一种巴氏灭活静注人免疫球蛋白的蛋白质保护剂及其灭活方法

摘要

本发明提供了一种巴氏灭活静注人免疫球蛋白的蛋白质保护剂及其灭活方法，一种静注人免疫球蛋白的巴氏灭活方法，包括以下步骤：首先将灭活前的静注人免疫球蛋白溶液加入蛋白质保护剂，然后调整样品蛋白质含量40g/L～60g/L，pH值4.7～5.3，搅拌30分钟后，放入60℃±1℃水浴中，待溶液温度到60℃计时，保持溶液温度60℃±0.5℃10小时，即完成静注人免疫球蛋白的灭活，所述的蛋白质保护剂为蔗糖、精氨酸、甘氨酸、山梨醇，其最终含量分别为：50g/L～70g/L、20g/L～40g/L、30g/L～60g/L及240g/L～260g/L；本发明的蛋白质保护剂，与单纯的山梨醇作为保护剂，多聚体的含量为4.12%降到了1.96%，很好的保护了蛋白质，提高了产品质量。

说明书

技术领域

本发明提供了蛋白质保护剂及其灭活方法，尤其是一种巴氏灭活静注人免 疫球蛋白的蛋白质保护剂及其灭活方法。

背景技术

人免疫球蛋白是一组具有抗体活性的蛋白质，经输注后，能迅速提高受者 血液中的IgG水平，增强机体的抗感染能力和免疫调节功能。由于静注人免疫 球蛋白的原料是健康人血浆，尽管对供血浆者采用各种检测试剂来筛选血浆及 2007年开始实施90天检疫期制度，使患者大大远离病毒侵袭的风险，但仍受血 浆筛选试剂的灵敏性以及技术的限制、和未知病毒的潜在威胁。因此血液制品 在生产过程中一方面，要通过严格的筛选供血浆者以减少或排除原料血浆中可 能存在的病毒；另一方面在制备过程中引入有效的病毒灭活工艺，这也从根本 上消除血液制品可能导致病毒感染的的有效保证。为此国家药品监督管理局于 2002年下发一个《血液制品去除/灭活病毒技术方法及验正指导原则》，原则中 列举了常用的病毒灭活方法及指示病毒，其中巴氏灭活方法就是血液制品生产 过程中一种常用有效的方法。它在人血白蛋白的应用几十年临床应用结果表明， 该法对HIV和肝炎病毒是安全的。其用于静注人免疫球蛋白也是众多企业的选 择，但制品经加热过后，都会出现多聚体增多的情况，筛选一种或多种保护剂 成为众多血液制品企业必修的功课。

发明内容

本发明提供了一种巴氏灭活静注人免疫球蛋白的蛋白质保护剂及其灭活方 法，解决了现有人血白蛋白的灭活过程中，制品经加热过后，出现多聚体增多 的问题。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种巴氏灭活静注人免疫球蛋白的蛋白质保护剂，包括蔗糖、精氨酸、甘 氨酸和山梨醇，其最终含量分别为：50g/L～70g/L、20g/L～40g/L、30g/L～ 60g/L及240g/L～260g/L。

进一步，本发明的一种优选方案：所述的蔗糖、精氨酸、甘氨酸、山梨醇 的最终60g/L、30g/L、40g/L、250g/L。

本发明的蛋白质保护剂可以广泛的用于血液制品的灭活。

一种静注人免疫球蛋白的巴氏灭活方法，包括以下步骤：

首先将灭活前的静注人免疫球蛋白溶液加入蛋白质保护剂，然后调整样品 蛋白质含量40g/L～60g/L，pH值4.7～5.3，搅拌30分钟后，放入60℃±1℃ 水浴中，待溶液温度到60℃计时，保持溶液温度60℃±0.5℃10小时，即完成 静注人免疫球蛋白的灭活，所述的蛋白质保护剂包括蔗糖、精氨酸、甘氨酸和 山梨醇，其最终含量分别为：50g/L～70g/L、20g/L～40g/L、30g/L～60g/L 及240g/L～260g/L。

进一步，本发明的一种优选方案：所述的蔗糖、精氨酸、甘氨酸、山梨醇 的最终60g/L、30g/L、40g/L、250g/L。

不同蛋白质保护剂的选择研究：

首先将灭活前的静注人免疫球蛋白溶液加入蛋白质保护剂，然后调整样品 蛋白质含量40g/L～60g/L，pH值4.7～5.3，搅拌30分钟后，放入60℃±1℃ 水浴中，待制品温度到60℃计时，保持制品温度60℃±0.5℃10小时。后取出 后测定加热前后多聚体变化，进行比较。测定方法按照《中国药典》2010年版 三部附录VI R“人免疫球蛋白类制品IgG单体加二聚体测定法”进行测定。

1、以山梨醇为基础的组合比较，结果见下表1。

表1不同组合的结果

注：加热前多聚体1.86%，下同。

通过以上实验可以得出结论：将山梨醇、甘氨酸、蔗糖、精氨酸作为蛋白质 保护剂，比其中的组合效果要好。

2、精氨酸浓度的筛选

将山梨醇、甘氨酸、蔗糖的浓度分别定为15%(g/ml)、5%(g/ml)、5%(g/ml)， 精氨酸浓度分别由1%(g/ml)、3%(g/ml)、5%(g/ml)、7%(g/ml)、10%(g/ml)，具 体结果见表2。

