双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)及其水合物

摘要

本发明涉及双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)及其水合物。本发明描述了双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物、制备双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)及其水合物的方法以及双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)及其水合物的用途。

说明书

技术领域

本发明涉及双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物、制备双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)及其水合物的方法以及双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)及其水合物的用途。

背景技术

自从发现顺铂（二氯二胺合铂）的细胞抑制作用以来，铂络合物在抗肿瘤剂的研究和开发中起到重要作用。所述铂络合物的作用基于通过一个DNA链的两个相邻鸟嘌呤碱基之间的交联抑制DNA复制。这干扰DNA的结构并使其无功能。因此，抑制细胞代谢且细胞开始凋亡。

具有细胞抑制作用的所述铂络合物通常包含两个稳定配体和在反应过程中裂解的两个不稳定配体。在体内，铂络合物与水反应，使不稳定配体裂解。由此获得的含水络合物随后与细胞内的DNA反应并因此导致细胞死亡。

继续发展铂络合物的目标首先是使所述络合物对水稳定以致仅在人体内而非更早（在生产或储存过程中）形成含水络合物。此外，该试剂应尽可能选择性作用于肿瘤组织而不应攻击不受肿瘤困扰的健康细胞。

奥沙利铂是具有细胞抑制作用的新近的铂络合物（草酸根-[(1R,2R)-环己烷二胺]合铂(II)），其中铂离子被1,2-二氨基环己基配体（DACH配体）和草酸根离子络合。与顺铂相比，奥沙利铂表现出改进的性质，特别是在其稳定性方面。但是，即使在这种情况下，在储存期间也会发生反应，在此过程中奥沙利铂降解以致该试剂的浓度降低且杂质积聚。根据欧洲药典，已知奥沙利铂与杂质A、B、C、D和E相关联。这些通常被称作“杂质”。

“杂质A”是草酸，其在奥沙利铂水解过程中生成。水解过程中生成的另一杂质是 (SP-4-2)-二水[(1R,2R)-环己烷-1,2-二胺-κN, κN‘]合铂（二水二氨基环己烷合铂），其被称作“杂质B”。

奥沙利铂氧化产物(OC-6-33)-[(1R,2R)-环己烷-1,2-二胺-κN, κN‘]二氢[乙二酸根(2-) κO1, κO2]合铂被称作“杂质C”。“杂质D”是(SP-4-2)-[(1S,2S)-环己烷-1,2-二胺-κN, κN‘][ 乙二酸根(2-)- κO1, κO2]合铂，且“杂质E”是(SP-4-2)-二-g-氧代双[(1R,2R)-环己烷-1,2-二胺-κN, κN‘]合二铂。此外，另一些杂质是已知的，但仅以极少量存在。

为了使生成的杂质量保持低或完全消除它们，US 2010/0267824 A1提出3至4.5的pH范围用于肠道外摄入奥沙利铂化合物。这可降低杂质分数，但没有完全消除它们。

欧洲药典规定了用于确定杂质分数的参考标准。目前，使用二硝酸根-(1,2-二氨基环己烷)合铂(II)作为杂质B的参考标准。这种物质在水中形成反应性二水二氨基环己烷合铂(II)络合物。令人惊讶地，已经发现，二硝酸根-(1,2-二氨基环己烷)合铂(II)是爆炸性物质，这使其难以运输、储存和操作。图1显示二硝酸根-(1,2-二氨基环己烷)合铂(II)（Pt(DACH)(NO₃)₂）的差热分析（DTA测量）以证实爆炸倾向。对Pt(DACH)(NO₃)₂的两个样品Mz1 Mz2进行测量。各样品在充满氮气的封闭玻璃安瓿内以3K/min的加热速率从室温加热至450 ℃。记录铂化合物Pt(DACH)(NO₃)₂与参考样品（Al₂O₃）之间的温差。这两个样品都显示在1.175 J/g的加热趋势(heat tone)下在170 ℃开始放热行为。根据VDI 2263指南进行测量。

