法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2017-12-19
授权
授权
2015-07-08
实质审查的生效 IPC(主分类):A61K38/28 申请日:20150323
实质审查的生效
2015-06-10
公开
公开
技术领域
本发明属于药物制剂技术领域，具体而言，涉及一种胰岛素制剂，尤其涉及一种含有重组甘精胰岛素的注射液及其制备方法。
背景技术
重组甘精胰岛素是一种通过基因重组技术获得并用于治疗Ⅰ、Ⅱ型糖尿病的长效胰岛素类生物制品，其持续控制血糖的原理为：皮下注射后甘精胰岛素分子立即聚合，因而溶解度降低，形成甘精胰岛素沉淀物，机体吸收延迟，其降糖作用的时间也被延长。重组甘精胰岛素是当前治疗Ⅰ、Ⅱ型糖尿病十分方便和有效的药物，与普通胰岛素的不同之处在于， A 链羧基端21 位的最后一个天门冬氨酸被甘氨酸所取代，B 链羧基端30 位苏氨酸后的31 和32 位连接了两个精氨酸，分子式为 C267H404N72O78S6 ，分子量6063，以此改造后的活性胰岛素即甘精胰岛素。重组甘精胰岛素可在糖尿病患者体内平稳发挥药效24 小时以上，并且无明显的血药高峰值和低峰值，很适合用于低基础胰岛素的替代治疗。
重组甘精胰岛素的等电点约为7.0，在pH7.0左右时其在水中溶解度最小，而在酸性条件下溶解度较好。因此，现有甘精胰岛素制剂均为酸性溶液的形式注射使用。但甘精胰岛素在酸性溶液体系中不稳定，随着放置时间的延长，其有关蛋白和高分子蛋白数值会逐渐升高，因而其贮藏条件为2-8℃。然而，胰岛素类制剂通常需要安装在特定的装置内经专用的注射系统给药，一旦开始使用（通常可反复注射），其通常会不定时地被佩戴在身体上，暴露于体热或运动中。现有的重组甘精胰岛素制剂在这些条件下仅具有有限的稳定性，因此通过采取一定的方式增强其长期物理稳定性就显得十分必要。
现有技术中有关重组甘精胰岛素注射液加入稳定剂来增强其运输、存储和应用过程中的稳定性。CN1662252A 中公开了通过加入吐温-20 等表面活性剂增强酸性胰岛素注射液的稳定性； CN1498113A 公开了一种通过加入表面活性剂（乳化剂）等制备稳定的无锌或低锌离子胰岛素注射液。众所周知，吐温类表面活性剂用于注射剂，易发生过敏、溶血等不良反应，其安全性一直存在争议。CN1266371A 中描述了用TRIS 或精氨酸缓冲液作为稳定剂的胰岛素注射液；CN102319422A 公开了一种包含200～1000U/ml 的甘精胰岛素的含水药物制剂及其用途，US5866538 公开了通过含有浓度为5～100mM 的甘油和NaCl 使其稳定性增强的胰岛素注射液；US5948751 公开了通过加入甘露醇或类似的糖获得物理稳定性增强的胰岛素制剂；CN102188367A 公开了通过加入PEG 和枸橼酸来提高甘精胰岛素注射液的稳定性。上述专利技术对于胰岛素制剂稳定性的研究多是针对其中的赋形剂，虽然取得了一定的成果，但是其稳定性仍然不能满足制剂在长期放置后稳定性的要求，从而造成注射剂的保存周期缩短，临床用药存在安全隐患。
另外，CN101573133A公开了一种PEG化延长的胰岛素，其提到在将胰岛素以特定的方式PEG化后，可以改变其溶解性能，在中性pH值时是可溶的，期待能提高生物利用度，延长作用时间，达到可肺部给药的效果，其稳定性也得到一定的提高。但其并未提到PEG与胰岛素未以共价键结合对胰岛素制剂的稳定性作用，且其PEG化制备步骤过于复杂，设备条件要求高，生产成本高，难以实现大生产。
发明内容
鉴于重组甘精胰岛素在酸性水溶液中稳定性差的问题，以及现有技术通过加入一些表面活性剂解决其稳定性的同时增加了致过敏反应等问题，本发明的目的在于提供一种质量稳定、安全性好的新型重组甘精胰岛素注射液及其制备方法。
由于甘精胰岛素在等电点附近的稳定性最好，因此注射液的pH值若接近等电点，则必然具有更好的稳定性，即保证甘精胰岛素在较高pH条件下的溶解度显得尤为重要。基于此研究思路，发明人考虑到在注射液中加入磺丁基-β-环糊精作为增溶剂，然而按照常规用量加入磺丁基-β-环糊精后，甘精胰岛素的溶解度没有明显改变。在一次试验中发明人意外地发现，将磺丁基-β-环糊精的添加量降低至常规用量的十分之一时，甘精胰岛素在水溶液中的溶解度有了非常显著的提高，从而实现了本发明的目的。具体地，本发明的技术方案为：
