茶叶多酚氧化酶同工酶单体PP01和PP02及其制备方法

摘要

一种茶叶多酚氧化酶同工酶单体PP01和PP02及其制备方法，是针对当前茶叶多酚氧化酶纯化倍数低、上载样品蛋白量少、操作时间长，获得的同工酶仅为某一相对分子量的同工酶而未能获得氨基酸序列结构、分子量、等电点、酶学性质等明确的同工酶单体的技术现状，依次采用丙酮粉富集酶蛋白、硫酸铵分级沉淀、强阴离子交换色谱、凝胶介质层析、分子鉴定、酶学性质分析等技术及优化工艺，分离制备了氨基酸序列结构、分子量、等电点、酶学性质等明确的两种茶叶多酚氧化酶同工酶单体。该方法不仅具有成本低、制备量大、针对性强、操作周期短等优点，而且对深化茶叶多酚氧化酶同工酶的分离纯化技术、推动利用茶叶多酚氧化酶同工酶单体定向酶促合成茶黄素组分以及茶叶多酚氧化酶优势同工酶开发利用、同工酶固定化、酶蛋白结构解析、酶基因克隆与功能验证等具有重要理论实践意义。