一种胚乳原生质体瞬时表达外源基因的方法

摘要

本发明公开了一种胚乳原生质体瞬时表达外源基因的方法。包括以下步骤：(1)将处于灌浆前期的禾本科作物籽粒切块并酶解4～8h；(2)然后加入酶解终止液并过滤，收集滤液，离心得到原生质体；(3)重悬原生质体，冰浴20～40min后，离心去上清，然后再继续进行重悬纯化；(4)将经步骤(3)纯化的原生质体与质粒混合，然后加入PEG‑Ca2+溶液，静置转化15～30min；(5)再继续加入W5溶液，混匀后离心，去上清，然后重悬并在20～30℃培养6～18h后，离心去上清，再次进行重悬即可。本发明制备得到的胚乳原生质体数量多、活性高，原生质体转化效率高，能够为后续胚乳性状相关基因功能分析、胚乳细胞信号传导以及胚乳生物反应器等相关研究提供有力的技术支持。