因此，需要形成反应性而非爆炸性的二水二氨基环己烷合铂(II)络合物的(1,2-二氨基环己烷)合铂(II)化合物。

Schwartz等人（Preparation and Antitumor Evaluation of Water-Soluble Derivatives of Dichloro(1,2-diaminocyclohexane)platinum(II), Cancer Treatment Reports Vol. 61, No. 8, 1977年11月, 1519-1525）描述了双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的一水合物。所述物质在水中形成所需反应性二水合络合物。双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的一水合物在水中的溶解度为3 mg/ml。该溶解度与二硝酸根-(1,2-二氨基环己烷)合铂(II)（其到目前为止用作标准并具有大约0.5 mg/ml的水溶解度）相比也改进。但溶解度的进一步改进仍是被期望的。

Schwartz等人的公开(dito)描述了制备双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的一水合物的方法。在这种方法中蒸发溶剂水。因此，几乎无法控制产物结晶。通过机械手段实现产物分离。这在产物的大规模生产中成问题，因为将不得不刮除大量硬壳。这也可能危害主管人员，因为机械分离与可能被吸入的升起的粉尘和细粒相关联。

所得形式应具有良好的水溶解性并完全易操作。这是为了规避二硝酸根-(1,2-二氨基环己烷)合铂(II)的不利性质。

除稳定性外，抗肿瘤剂的另一关键因素在于，它们应专门作用于患病组织。为此目的，聚合物或靶分子可键合到铂络合物上。例如在US 2011/0286958 A1中描述了相关的聚合物和靶分子。该聚合物取代铂络合物的不稳定配体。用于将该聚合物键合到铂络合物上的原材料是二硝酸根-(1,2-二氨基环己烷)合铂(II)。但这种物质的水溶性不良。此外，如上所述，其是爆炸性物质以致其生产、运输、储存和操作困难。

发明内容

因此，根据第一方面，本发明的目的是提供替代二硝酸根-(1,2-二氨基环己烷)合铂(II)并具有比较好的溶解度的化合物。此外，该化合物应该稳定并容易操作。此外，其还应适合用作奥沙利铂的杂质B的参考标准。

因此，本发明的另一方面是提供制备可用于替代二硝酸根-(1,2-二氨基环己烷)合铂(II)并克服上述缺点的化合物的方法。由该方法获得的化合物也适合用作奥沙利铂的杂质B的参考标准。此外，该化合物应适合在聚合物键合的环己烷二胺合铂(II)络合物的合成中用作替代二硝酸根-(1,2-二氨基环己烷)合铂(II)的替代原材料。

附图说明

图1示出二硝酸根-(1,2-二氨基环己烷)合铂(II)（Pt(DACH)(NO₃)₂）的差热分析（DTA测量）；

图2示出双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物的X-射线粉末衍射法数据；

图3示出双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物的动态差示扫描量热法数据；

图4示出由双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)制备二水合物类的反应式；

图5示出由二硝酸根-(1,2-二氨基环己烷)合铂(II)制备二水合物类的反应式。

具体实施方式

令人惊讶地，已经表明，通过双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物实现根据本发明的第一方面的目的。该二水合物在25℃的温度和常压下的水溶解度为大约90 mg/ml。因此，与根据现有技术获知并在相同条件下具有大约3 mg/ml的水溶解度的一水合物相比显著改进水溶解度。

双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物优选以晶体形式存在。借助X-射线粉末衍射法（XRPD）（图2）和动态差示扫描量热法（DSC）（图3）分析它们。

图2中的X-射线粉末衍射图显示位于6.35±0.2、10.47±0.2、10.62±0.2、12.77±0.2、19.05±0.2、20.27±0.2、20.40±0.2、23.04±0.2、23.38±0.2、27.61±0.2、30.51±0.2和34.95±0.2的2theta (2θ)值的结晶材料的典型信号位置。误差范围归因于XRPD测量中的已知不确定性，如样品中存在的溶剂的残留量。图2显示双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物的离散信号峰和波谱。优选在Stoe (Darmstadt, Germany)制造的Stadi P粉末衍射系统中使用                                                照射（1.54056 Angstr?m = 0.154056 nm） 记录XRPD波谱。优选使用弯曲Ge单色仪(111)和IP-PSD探测器（成像板位置敏感探测器）在40 kV和30 mA的X-射线管发生器电压下在透射中完成测量。优选以40°的固定角ω引入样品，由此ω是在测量过程中样品或试样支架相对于原X-射线束的取向。优选在3.0°至79.05°的2θ扫描范围内测量。

