理系统的构成的斜视图。图3A是表示采集亲代检测体方法的图，图3B是表示检测体容器的一例的图。图4是表示用于步骤ST8、ST12的温育装置的构成例的截面图。

检测体运送传送机10设计为至少有一对带状传送式运送线，可使由容器管座保持的检测体容器2、4如同箭头a表示的由上游往下游，或如同箭头b表示的由下游往上游的运送可能。

搬入组件11是预先用如图3A所示构造的采集注射器S采集牛的脑或脊髓350±40mg左右，按顺序搬入将此作为亲代检测体M放入如图3B所示构造的试管型的检测体容器T(滑动试管)的亲代检测体容器2，搭载在检测体运送传送机10上(步骤ST1)。

第1条形码标签发行粘贴组件12是发行如图3B所示条形码标签R、记录根据搬入的亲代检测体容器2的内含物的指定信息的标签，贴在与其对应的亲代检测体容器2的外周面(步骤ST2)。

细胞破碎装置13是破碎贴有条形码标签R的亲代检测体容器2内的亲代检测体M的细胞，使其匀浆化(步骤ST3)。

分注组件14是用具有与前面同样构造的采集注射器S从匀浆化的亲代检测体M中不含固体形状物质地分取500μl(微升)左右，将此作为子代检测体N分注到如图3B所示构造的试管型检测体容器T(可入2ml(毫升)离心管)的子代检测体容器4运送出(步骤ST4)。

第2条形码标签发行粘贴组件15是发行如图3B所示条形码标签R、记录根据运出的子代检测体容器4的内含物的指定信息的标签，贴在与其对应的子代检测体容器4的外周面(步骤ST5)。

亲代检测体冷冻箱16M是冷冻保存装有亲代检测体M残剩物的亲代检测体容器2(在-20℃可以保存几周，解冻只能一次)(步骤ST6)。在亲代检测体冷冻箱16中冷冻保存的亲代检测体M根据需要可以在适当的时候被取出，传送到位置于上游侧的分注组件14为止。在那里，再次进行所要进行的分注操作。

子代检测体冷冻箱16N是冷冻保存进行全部的预处理的子代检测体N的子代检测体容器4(在-20℃可以保存几周)(步骤ST15)。子代检测体N的检查是容器4朝下游侧一边传送一边进行的，所以进行全部预处理的子代检测体N的子代检测体容器4可以从下游侧以反方向传送返回而被保存。

第1注入混合组件17是对子代检测体容器4，分取稀释250倍的酶剂蛋白酶K500μl(微升)左右，5分钟以内在装有前述子代检测体的容器4中注入试剂A，然后通过充分混合，以分解蛋白质(步骤ST7)。

第1温育装置18是将装有蛋白质分解的子代检测体的容器4，用如图4所示构造的容器V，通过在37±1℃，10±1分钟加温下进行温育(步骤ST8)。图4中的符号5是检测容器V内部温度的温度传感器。

第2注入混合组件19是对温育的子代检测体N，2分钟以内加入500μl(微升)左右的试剂B，混合至溶液变蓝(步骤ST9)。

离心分离处理组件20是通过冷冻离心分离机进行20000G的条件下5分钟，15000G的条件下7分钟的离心分离处理。然后，5分钟以内将上清液废弃(试管倒置5分钟，或用抽吸机吸引干燥5分钟)(步骤ST10)。

浓缩组件21是10分钟以内在离心分离处理的子代检测体N中注入50μl(微升)的试剂CL进行浓缩(步骤ST11)。但注意不要进行混合。

第2温育装置22是将装有浓缩的子代检测体的容器4，用如图4所示构造的容器V，通过100±1℃，5±1分钟加温进行温育(步骤ST12)。

稀释组件23是仅注入作为试剂D的化验用SE盒剂的稀释液(R6)250μl(微升)左右，很好地混合(步骤ST13)。

检查用样品制作装置24是分注100μl(微升)于上述化验用SE盒剂的微量滴定板的小孔(通常使用96孔板)中，使其吸附，制成化验病原性朊病毒蛋白质的检查用样品(步骤ST14)。

搬出组件25是将制成的检查用样品搬出检查室(没有图示)。

另外，已进行了全部预处理的子代检测体N的子代检测体容器4中的一部分为了日后再进行检查，将此往上游侧反方向传运，冷冻保存在子代检测体冷冻箱16N中(步骤ST15)。

