一种表面活性剂协同微波-超声波提取枳椇子总黄酮的方法

摘要

本发明具体涉及一种利用表面活性剂协同微波-超声波提取枳椇子总黄酮的方法。它包括如下步骤：（1）将枳椇子粉碎后，用石油醚进行索氏提取除去脂肪，得到完全除脂的枳椇子粉碎物；（2）将枳椇子粉碎物、蒸馏水和表面活性剂混匀后得到混合溶液；（3）将混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为200~600W，超声波功率为100~500W，提取时间为5~20min；（4）提取结束后取滤液、醇沉淀后弃醇上清，浓缩并干燥，得到枳椇子总黄酮提取物。采用本发明所述方法提取枳椇子总黄酮，大大缩短了提取时间，提高了提取效率，降低了成本，且耗能少；同时以溶有少量表面活性剂的蒸馏水溶液作为提取液，不存在有毒有机溶剂残留的问题。

说明书

技术领域

本发明涉及一种天然活性物质的提取方法，具体涉及一种利用表面活性剂协同微波-超声波提取枳椇子总黄酮的方法。

背景技术

枳椇子是鼠李科植物枳棋（HoveniadulcisThunb）的干燥种子。传统中医认为，枳棋子具有止渴除烦，清湿热，解酒毒的功能。用于烦热止渴，二便不利，酒精中毒等症。其中枳椇子的主要活性成分为黄酮类（包括山奈酚、洋芹素、杨梅黄素、槲皮素、双氢杨梅黄素）和蒽醌类化合物大黄素等。目前提取枳椇子黄酮的方法主要有冷浸、渗漉、索氏提取法、热回流法等传统固-液浸提法。但这些方法不可避免的存在能耗高，耗时长，产率较低且有机溶剂残留等缺点。现代病理学研究表明，过量的自由基及其诱导的氧化反应与很多疾病有关，如动脉粥样硬化、衰老、癌症等。而目前的人工合成抗氧化剂BHT、BHA、TBHA多存在一定的毒性。随着绿色环保的概念逐渐深入人心，对天然抗氧化成分的需求日益增长。枳椇子中的黄酮做为天然抗氧化剂具有良好的抗氧化活性，在食品、化妆品、药品中具有广泛的应用潜质。

发明内容

本发明的发明目的是提供一种表面活性剂协同微波-超声波提取枳椇子总黄酮的方法，通过以溶有表面活性剂的水溶液为提取液，结合微波提取法和超声波提取法提取枳椇子总黄酮，所述方法可以大大提高提取效率，降低提取成本，且不存在有毒有机溶剂残留的问题。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：

一种表面活性剂协助微波-超声波提取枳椇子总黄酮的方法，它包括如下步骤：

（1）    将枳椇子粉碎后真空干燥，然后以石油醚为溶剂，采用索氏提取法除去枳椇子中的脂肪，得到完全除脂的枳椇子粉碎物；

（2）    将枳椇子粉碎物和蒸馏水按质量比1：11~1：33充分混合后得到料液；

（3）    向步骤（2）的料液中加入表面活性剂，混匀后得到混合溶液，所述表面活性剂的质量为所述蒸馏水质量的0.2%~2%；

（4）    将步骤（3）的混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为200~600W，超声波功率为100~500W，提取时间为5~20min；

（5）    微波-超声波提取结束，过滤后取其滤液；

（6）    向滤液中加入乙醇进行醇沉，静置后弃去醇上清液，再浓缩并干燥后，得到枳椇子总黄酮。

上述方案中，所述表面活性剂为吐温20、吐温40或吐温60；优选吐温20。上述方案中，所述微波功率为300W，超声波功率为400W，提取时间为

10min。

上述方案中，所述乙醇的体积浓度为40%~80%；优选60%。

本发明的原理是：表面活性剂具有亲水亲油双重性质，可以降低枳椇子细胞膜和水溶液间的界面张力，使有效成分可以轻易溶出，因此以溶有合适剂量的表面活性剂的水取代有机溶剂作为提取介质，对有效成分有“增溶”的作用；另外，微波是通过使极性分子发生共振摩擦从而产生热效应，同时微波又有穿透性，可以使溶剂和物料内部同时加热，这样不仅利用了热效应，同时由于细胞内部在加热，产生了压力，细胞更容易发生破裂，有效成分可以自由溶出；超声波则是利用“空穴作用”局部产生瞬间的高压，使细胞产生孔洞甚至破裂，也可以使有效成分进一步流出；所以将三者结合同时作用于枳椇子提取工艺可以大大的提高提取效率，降低成本。

本发明的有益效果：

（1）采用本发明所述方法提取枳椇子总黄酮，提取时间由传统的2h~4h缩短为5~20min，大大缩短了提取时间，提高了提取效率，且成本低、耗能少；

（2）以溶有少量表面活性剂的蒸馏水溶液作为提取液，取代了传统的有机溶剂，因表面活性剂广泛的应用于食品、保健品、化妆品中，无毒无害，因此以本发明方法提取的枳椇子总黄酮在应用于以上领域时不存在有毒溶剂残留的问题。

（3）采用本发明方法提取得到的枳椇子总黄酮，由于避免了长时间的热效应，减少了黄酮发生水解、热分解、被氧化的程度，其体外抗氧化活性明显优于采用传统方法提取得到的总黄酮。