DSC谱图（图3）显示与水释放或相变相关的许多吸热和放热信号。测量的样品由11.550毫克双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物构成。但是，没有像Pt(DACH)(NO₃)₂的情况中那样的可识别的表明爆炸性分解的峰。优选使用TA Instruments (New Castle, Delaware, USA)制造的DSC Q2000进行DSC记录。该样品优选在25℃下平衡，并使用2 ℃的升温速率最高达400 ℃的温度完成测量。

这两种技术（XRPD和DSC）都是现有技术中的完善的测量方法。

此外，双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物令人惊讶地比双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的一水合物更热力学稳定。

在水中，双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物形成反应性二氨基环己烷二水合铂(II)络合物。因此，双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-二氨基环己烷二水合铂(II)络合物以溶解状态存在。本发明的化合物可以以固态呈各种形式。在这种情况下，不仅二氨基环己烷(DACH)基团而且两个甲苯磺酸根（4-甲基苯磺酸根）可以都通过配位键合到中心铂(II)原子上。此外，两个水分子也可以以固态形式通过配位键合到铂(II)原子上，或可能存在混合形式，其中甲苯磺酸盐分子和水分子通过配位键合到铂(II)原子上。

本发明的双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)二水合物与从现有技术中获知的一水合物相比具有大于80 mg/ml的明显改进的水溶解度。现有技术中已详细描述的二硝酸根-(1,2-二氨基环己烷)合铂(II)与本发明的化合物相比也具有仅大约0.5 mg/ml的明显较差的溶解度。溶解度，如本发明的范围中所用，应该是在室温和常压下的溶解度。这也是指在本申请中的标准条件下的溶解度。此外，本发明的双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)二水合物是非爆炸性化合物，这从作为图3附录的DSC谱图中显而易见。此外，这种化合物可以以指定晶型存在，该指定晶型可以借助作为图2附录的x-射线粉末衍射图证实。

根据本申请的另一方面，本发明提供制备替代二硝酸根-(1,2-二氨基环己烷)合铂(II)的化合物的方法，其以给定次序包括下列步骤：

a) 使二卤-1,2-环己烷二胺合铂(II)和4-甲基苯磺酸银在含水溶剂中反应以形成双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)和卤化银；

b) 从来自步骤a)的反应混合物中分离卤化银；

c) 加入与水形成共沸混合物的化合物；

d) 从所述共沸混合物中除去至少一部分水；

e) 调节水的分数以形成所需的双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)水合物；和

f) 分离双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)或双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的水合物。

本发明的方法能够制备Schwartz等人(dito)已经描述的双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的一水合物。与所述参考文献中描述的制备方法相比，不以不受控方式蒸发溶剂。这能使所需产物受控结晶。本发明的方法也能以更大规模生产所需产物。没有对生产参与人员的相关危害。

此外，还可以不仅制备双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的一水合物，还可以制备其二水合物或其它水合物。该方法还能制备非水合的铂络合物，双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)。因此，本发明提供克服从现有技术中获知的缺点的制备双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)及其水合物的方法。

步骤a)中存在的碱性物质二卤-1,2-环己二胺合铂(II)中的卤素原子可以是任何卤素原子。氯(Cl)、溴(Br)和/或碘(I)是优选的。这种情况中使用的铂(II)络合物可含有两个相同或两个不同的卤素配体。优选在铂(II)络合物上存在两个相同的卤素配体，因为这能够确定与银盐的反应中的明确化学计量。因此优选使用双-(4-甲基苯磺酸根)-二溴-1,2-环己烷二胺合铂(II)、双-(4-甲基苯磺酸根)-二氯-1,2-环己烷二胺合铂(II)或双-(4-甲基苯磺酸根)-二碘-1,2-环己烷二胺合铂(II)作为本发明的方法的步骤a)中的离析物(educt)。

