一种用液相色谱法分离测定奥美沙坦酯中间体有关物质的方法

摘要

本发明属分析化学领域，本发明公开了一种用液相色谱法分离测定奥美沙坦酯中间体4-(1-羟基-1-甲基乙基)-丙基-1-[[2’-[三苯甲基-1H-四唑-5-基][1,1’-联苯]-4-基]甲基]-1H-咪唑-5-乙酸乙酯有关物质化学纯度的方法，该方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的无机酸盐缓冲溶液－有机相为流动相，可以定量测定奥美沙坦酯中间体及其有关物质的含量，从而有效控制奥美沙坦酯中间体起始物料及奥美沙坦酯的质量。本发明方法专属性强，准确度高，操作简便。

说明书

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及液相色谱法分离测定奥美沙坦酯中间体及其有关物质的方法。 

背景技术

奥美沙坦酯是一种沙坦类抗高血压药，1991年由日本三共株式会社研制成功。它克服了血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)的缺点并保存其优点，其作用类似但不引起ACEI类药物导致的干咳、皮疹和血管神经性水肿等作用，不良反应较小，病人耐受性好，在轻中度高血压治疗中疗效良好，在临床上比较受欢迎。奥美沙坦酯中间体化学名为5-(1-Hydroxy-1-methyl-ethyl)-2-propyl-3-[2'-(1-trityl-1H-tetrazol-5-yl)-biphenyl-4-ylmethyl]-3H-imidazole-4-carboxylic acid ethyl ester，分子式为C₄₅H₄₄N₆O₃。奥美沙坦酯中间体结构式为： 

在合成该化合物的过程中，有几步重要的中间体可能会由于去除不完全而影响药物的纯度和质量，对于奥美沙坦酯中间体的合成主要控制的有关物质有4个，分别是有关物质1（2-Propyl-1H-imidazole-4,5-dicarboxylic acid）、有关物质2（2-Propyl-1H-imidazole-4,5-dicarboxylic acid diethyl ester）、有关物质3（5-(1-Hydroxy-1-methyl-ethyl)-2-propyl-3H-imidazole-4-carboxylic acid ethyl ester）和有关物质4（5-(4'-Bromomethyl-biphenyl-2-yl)-1-trityl-1H-tetrazole），结构式分别为：

  

  

对于合成奥美沙坦酯中间体中引入的杂质，在原料药中是需要进行质量控制的，因此，实现奥美沙坦酯中间体及其有关物质的分离，在奥美沙坦酯的合成及其质量控制方面具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分析奥美沙坦酯中间体化学纯度以及分离其有关物质的方法，从而实现奥美沙坦酯中间体与其有关物质的分离和测定，保证奥美沙坦酯及含奥美沙坦酯制剂的质量控制。 

本发明所述的用液相色谱法分析奥美沙坦酯中间体化学纯度以及分离其有关物质的方法，是采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以一定比例的无机盐缓冲溶液－有机相为流动相。 

上述所说的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，选自Kromasil-C₈或ES-C₈。 

上述所说的有机相选自以下化合物：甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇，优选为甲醇。 

上述所说的方法，其流动相无机盐缓冲溶液-有机相采用梯度洗脱。 

上述所说的方法中，无机盐缓冲溶液中包含的无机盐选自磷酸盐、碳酸盐、柠檬酸盐，优选为磷酸盐。 

其中无机盐缓冲溶液中包含的无机盐的浓度为0.01～0.1mol/L，优选浓度为0.03mol/L。 

本发明所述的分离测定方法，可按照以下方法实现： 

1) 取奥美沙坦酯中间体样品适量，用甲醇或流动相溶解样品，配制成每1mL含奥美沙坦酯0.1～1.5mg的样品溶液。

2) 设置流动相流速为0.5～1.5mL/min ，流动相流速优选为1.0mL/min，检测波长为210～280nm，最佳检测波长为254nm，柱温箱温度为20～50℃，柱温箱温度最佳为25℃。 

3) 取1)的样品溶液10～50μL，注入液相色谱仪，完成奥美沙坦酯中间体与有关物质的分离测定。其中： 

高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为岛津：LC-20AT， CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp 

色谱柱：C₁₈（Kromasil，250×4.6 mm，5μm）

流动相： A：0.03mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液（称取磷酸二氢钾4.08g，加水溶解至1000ml，用稀磷酸溶液调pH 3.0）；B：甲醇；采用梯度洗脱；