表2精氨酸浓度的筛选结果

通过该实验，精氨酸从3%（g/ml）以上，其多聚体变化不大。我们认为精氨 酸浓度定位3%（g/ml）较为合适。

3、甘氨酸浓度的筛选

将山梨醇、蔗糖、精氨酸的浓度分别定为15%（g/ml）、5%（g/ml）、3%（g/ml）， 甘氨酸浓度分别由2%（g/ml）、4%（g/ml）、6%（g/ml）、8%（g/ml）、10%（g/ml）， 具体结果见表3。

表3甘氨酸浓度的筛选的结果

从上表可以看出，甘氨酸浓度定位4%（g/ml）较好。

4、蔗糖浓度的筛选

将山梨醇、精氨酸、甘氨酸的浓度分别定为15%（g/ml）、3%（g/ml）、4% （g/ml），蔗糖浓度分别由2%（g/ml）、4%（g/ml）、6%（g/ml）、8%（g/ml）、10% （g/ml），具体结果见表4。

表4蔗糖浓度的筛选的结果

从上表可以看出，蔗糖浓度定位6%（g/ml）较好。

5、山梨醇浓度的筛选

将蔗糖、精氨酸、甘氨酸的浓度分别定为6%（g/ml）、3%（g/ml）、4%（g/ml）， 山梨醇浓度分别由10%（g/ml）、15%（g/ml）、20%（g/ml）、25%（g/ml）、30% （g/ml），具体结果见表5。

表5山梨醇浓度的筛选结果

从上表可以看出，山梨醇浓度定位25%（g/ml）较好。

另外实验中测定其他静注人免疫球蛋白的指标与依山梨醇作为蛋白质保护 剂的结果一致，表明采用本发明的蛋白质保护剂对静注人免疫球蛋白的其他理 化指标没有影响。

本发明的有益效果：

本发明的蛋白质保护剂，能够有效地保证制品，加热后很少的聚合，与单 纯的山梨醇作为保护剂，多聚体的含量为4.12%降到了1.96%，很好的保护了血 液制品中的蛋白质，提高了产品质量。

具体实施方式

下面将结合本具体的实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述， 显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基 于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获 得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

一种静注人免疫球蛋白的巴氏灭活方法，包括以下步骤：

首先将灭活前的静注人免疫球蛋白溶液加入蛋白质保护剂，然后调整样品 蛋白质含量40g/L～60g/L，pH值4.7～5.3，搅拌30分钟后，放入60℃±1℃ 水浴中，待溶液温度到60℃计时，保持溶液温度60℃±0.5℃10小时，即完成 静注人免疫球蛋白的灭活，所述的蛋白质保护剂包括蔗糖60g/L、精氨酸30g/L、 甘氨酸40g/L和山梨醇250g/L。灭活以后，取出后测定加热前后多聚体变化， 测定方法按照《中国药典》2010年版三部附录VI R“人免疫球蛋白类制品IgG 单体加二聚体测定法”进行测定。测定的多聚体变化含量为1.90%,灭活前的多 聚体变化含量为1.88%。

实施例2

一种静注人免疫球蛋白的巴氏灭活方法，包括以下步骤：

首先将灭活前的静注人免疫球蛋白溶液加入蛋白质保护剂，然后调整样品 蛋白质含量40g/L～60g/L，pH值4.7～5.3，搅拌30分钟后，放入60℃±1℃ 水浴中，待溶液温度到60℃计时，保持溶液温度60℃±0.5℃10小时，即完成 静注人免疫球蛋白的灭活，所述的蛋白质保护剂包括蔗糖70g/L、精氨酸20g/L、 甘氨酸30g/L和山梨醇260g/L。灭活以后，取出后测定加热前后多聚体变化， 测定方法按照《中国药典》2010年版三部附录VI R“人免疫球蛋白类制品IgG 单体加二聚体测定法”进行测定；测定的多聚体变化含量为1.97%，灭活前的多 聚体变化含量为1.88%。

实施例3

一种静注人免疫球蛋白的巴氏灭活方法，包括以下步骤：

首先将灭活前的静注人免疫球蛋白溶液加入蛋白质保护剂，然后调整样品 蛋白质含量40g/L～60g/L，pH值4.7～5.3，搅拌30分钟后，放入60℃±1 ℃水浴中，待溶液温度到60℃计时，保持溶液温度60℃±0.5℃10小时，即完 成静注人免疫球蛋白的灭活，所述的蛋白质保护剂包括蔗糖50g/L、精氨酸40 g/L、甘氨酸20g/L l和山梨醇240g/L。灭活以后，取出后测定加热前后多聚 体变化，测定方法按照《中国药典》2010年版三部附录VI R“人免疫球蛋白 类制品IgG单体加二聚体测定法”进行测定；测定的多聚体变化含量为1.98%, 灭活前的多聚体变化含量为1.88%。

由以上的实施例可以，本发明的蛋白质保护剂对静注人免疫球蛋白具有很 好的保护作用，灭活前后的多聚体含量基本上没有变化，并且对静注人免疫球 蛋白其它理化指标没有影响。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发 明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发 明的保护范围之内。