步骤a)中的二卤-1,2-环己烷二胺合铂(II)与4-甲基苯磺酸银的反应在含水溶剂中进行。所述溶剂优选是水或含有水和至少一种与水形成共沸混合物的其它化合物的混合物。在这种情况下，可以将水与多种不同的化合物混合。该化合物必须以指定比率与水混溶并且必须与水形成共沸混合物。根据本发明，也可以将仅一种化合物与水混合并由此形成共沸混合物。

步骤a)中的二卤-1,2-环己烷二胺合铂(II)络合物与4-甲基苯磺酸银的反应优选在4-甲基苯磺酸银的亚化学计量下进行。因此，铂络合物在该合成中与少于2摩尔当量的银盐反应。4-甲基苯磺酸银的优选量为1.88至1.99摩尔当量，特别优选为1.92至1.96摩尔当量的量。这两种组分的反应产生双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)和卤化银。该反应在含水溶剂中进行。所得卤化银仅极难溶于所述溶剂并因此沉淀。相应的沉淀物因此容易与其余反应混合物分离，优选借助过滤。在反应中使用亚化学计量的量的4-甲基苯磺酸银防止银存在于最终产物中。这会使分离困难。但4-甲基苯磺酸银的分数绝不能太低，因此否则只有小分数的二卤-1,2-环己烷二胺合铂(II)与甲苯磺酸根反应且所需产物（双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)及其水合物）的收率低。

为了吸收副产物或未转化的离析物，可以在本发明的方法的步骤b)中分离卤化银后和在加入与水形成共沸混合物的化合物之前，在步骤c)中将活性炭添加到反应混合物中。如果该反应根据优选实施方案进行，即以亚化学计量水平进行，活性炭特别从反应混合物中除去未反应的二卤-1,2-环己烷二胺合铂(II)。此外，活性炭也除去银盐和副产物。

要添加的活性炭分数优选为相对于所用铂(II)化合物的1重量%至20重量%，特别优选2重量%至10重量%，甚至更特别优选3重量%至7重量%，再更优选5重量%。所述量足以从反应混合物中除去存在的未反应离析物和副产物。

在分离卤化银后，在本发明的方法的步骤c)中加入至少一种与水形成共沸混合物的化合物。在这种情况下，可以将一种化合物添加到反应混合物中。根据本发明也可以在该方法的步骤c)中加入多种与水形成共沸混合物的化合物。所述至少一种化合物优选选自醇和卤代烃。它们与水形成共沸混合物。此外，双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)及其水合物在所述化合物中的溶解度特别高。优选地，在标准条件（室温，常压）下该铂(II)化合物的溶解度为5 g/l或更大，特别优选7 g/l或更大。该化合物特别优选选自正丁醇、甲苯、氯仿和乙醇。也可以使用含有水和本发明的化合物的混合物作为本发明的方法的步骤a)中的含水溶剂。

优选将仅一种化合物添加到反应混合物中，优选为选自醇或卤代烃，特别优选选自正丁醇、甲苯、氯仿和乙醇的化合物。在一个特别优选的实施方案中，在本发明的方法的步骤c)中将正丁醇添加到反应混合物中。优选使用正丁醇，因为由正丁醇和水构成的共沸混合物的沸点为92℃，因此有利于本发明的方法的后继步骤。此外，在所述步骤中获得的产物双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)很好地可溶于正丁醇，这简化产物的进一步提纯并能获得高收率。

随后，从由此形成共沸混合物中除去至少一部分水。这可以使用根据现有技术获知的方法完成。优选通过共沸蒸馏除去水。在本发明的方法的步骤d)中特别优选从共沸混合物中不仅部分，而是完全除去水。结果获得与水形成共沸混合物的化合物。双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)及其水合物可溶于所述化合物。