上述的各预处理装置是通过按照图中未显示的主计算机指令而进行运作的系统的略中央位置配置的控制器30控制关联的动作。

(1)本实施方式的BSE检查的预处理方法，其特征在于，包括：

使用细胞破碎装置13将采集的亲代检测体M的细胞匀浆化为第1工序；使用采集注射器S从前述第1工序中的匀浆化的亲代检测体M中不含固体形状物质地分取指定量(500μl(微升)左右)，作为子代检测体N为第2工序；对前述第2工序中得到的子代检测体N，将酶剂蛋白酶K(稀释250倍的)作为试剂A注入指定量，并通过充分混合以分解蛋白质为第3工序；将前述第3工序中分解的子代检测体N，在第1水准温度下(37±1℃)加温(10±1分钟)温育为第4工序；对前述第4工序中温育的子代检测体，加入指定量试剂B(500μl(微升)左右)，混合至溶液变蓝为第5工序；使用冷冻离心分离机20对前述第5工序得到的子代检测体N进行离心分离处理(20000G的条件下5分钟，15000G的条件下7分钟)以后，废弃上清液为第6工序；前述第6工序中分离得到的子代检测体N中注入指定量的试剂CL(50μl(微升)左右)，进行浓缩后保持静止状态为第7工序；前述第7工序中浓缩的子代检测体N在设定的比前述第1水准温度高的第2水准温度(100±1℃)下加温(5±1分钟)温育为第8工序；在前述第8工序中温育的子代检测体N中注入指定量的稀释用试剂D(250μl(微升)左右)，混合为第9工序；分注指定量的(100μl(微升)左右)前述第9工序得到的子代检测体N于微量滴定板的小孔中，使其吸附，制成化验病原性朊病毒蛋白质的检查用样品为第10工序。

(2)本实施方式的BSE检查的预处理系统，其特征在于，包括：

设计为至少有一对带状传送式运送线，可使由容器管座保持检测体容器(2、4)由上游往下游(箭头a)，或由下游往上游(箭头b)运送可能的检测体运送传送机10；沿这个检测体运送传送机10的运送路线分别自动地布置的进行指定的预处理的数个预处理装置(11-25)，

前面所述的数个预处理装置包含有：搭载在按顺序搬入将装有采集的亲代检测体M的检测体容器2的前面所述的运送传送机10上的搬入组件11；根据这个搬入组件11搬入的亲代检测体容器2内含物，发行记录有包含亲代检测体特定信息的指定信息的条形码标签R，将该条形码标鉴贴在与其对应的亲代检测体容器2的外周面的第1条形码标签发行粘贴组件12；通过这个第1条形码标签发行粘贴组件12所贴的前述亲代检测体容器2内的亲代检测体M的细胞粉碎匀浆化的细胞粉碎装置13；从这个细胞粉碎装置13匀浆化的亲代检测体M中不含固体形状物质地分取出500μl左右的作为子代检测体N，将其分注可入2ml的子代检测体容器4的分注组件14；根据这个分注组件14分注的子代检测体容器4内含物，发行记录有包含子代检测体特定信息的指定信息的条形码标签R，将该条形码标鉴贴在与其对应的子代检测体容器4的外周面的第2条形码标签发行粘贴组件15；装有前述亲代检测体M残剩物的亲代检测体容器2，根据需要，可以冷冻保存退还到前述分注组件14的可能状态的子代检测体冷冻箱16M；冷冻保存装有前述子代检测体N的容器4的子代检测体冷冻箱16N；从前述子代检测体冷冻箱16N中取出的子代检测体容器4中注入指定量的作为试剂A的酶剂蛋白酶K(250倍稀释)，经混合，以分解其蛋白质的注入混合组件17；装有用第1注入混合组件17蛋白质分解的子代检测体N的容器4在设定的第1水准温度(37±1℃)下加温(10±1分钟)进行温育的第1温育装置18用第1温育装置18温育的子代检测体N中加入指定量的试剂B(500μl(微升)左右)，混合至溶液变蓝的第2注入混合组件19；用冷冻离心分离机对第2注入混合组件19得到的子代检测体N进行离心分离处理(20000G的条件下5分钟，15000的条件下G7分钟)，废弃其上清液的离心分离处理组件20；用离心分离处理组件20离心分离处理得到的子代检测体N中注入指定量试剂CL(500μl(微升)左右)，保持静止的状态下进行浓缩的浓缩组件21；将装有用浓缩组件21浓缩的子代检测体的容器2在设定的比前述第1水准温度高的第2水准温度(100±1℃)下加温(5±1分钟)进行温育的第2温育装置22；在第2温育装置22温育的子代检测体N中注入指定量的试剂D(250μl(微升)左右)，经混合而稀释的稀释组件23；将稀释组件23稀释的子代检测体分注指定量(100μl(微升)左右)在微量滴定板的小孔中，使其吸附，制成化验病原性朊病毒蛋白质的检查用样品的检查样品制作装置24；将检查样品制作装置24制成的检查用样品搬出出检查室的搬出组件25。

根据本发明，能够提供具有下述作用效果的BSE检查的预处理方法和检查的预处理系统。

(a)由于从匀浆化的均一物质的亲代检测体中制备出子代检测体，所以能够进行有关均一的子代检测体的处理。另外，由于对着色的子代检测体进行离心分离处理，也可以用目视来确认分离的结果。更进一步地提供了制作适合于检查状态的检查用样品。因此，使病原性朊病毒蛋白质的快速而又准确的化验成为可能。

(b)虽然大部分是除去采集的亲代检测体的预处理，它是由检查的预处理系统自动地进行。所以，能够充分地应付作为检查对象的检测体既使使有大量的情况。

(c)由于人工的操作显著很少，在卫生管理上首选且安全性高。