一种重组甘精胰岛素注射液，该注射液中含有重组甘精胰岛素、磺丁基-β-环糊精、锌盐和防腐剂，其中的重组甘精胰岛素在注射液中的浓度为50-200IU/mL，磺丁基-β-环糊精在注射液中的浓度为0.01-0.05g/mL。
为了更好地试验本发明的目的，发明人对所述重组甘精胰岛素注射液的技术参数做了进一步的优选，具体为：
所述的重组甘精胰岛素在注射液中的浓度为100IU/mL，磺丁基-β-环糊精在注射液中的浓度为0.02-0.03g/mL。该注射液采用pH调节剂调pH值为5.0-5.5。
在本发明的一个最优选的实施例中，所述的重组甘精胰岛素在注射液中的浓度为100IU/mL，磺丁基-β-环糊精在注射中的质量体积百分数为3.0%，该注射液采用pH调节剂调pH值为5.5。
另外，本发明所述的重组甘精胰岛素注射液，其中的防腐剂为间甲酚，锌盐为氯化锌。优选间甲酚的用量为2.5-3.0mg/ml ；锌盐的用量为25-30μg/ml。
本发明还提供了上述重组甘精胰岛素注射液的制备方法，该方法包括如下步骤：
（1）将磺丁基-β-环糊精加入到30-80%全量的注射用水中搅拌使溶解，加入甘精胰岛素，于0-5℃并搅拌的条件下放置12～24h，备用；
（2）将锌盐和防腐剂加入到余量的注射用水中，搅拌使溶解，备用；
（3）将步骤（1）配制的溶液在搅拌条件下加入到步骤（2）配制的溶液中，混合均匀，加入pH调节剂调节药液pH值至5.0-5.5，过滤除菌，灌装，得重组甘精胰岛素注射液。
在上述重组甘精胰岛素注射液的制备方法中，所述的pH调节剂为0.1mol/L盐酸；如果在条件pH过程中盐酸滴加过多导致pH低于目标值，则可以用0.1mol/L氢氧化钠溶液调高。
与现有技术相比，本发明涉及的重组甘精胰岛素注射液及其制备工艺具有以下优点和显著的进步性：
（1）稳定性好：磺丁基-β-环糊精能提高重组甘精胰岛素的溶解度，保证胰岛素在较高pH条件下溶解度能够符合制备注射液的要求。由于甘精胰岛素在更接近等电点的pH条件下的稳定性较好，因此提高注射液的pH值能够保证更好的稳定性。
（2）刺激性小，安全性高：磺丁基-β-环糊精为美国FDA批准的可用于注射给药的辅料，其现有注射液中的用量为60%左右，而在本发明中的最大用量仅为5%，因此刺激性更小，安全性更高。
（3）制备工艺简单，易于工业化大生产。
具体实施方式
现通过以下实施例来进一步描述本发明制剂的制备过程和实施效果，但本发明的保护范围并不局限于以下实施例。需要说明的是，以下实施例中的磺丁基-β-环糊精采用商品化的试剂，CAS号 25167-62-8，纯度≥98%。
实施例1 磺丁基-β-环糊精用量的筛选
称取500、250、125、62.5、30、15g磺丁基-β-环糊精，分别加入到1000mL注射用水中搅拌使溶解，依次配制成0.500、0.250、0.125、0.063、0.030、0.015g/mL的磺丁基-β-环糊精溶液，然后各自加入100000IU重组甘精胰岛素，于0-5℃且搅拌的条件下放置12h，结果显示：磺丁基-β-环糊精浓度大于0.063g/mL时，重组甘精胰岛素不能全部溶解，药液呈浑浊状态；而当磺丁基-β-环糊精浓度小于0.063g/mL时，药液无浑浊现象，经检测重组甘精胰岛素全部溶解。因此，选择磺丁基-β-环糊精在注射液中的浓度为0.01-0.05g/mL。
实施例2 重组甘精胰岛素注射液的制备
重组甘精胰岛素 100000IU
磺丁基-β-环糊精 10g
间甲酚 2500mg
氯化锌 25mg
0.1mol/L盐酸溶液 适量
注射用水 加至1000ml
制备工艺：
（1）将磺丁基-β-环糊精加入到50%全量的注射用水中搅拌使溶解，加入重组甘精胰岛素，于0-5℃且搅拌的条件下放置12h，备用；
（2）将间甲酚、氯化锌加入到余量的注射用水中，搅拌使溶解，备用；
（3）将步骤（1）的溶液在搅拌条件下加入到步骤（2）的溶液中，混合均匀，加入0.1mol/L盐酸溶液调节药液pH5.0，0.22μm滤膜过滤除菌，灌装，即得。
实施例3 重组甘精胰岛素注射液的制备
重组甘精胰岛素 100000IU
磺丁基-β-环糊精 20g
间甲酚 2700mg
氯化锌 27mg
0.1mol/L盐酸溶液 适量
注射用水 加至1000ml
制备工艺：