在从共沸混合物中至少部分除去水后，调节形成所需双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)水合物所需的水分数。可以通过化学计量学计算所需水分数。如果本发明的方法要提供双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的非水合形式，在此不加入水。为了获得该化合物的水合物，可以计算所需水量并混入反应混合物中。优选在本发明的方法的步骤e)中适当调节水的分数以获得双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物并随后在本发明的方法的步骤f)中移出所述物质。

在步骤f)中可以根据从现有技术中获知的方法分离产物。优选将反溶剂添加到反应混合物中以分离双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)或双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的水合物。所需产物在标准条件（室温，常压）下具有优选小于2 g/l，特别是小于1 g/l的在该反溶剂中的低溶解度。同时，该反溶剂在与水形成共沸混合物的化合物中具有高溶解度。本发明的范围内的高溶解度应被理解为优选是指该反溶剂在与水形成共沸混合物的化合物中以任何比率的无限混溶，同时形成均相。根据本发明，反溶剂可以独自使用，或多种化合物可以互相混合并用作反溶剂。

优选使用乙酸乙酯和/或丙酮作为本发明的方法中的反溶剂。乙酸乙酯特别优选作为反溶剂，特别是如果正丁醇是与水形成共沸混合物的化合物时。乙酸乙酯和正丁醇互相很好地混溶。同时，所需产物双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)或其水合物可溶于正丁醇但不溶于乙酸乙酯。

可以将由此获得的化合物重结晶以将其进一步纯化。为此目的，将该化合物溶解在与水形成共沸混合物的化合物中。反溶剂的加入优选能够获得所需化合物的晶体。

在一个具体实施方案中，本发明因此包括制备双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)及其水合物的方法，其包括下列步骤：

a) 在含水溶剂中使二卤-1,2-环己烷二胺合铂(II)（其中两个卤素相同并选自氯、溴或碘）与4-甲基苯磺酸银（其中4-甲基苯磺酸银相对于铂(II)化合物以亚化学计量的量存在）反应，同时形成双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)和卤化银；

b) 从来自步骤a)的反应混合物中分离卤化银，随后将活性炭添加到反应混合物中；

c) 加入正丁醇；

d) 借助共沸蒸馏从共沸混合物中除去所有水；

e) 调节水的分数以形成双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物；和

f) 通过添加乙酸乙酯作为反溶剂，分离双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物。

反溶剂的加入优选确保产物的结晶以优选、缓慢和受控方式进行。这能防止溶剂蒸发时常见的不受控结晶。因此，本发明的方法可用于获得指定组成的结晶化合物。

根据本发明的方法的受控制备特别能够用作参考标准，因为必须为此目的能够提供明确指定的物质。

欧洲药典EP 7.3目前指定化合物二硝酸根-1,2-环己烷二胺合铂(II)（=二硝酸根-(1,2-二氨基环己烷)合铂(II)）作为奥沙利铂的杂质B的参考标准。如下描述其使用：

为了用作参考标准，将5毫克奥沙利铂杂质B CRS（CRS = 现行参考标准）溶解在25毫升甲醇中并用水将该容器填充至最高达100毫升。声处理该溶液1.5小时直至溶液清澈。为了分析，将100毫克奥沙利铂试剂溶解在水中并将容器填充至最高达50毫升。

然后将这两种溶液依次注入HPLC系统（柱I = 0.25 m；直径 = 4.6 mm；固定相：碱钝化的十八烷基甲硅烷基硅胶5 μm）中。测量温度为40℃。流动相由20%乙腈和80%在1,000毫升水中含有1.36克磷酸氢钾和1克庚磺酸钠的水溶液构成，用磷酸将pH调节至3.0 ± 0.05。测量条件：流速2.0 mL/min.，检测：在215纳米下的分光光度计，注入体积：20微升。

由各自HPLC色谱图中的面积百分比比率计算奥沙利铂试剂中的杂质B的分数。

二硝酸根-1,2-环己烷二胺合铂(II)作为杂质B（(SP-4-2)-二水合[(1R,2R)-环己烷-1,2-二胺-κN, κN‘]铂）的标准的缺点包括其爆炸性和在水中的差溶解性。