流速：1.0 mL/min

检测波长：254 nm

柱温：25℃

进样体积：10μL

本发明采用C₁₈（Kromasil，250×4.6 mm，5μm），能够有效的分离奥美沙坦酯中间体及其有关物质。本发明解决了奥美沙坦酯及其有关物质的分离测定问题，从而确保了奥美沙坦酯中间体原料药的质量可控（结果见附图1～7）。 

附图说明

图1为实施例1时的奥美沙坦酯中间体及其有关物质HPLC图； 

图2为实施例1时奥美沙坦酯中间体HPLC图；

图3为实施例2时的奥美沙坦酯中间体及其有关物质HPLC图；

图4为实施例2时的奥美沙坦酯中间体的HPLC图；

图5为实施例3时的溶剂HPLC图；

图6为实施例3时的奥美沙坦酯中间体及其有关物质HPLC图；

图7为实施例3时的奥美沙坦酯中间体的HPLC图。

具体实施方式：

以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。

实施例1 

仪器与条件

高效液相色谱仪：岛津：LC-20AT， CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp；

色谱柱：C₁₈（Kromasil，250×4.6 mm，5μm）；

流动相： A相：0.03 mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液（称取磷酸二氢钾4.08 g，加水溶解至1000ml，用稀磷酸溶液调pH 6.5），B相：乙腈，采用梯度洗脱；

T(min)0530505560B%404085854040

流速：1.0mL/min

检测波长：254 nm

柱温：25℃

进样体积：10 μL。

实验步骤 

取奥美沙坦酯中间体及其有关物质适量，分别用甲醇溶解样品，配制成含奥美沙坦酯中间体及其有关物质约0.5 mg/mL的样品溶液。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图1～2，图1中保留时间为46.551min的色谱峰为奥美沙坦酯中间体，其余色谱峰为奥美沙坦酯中间体各有关物质的色谱峰；图2中保留时间为46.613min的色谱峰为奥美沙坦酯中间体。

实施例2 

仪器与条件

高效液相色谱仪：岛津：LC-20AT， CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp；

色谱柱：C₁₈（Kromasil，250×4.6 mm，5μm）；

流动相： A相：0.03 mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液（称取磷酸二氢钾4.08 g，加水溶解至1000ml，用稀磷酸溶液调pH 5.0），B相：乙腈，采用梯度洗脱；

T(min)0530505560B%404090904040

流速：1.0mL/min

检测波长：254 nm

柱温：25℃

进样体积：10 μL。

实验步骤 

取奥美沙坦酯中间体及其有关物质适量，分别用甲醇溶解样品，配制成含奥美沙坦酯中间体及其有关物质约0.5 mg/mL的样品溶液。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图3~4，图3中保留时间为36.905min的色谱峰为奥美沙坦酯中间体，其余色谱峰为奥美沙坦酯中间体各有关物质的色谱峰；图4中保留时间为36.645min的色谱峰为奥美沙坦酯中间体。

实施例3 

仪器与条件

高效液相色谱仪：岛津：LC-20AT， CBM-20A，SIL-20AC，SPD-M20A，CTO-10ASvp；

色谱柱：C₁₈（Kromasil，250×4.6 mm，5μm）；

流动相： A相：0.03 mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液（称取磷酸二氢钾4.08 g，加水溶解至1000ml，用稀磷酸溶液调pH 3.0），B相：甲醇，采用梯度洗脱；

T(min)0330506070B%303090903030

流速：1.0mL/min

检测波长：254 nm

柱温：25℃

进样体积：10 μL。

实验步骤 

取奥美沙坦酯中间体及其有关物质适量，分别用甲醇溶解样品，配制成含奥美沙坦酯中间体及其有关物质约0.5 mg/mL的样品溶液；另取甲醇适量作为空白溶剂。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图5~7，图5为溶剂色谱图；图6中保留时间为42.173min的色谱峰为奥美沙坦酯中间体，其余色谱峰为奥美沙坦酯中间体各有关物质的色谱峰，由图可以看出，奥美沙坦酯中间体与其有关物质能够达到基线分离，符合中国药典的要求；图7中保留时间为42.151min的色谱峰奥美沙坦酯中间体，可以看出在该条件下奥美沙坦酯中间体与其有关物质可以完全分离。