一种基于G-四链体的检测Dnmt1活性的荧光传感器

摘要

一种基于G‑四链体的检测Dnmt1活性的荧光传感器，属于生化分析领域。首先，以含有G‑四链体序列、经半甲基化修饰的Hairpin DNA为底物，在S‑腺苷甲硫氨酸存在下，于37℃条件下，以Dnmt1催化底物发生甲基化反应；然后加入对甲基化敏感的限制性内切酶BssHII，于60℃下进行剪切反应，被完全甲基化的底物不能被BssHII识别，从而不能被剪切，而未被完全甲基化的底物能被剪切，释放出G‑四链体片段；最后，向体系中加入NMM，其与G‑四链体结合后，产生强荧光信号，可根据荧光信号的强弱判断底物DNA的甲基化水平，从而进一步反映甲基化反应中Dnmt1的活性。该方法在均相反应体系中进行，操作简单。