令人惊讶地，已经表明，可以替代该参考标准，这克服上文指出的缺点。双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)及其水合物根据本发明作为奥沙利铂的杂质B的参考标准的用途因此包括

i. 提供奥沙利铂溶液；

ii. 提供双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)或其水合物的溶液作为参考标准；

iii. 记录来自步骤i)的奥沙利铂溶液的色谱图；

iv. 记录来自步骤ii)的参考标准溶液的色谱图；和

v. 比较来自步骤iii)和iv)的色谱图以确定(SP-4-2)-二水[(1R,2R)-环己烷-1,2-二胺-κN, κN‘]合铂的分数。

在奥沙利铂合成的常用方法中，作为副产物产生物质二硝酸根-(1,2-二氨基环己烷)合铂(II)。所述物质因此根据现有技术用作杂质B，(SP-4-2)-二水[(1R,2R)-环己烷-1,2-二胺-κN, κN‘]合铂的参考标准。但是，已经表明，如从作为图1附录的DTA测量中看出，所述物质遇热时会爆炸。根据本发明使用的双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)没有表现出所述爆炸倾向。如从所附DSC谱图（图3）中对二水合物的情况看出，可根据本发明使用的水合物也热稳定。此外，使用本发明的方法能够获得以受控方式结晶并具有明确指定的组成的产物。因此，可以以可再现方式调节步骤ii)中的溶液浓度。

优选使用奥沙利铂的水溶液以及双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)或其水合物的水溶液。在这种情况下，本发明的化合物与从现有技术中获知的二硝酸根合化合物相比具有额外优点，即其具有更好的水溶解性。因此，也可以提供更浓的溶液作为参考标准。

为了确定奥沙利铂中的杂质B的分数，可以例如在水中以2 mg/ml的浓度制备奥沙利铂水溶液。使用双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)或其水合物的水溶液作为参考标准。所述溶液可具有0.05 mg/ml的浓度。

在一个优选实施方案中，使用双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物作为参考标准。该二水合物在水中的溶解度为80 mg/ml或更大。因此，可以容易地提供不同的参考标准。

在进一步进程中，记录奥沙利铂溶液，然后参考标准溶液的色谱图。色谱图的比较能够确定奥沙利铂中的杂质B的分数。

优选地，奥沙利铂溶液和参考标准溶液的色谱图是来自高压液相色谱法（HPLC）的色谱图。HPLC是足够公知的色谱法。色谱图中存在的信号峰面积的比较能够得出关于奥沙利铂中存在的杂质分数的结论。

在一个优选实施方案中，本发明因此涉及双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物作为用于确定奥沙利铂的杂质B的参考标准的用途。所述用途包括：

i. 提供奥沙利铂水溶液；

ii. 提供双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物的水溶液作为参考标准；

iii. 记录来自步骤i)的奥沙利铂溶液的HPLC色谱图；

iv. 记录来自步骤ii)的参考标准溶液的HPLC色谱图；和

v. 比较来自步骤c)和d)的色谱图以确定(SP-4-2)-二水[(1R,2R)-环己烷-1,2-二胺-κN, κN‘]合铂的分数。

由于双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)及其水合物，特别是二水合物在水中的良好溶解性，该参考标准溶液容易制备。关于奥沙利铂中的杂质B分数的确定，如果使用欧洲药典EP 7.3中规定的试剂和参考标准的量和/或浓度并用双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物替代之前的标准，则在HPLC色谱图中的面积比较中需要考虑校正系数。所述校正系数来自杂质B的现行标准（二硝酸根-1,2-环己二氨基合铂(II)）和根据本发明使用的参考标准（双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)或其水合物）的摩尔质量比。使用双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物作为参考标准，所得校正系数为(687.69 g/mol) / (433.29 g/mol) = 1.587。必须将面积比（该试剂在色谱图中的面积/参考标准在色谱图中的面积）乘以这一值。