（4）本发明所述方法操作简单，所需设备简单，溶剂易得易储存，有潜在的应用前景。

具体实施方式

为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。

实施例1

一种表面活性剂协同微波-超声波提取枳椇子总黄酮的方法，包括如下步骤：（1）准确称取5g枳椇子粉碎物，真空干燥后进行石油醚索氏提取至完全除脂，得到完全除脂的枳椇子粉碎物4.59g；（2）将完全除脂的枳椇子粉碎物4.59g、50g蒸馏水和0.4g表面活性剂吐温20混合均匀后得到混合溶液；（3）将所述混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为300W，超声波功率为400W，提取时间为10min；（4）提取完毕后对混合溶液过滤后取滤液；（5）向滤液中加入60vt%（体积浓度）乙醇进行醇沉，静置后弃醇上清液，再浓缩并干燥后，得到枳椇子总黄酮。

采用NaNO₂-Al(NO₃)₃-NaOH法测定上述提取得到的枳椇子总黄酮的含量，结果显示：总黄酮含量为2.21wt%。

采用邻二氮菲法、邻苯三酚自氧化法、DPPH法对上述提取得到的枳椇子总黄酮进行体外抗氧化性能测试，结果显示：当总黄酮浓度为0.4mg·ml^-1时，其清除率·OH为79.1％，O₂^-为83.2％，DPPH·为96.7％；与对比例对比可知，本实施例所述方法提取得到的总黄酮，其体外抗氧化性明显优于采用传统热回流法提取得到的黄酮。

实施例2

一种表面活性剂协同微波-超声波提取枳椇子总黄酮的方法，包括如下步骤：（1）准确称取5g枳椇子粉碎物，真空干燥后进行石油醚索氏提取至完全除脂，得到完全除脂的枳椇子粉碎物4.59g；（2）将完全除脂的枳椇子粉碎物4.59g、100g蒸馏水和0.2g表面活性剂吐温40混合均匀后得到混合溶液；（3）将所述混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为200W，超声波功率为100W，提取时间为5min；（4）提取完毕后对混合溶液过滤后取滤液；（5）向滤液中加入80vt%乙醇进行醇沉，静置后弃醇上清液，再浓缩并干燥后，得到枳椇子总黄酮。

采用NaNO₂-Al(NO₃)₃-NaOH法测定上述提取得到的枳椇子总黄酮的含量，结果显示：总黄酮含量为1.31wt%。

采用邻二氮菲法、邻苯三酚自氧化法、DPPH法对上述提取得到的枳椇子总黄酮进行体外抗氧化性能测试，结果显示：当总黄酮浓度为0.4mg·ml^-1时，其清除率·OH为73.3％，O₂^-为79.9％，DPPH·为92.1％。与对比例对比可知，本实施例所述方法提取得到的总黄酮，其体外抗氧化性明显优于采用传统热回流法提取得到的黄酮。

实施例3

一种表面活性剂协同微波-超声波提取枳椇子总黄酮的方法，包括如下步骤：

（1）准确称取5g枳椇子粉碎物，真空干燥后进行石油醚索氏提取至完全除脂，得到完全除脂的枳椇子粉碎物4.59g；（2）将完全除脂的枳椇子粉碎物4.59g、150g蒸馏水和3g表面活性剂吐温60混合均匀后得到混合溶液；（3）将所述混合溶液进行微波-超声波提取，微波功率为600W，超声波功率为500W，提取时间为20min；（4）提取完毕后对混合溶液过滤后取滤液；（5）向滤液中加入40vt%乙醇进行醇沉，静置后弃醇上清液，再浓缩并干燥后，得到枳椇子总黄酮。

采用NaNO₂-Al(NO₃)₃-NaOH法测定上述提取得到的枳椇子总黄酮的含量，结果显示：总黄酮含量为1.98wt%。

采用邻二氮菲法、邻苯三酚自氧化法、DPPH法对上述提取得到的枳椇子总黄酮进行体外抗氧化性能测试，结果显示：当浓度为0.4mg·ml^-1时，其清除率·OH为76.3.1％，O₂^-为80.0％，DPPH·为95.2％。与对比例对比可知，本实施例方法提取得到的总黄酮，其体外抗氧化性明显优于采用传统热回流法提取得到的黄酮。

对比例

采用传统热回流法提取枳椇子总黄酮的方法，包括如下步骤：

（1）准确称取5g枳椇子粉碎物，真空干燥后进行石油醚索氏提取至完全除脂，得到完全除脂的枳椇子粉碎物4.59g；（2）将完全除脂的枳椇子粉碎物4.59g、50mL70vt%乙醇溶液混合均匀后得到混合溶液；（3）将所述混合溶液加热至微沸，加热容器上连接冷凝装置保持乙醇持续回流，提取时间为120min；（4）提取完毕后对混合溶液过滤后取滤液；（5）向滤液中加入60vt%乙醇进行醇沉，静置后弃醇上清液，再浓缩并干燥后，得到枳椇子总黄酮。

将上述提取得到的总黄酮采用邻二氮菲法、邻苯三酚自氧化法、DPPH法进行体外抗氧化性能测试，结果为：当总黄酮浓度为0.4mg·ml^-1时，其清除率·OH为60.7％，O₂^-为70.2％，DPPH·为73.9％。对比可知，利用本发明所述方法提取得到的总黄酮，其体外抗氧化性明显优于采用传统热回流法提取得到的总黄酮。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的实例，而并非对实施方式的限制。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而因此所引申的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之内。