（1）将磺丁基-β-环糊精加入到50%全量的注射用水中搅拌使溶解，加入重组甘精胰岛素，于0-5℃且搅拌的条件下放置12h，备用；
（2）将间甲酚、氯化锌加入到余量的注射用水中，搅拌使溶解，备用；
（3）将步骤（1）的溶液在搅拌条件下加入到步骤（2）的溶液中，混合均匀，加入0.1mol/L盐酸溶液调节药液pH5.5，0.22μm滤膜过滤除菌，灌装，即得。
实施例4 重组甘精胰岛素注射液的制备
重组甘精胰岛素 100000IU
磺丁基-β-环糊精 30g
间甲酚 3000mg
氯化锌 30mg
0.1mol/L盐酸溶液 适量
注射用水 加至1000ml
制备工艺：
（1）将磺丁基-β-环糊精加入到50%全量的注射用水中搅拌使溶解，加入重组甘精胰岛素，于0-5℃且搅拌的条件下放置12h，备用；
（2）将间甲酚、氯化锌加入到余量的注射用水中，搅拌使溶解，备用；
（3）将步骤（1）的溶液在搅拌条件下加入到步骤（2）的溶液中，混合均匀，加入0.1mol/L盐酸溶液调节药液pH5.5，0.22μm滤膜过滤除菌，灌装，即得。
实施例5 重组甘精胰岛素注射液质量检测试验
效价测定：取供试品，照高效液相色谱法（中国药典2010年版三部附录Ⅲ B）测定，本品含重组甘精胰岛素应为标示量的95.0%-105.0%。
每1ml 供试品含3.64mg 的重组甘精胰岛素活性物质，相当于100IU人胰岛素。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A 为磷酸盐缓冲液-乙腈-水-氯化钠（250ml：250ml：500ml：18.4g），流动相B为磷酸盐缓冲液-乙腈-水-氯化钠（250ml：650ml：100ml：3.2g）；取磷酸二氢钠20.7g，加水800ml 溶解，再用85%磷酸调节pH值至2.5，定容至1L，过滤，得磷酸盐缓冲液。线性梯度洗脱（见表1），柱温为35℃；检测波长为214nm。取系统适用性试验溶液（以0.01mol/L 盐酸溶液为溶剂，制成每1ml 含甘精胰岛素和OA-Arg甘精胰岛素分别约为0.75mg和0.06mg的溶液）10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，甘精胰岛素和OA-Arg甘精胰岛素的分离度应大于1.5，甘精胰岛素的拖尾因子应不大于1.8。
表1：线性梯度
测定法取供试品，用0.01mol/L 盐酸溶液制成每1ml 约含10IU 的溶液，精密量取10μl 注入液相色谱仪，记录色谱图；另取甘精胰岛素对照品适量，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
有关蛋白：取供试品适量，照效价测定项下的方法测定，记录色谱图，按峰面积归一化法计算（扣除间甲酚的吸收峰），最大有关蛋白不得过0.5%，总有关蛋白不得过2.0%。
高分子量蛋白：取供试品适量，用0.01mol/L 盐酸溶液制成每1ml 中约含2mg 的溶液，作为供试品溶液。照分子排阻色谱法（中国药典2010 年版三部附录Ⅲ D）进行试验。以亲水硅胶为填充剂；冰乙酸-乙腈-水（20：30：50），用25%氨水调节pH 值至3.0为流动相；流速为每分钟0.5ml ；检测波长为276nm。取重组人胰岛素单体-二聚体对照品，用0.01mol/L 盐酸溶液制成每1ml 中约含1mg 的溶液；取100μl 注入液相色谱仪，记录色谱图，以重组人胰岛素单体和二聚体之间的峰谷高与重组人胰岛素二聚体峰高之比作为分离度，分离度应不大于0.6。取供试品溶液100μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，扣除保留时间大于重组甘精胰岛素主峰的其他峰面积，按峰面积归一化法计算，保留时间小于重组甘精胰岛素主峰的所有峰面积之和不得大于0.3%。
实验测定结果见表2。根据表2的测定结果可以看出，实施例2-4制备的样品加速试验6 个月后的最大有关蛋白、总有关蛋白和高分子量蛋白等指标基本不变。
表2：甘精胰岛素注射液的稳定性测定结果（%）
机译： 一种去甲肾上腺素稳定低浓度注射液的制备方法
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机译： 一种三七总皂甙家族静脉注射液及其制备方法