或者，也可以借助校正系数调节该新参考标准，即添加的双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)二水合物的量。如果根据欧洲药典EP 7.3中的现行规范使用的标准的量乘以校正系数，可以直接比较色谱图中的面积，只要奥沙利铂的称重量保持不变。

如果使用双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的一水合物、任何其它水合物或非水合化合物代替双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物，需要相应地计算校正系数。

除稳定性和易制备性外，以靶向方式施加对抗肿瘤剂而言至关重要。在现有技术中描述了相关的聚合物改性的铂络合物。例如在US 2011/0286958 A1中使用二硝酸根-(1,2-二氨基环己烷)合铂(II)作为原材料。

令人惊讶地，已经表明，本发明的物质双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)及其水合物可用于制备聚合物键合的环己烷二胺合铂(II)络合物。本发明的用途包括：

a. 提供双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)或其水合物；

b. 提供包含至少一个或多个能与铂成键的基团的聚合物；

c. 使双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)或其水合物和聚合物在溶剂中反应。

双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)或其水合物的使用能够由于该产物在水中的高溶解度而实现灵活反应。该二水合物与从现有技术中获知的化合物相比尤其具有大于80 mg/ml的在水中的高溶解度。因此，在步骤a中优选使用双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物。本发明的双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物和任何其它水合物或所述化合物本身都不是固有的爆炸性物质。因此，由此克服来自现有技术的缺点。在这种情况下，可以使双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)或其任何水合物与已知聚合物反应。在这种情况下，铂键合的甲苯磺酸根或水基(water groups)充当离去基团。它们被聚合物内的能与铂成键（优选配位键）的基团取代。

键合到环己烷二胺合铂(II)络合物上的聚合物优选包含能与铂形成4-至7-元螯合环的基团。相关的螯合环提供特别稳定的铂(II)络合物。在本发明的范围中，4-至7-元螯合环包括4元、5元、6元和7元螯合环。

该聚合物优选包含羧酸酯基团、酰胺基团或氨基。例如在US 2011/0286958 A1中描述和要求保护相关的聚合化合物。

环己烷二胺合铂络合物或其水合物与该聚合物的反应在溶剂中进行。该溶剂优选包含水。该溶剂优选是水。

该聚合物优选是聚(N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺基-gly-gly-gly-二乙基氨基丙二酸酯（聚(HPMA)-GGG-Ame），由此gly代表甘氨酰基。

在一个特别优选的实施方案中，本发明因此涉及双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物用于制备聚合物键合的环己烷二胺合铂(II)络合物的用途，其包括：

a. 提供双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物；

b. 提供聚(HPMA)-GGG-Ame；

c. 使双-(4-甲基-苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物和聚(HPMA)-GGG-Ame在水中反应。

在这种情况下，甘氨酰基充当连接基以便能够更灵活连接。通过氨基丙二酸酯（Ame）基团实现聚合物与铂(II)的实际连接。

示例性实施方案:

1. 双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物的化学合成

为了化学合成双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)（双甲苯磺酸根环己烷二胺合铂）的二水合物，将二氯-R,R-(1,2-二氨基环己烷)合铂(II)的悬浮液悬浮在水中并添加在水中含有0.97摩尔当量的(对-甲苯磺酸)银的溶液。该混合物在暗处在55 ℃下搅拌48小时。随后，将该悬浮液冷却至4℃并继续搅拌另外4小时。通过过滤除去所得氯化银，然后将滤液在活性炭（相对于原材料的5重量%）存在下在室温下搅拌另外20小时，然后再过滤。然后在真空中在50℃下将所得滤液缩减至其起始体积的30%，然后将略过量的1-丁醇作为夹带剂添加到该水性反应混合物中以完全除去水。这通过在真空中在50℃下进一步缩减体积实现。向这种无水1-丁醇溶液中，加入15当量（相对于铂）水并将该溶液搅拌另外16小时。然后通过将反溶剂乙酸乙酯添加到该1-丁醇溶液中，使目标化合物沉淀。通过过滤移出由此获得的固体并在真空中在40 ℃下干燥。

该化合物的分析表明其是二水合物（测得水含量为5.12%，理论水含量为5.24 %）。

收率为60至85%。

2. 双-(4-甲基-苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物的纯化

可以通过随后重结晶以可再现的方式纯化双-(4-甲基-苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物。

为此目的，重复上文1.下描述的程序：溶解在无水1-丁醇中，加入指定量的水以形成二水合物，通过将乙酸乙酯添加到该1-丁醇溶液中以沉淀。

这产生双-(4-甲基苯磺酸根)-1,2-环己烷二胺合铂(II)的二水合物的晶体。

3. 二水合物类的制备

双甲苯磺酸根-环己烷二胺合铂（4.28克；6.568毫摩尔）在50℃下在45毫升纯化水中搅拌1小时。该溶液随后经Sartorius制造的0.2 μm RC过滤器（无纺布增强型）过滤并用40毫升纯化水洗涤。使该溶液冷却至室温。

相应反应显示在图4中。

4. 聚合物与甲苯磺酸根-环己烷二胺合铂的缀合物的制备

将11克聚(HPMA)-GGG-Ame（相当于5.5毫摩尔Ame）置于62毫升纯化水中并在RT下搅拌30分钟。然后，加入5毫升2N NaOH水溶液（pH=13）并将该批料在RT下搅拌另外30分钟。然后用5% HNO₃水溶液将反应溶液调节至pH 7.4，然后经P5 frit过滤，然后经Steritop (Merck；孔径0.1 μm)过滤并用10毫升纯化水冲洗。将滤液转移到烧瓶中并在加入新鲜制备的Pt-DACH-二水合物类溶液（来自实施例3）的同时剧烈搅拌，由此pH降至5。然后使用2 N NaOH水溶液将该溶液的pH调节至5.2。该溶液在恒定pH下在RT下搅拌2小时（根据需要使用NaOH溶液再调节pH）。然后，使用2 N NaOH水溶液将反应溶液的pH调节至7.4并将该批料加热至38℃，然后在7.4的恒定pH下在38℃下搅拌17小时（使用滴定器（Metrohm制造的716 DMS Titrino）使pH值保持恒定）。随后，该溶液经Steritop (Merck；0.1 μm)过滤并用10毫升纯化水冲洗。借助TFF将该溶液浓缩至大约60毫升并用大约50毫升纯化水洗涤5次。然后将渗余物转移到双壁烧瓶中，然后加入1.29克NaCl、243毫克NaH₂PO₄*H₂O和1.89克Na₂HPO₄*7H₂O。该溶液用纯化水补充至总体积为150毫升，一旦加入的盐完全溶解，用2 N NaOH水溶液将pH调节至7.4。将该批料加热至38℃并在无搅拌的情况下在此温度下保持4小时。该溶液随后经Steritop (Merck；0.1 μm)过滤并借助TFF将滤液浓缩至大约60毫升，并用纯化水冲洗（收集7份渗透溶液）。然后将渗余物冻干。

收率为6.35 g (49.3%)。

聚(HPMA)-GGG-Ame = 聚(N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺基-gly-gly-gly-二乙基氨基-丙二酸酯

聚(HPMA)  =  聚(N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺

DACH = 1R,2R-二氨基环己烷

TFF = 切向流过滤

RW = 纯化水

RT = 室温(20℃)。

5. 与现有技术比较

5.a 由硝酸根-环己烷二胺合铂制备二水合物类（图5）

将PtDACH(NO₃)₂（10克；23.079 毫摩尔）置于149毫升纯化水中。加入总共657微升5% HNO₃，然后在70℃下搅拌1小时。该溶液随后经Sartorius制造的0.2 μm RC过滤器（无纺布增强型）过滤并用40毫升纯化水洗涤。使该溶液冷却至室温。

相应反应显示在图5中。

5.b. 聚合物与硝酸根-环己烷二胺合铂的缀合物的制备

该制备与实施例4类似地进行，除了使用如实施例5.a中制备的由硝酸根-环己烷二胺合铂制成的二水合物类代替由甲苯磺酸根-环己烷二胺合铂制成的二水合物类。

收率为7.13 g (66.8 %)。