太空诱变高效灵芝菌、其应用及其胶囊制剂的制备方法

摘要

本发明涉及一株太空诱变高效灵芝菌、其应用及其胶囊制剂的制备方法。对灵芝菌株进行常规诱变，不仅效率低，且需要对大批量的原始菌株进行诱变，变异幅度较小，很难大规模的提高发酵产物中目的产物灵芝多糖的产率。本发明提供了一株灵芝菌（

说明书

技术领域

    本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一株太空诱变高效灵芝菌、其应用及其胶囊制剂的制备方法。 

背景技术

灵芝，是担子菌纲多孔菌科灵芝属的一种药用真菌。中国古代把灵芝列为上品药物，药物专著《神农本草经》中记载：灵芝有紫、赤、青、黄、白、黑六种，性味甘平。 

现代药理研究证明，灵芝具有广泛的药理作用，如抗肿瘤作用、保肝解毒作用、扩张冠状动脉和改善心肌微循环作用镇静作用、抗衰老作用、抗神经衰弱作用等。化学成分分析显示，灵芝属的子实体、菌丝体和孢子中含有多糖类、核苷类、呋喃类衍生物、甾酵类、生物碱类、蛋白质、多肽、氨基酸类、三萜类、倍半萜、有机锗、无机盐等。 

大量实验研究证明，灵芝的有效成分主要是多糖类物质，灵芝多糖具有免疫调节，抗肿瘤，抗衰老，清除氧自由基，活血化瘀，抗凝血，降血糖及护肝的功效。灵芝多糖通过增强机体免疫力间接抑制肿瘤细胞生长或者诱导肿瘤细胞凋亡，有效的抑制肿瘤生长，呈现一定的抗肿瘤作用。 

提高灵芝菌株中的灵芝多糖含量一直是科研工作者的研究目标，目前主要运用反馈抑制理论构建耐灵芝多糖反馈抑制的筛选模型和应用常规诱变技术来提高灵芝菌株中灵芝多糖产量。利用耐灵芝多糖反馈抑制的筛选模型，筛选及优化菌株发酵过程中所需条件，过程繁琐，不能从根本上对菌株进行改造，产率的提高有限。而对菌株进行常规诱变，例如紫外或者微波诱变等，效率低，如想获得高效率的灵芝菌株，需要对大批量的原始菌株进行诱变，且该方法筛出的菌株的变异幅度较小，很难大规模的提高发酵产物中目的产物灵芝多糖的产率。此外常规诱变会发生“表型延迟”效应，即当代菌株并不表现出产量提高的优点，不能及时对其进行选育，易被丢弃，并且易发生“遗传分离现象”，即突变株并不稳定，不能长久的用于大规模的灵芝菌株生产。 

发明内容

本发明的目的是提供一株遗传性更稳定、生长更快、灵芝多糖含量更高的太空诱变高效灵芝菌、其应用及其胶囊制剂的制备方法。 

本发明所采用的技术方案是： 

太空诱变高效灵芝菌（Ganoderma lucidum）S7-T7，于2011年5月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 4877，其特征在于：

其18SrDNA序列为SEQ ID No.2。

所述的太空诱变高效灵芝菌（Ganoderma lucidum）S7-T7在制备药物中的应用。 

所述的太空诱变高效灵芝菌（Ganoderma lucidum）S7-T7在制备保健品中的应用。 

所述的太空诱变高效灵芝菌（Ganoderma lucidum）S7-T7在制备药物中的应用，其特征在于： 

其在制备提高免疫力药物中的应用。

所述的太空诱变高效灵芝菌（Ganoderma lucidum）S7-T7在制备药物中的应用，其特征在于： 

其在制备抗氧化药物中的应用。

所述的太空诱变高效灵芝菌（Ganoderma lucidum）S7-T7在制备药物中的应用，其特征在于： 

其在制备提高免疫力保健品中的应用。

所述的太空诱变高效灵芝菌（Ganoderma lucidum）S7-T7在制备药物中的应用，其特征在于： 

其在制备抗氧化保健品中的应用。

所述的太空诱变高效灵芝菌（Ganoderma lucidum）S7-T7制备胶囊制剂的方法，其特征在于： 

由以下步骤实现：

步骤一：将灵芝菌株在发酵罐中培养7～8 d，发酵液4000 rpm离心15min，收集菌丝体，纯化水洗涤菌丝体2次；

步骤二：洗涤后的菌丝体60℃烘干；

步骤三：将干菌体粉碎后过80目筛，加入1.0%硬脂酸镁、1.0%卡拉胶，混合均匀后按0.5g/粒装入胶囊，制成胶囊制剂。

步骤一中，发酵培养基的配方为：蛋白胨2%、蔗糖2%、KH₂PO₄ 0.1%、MgSO₄ 7H₂O 0.05%、VB₁ 0.005%、水余量。 

    本发明具有以下优点： 

本发明所述的灵芝菌株与常规育种方法得到的菌株相比，从基因上改变了菌株的遗传特性，弥补了常规诱变所带来的“表型延迟”和“遗传分离现象”，迅速获得高质量的菌株并保证菌株的稳定性，大规模的提高菌株的产率，不需要经过对发酵条件进行大规模优化实验的途径来提高产量，而且所述菌株中灵芝多糖的含量大幅度提高，能够用于进行大规模的生产，用于制备增强免疫力和抗氧化的药物和保健品。 

附图说明

图1示地面对照菌株高倍镜观察照片；     

图2示本发明所述灵芝菌株高倍镜观察照片；

图3示地面对照菌株结晶紫染色照片；        

图4示本发明所述灵芝菌株结晶紫染色照片；

图5示地面对照菌株扫描电镜照片，放大倍数5000； 

图6示本发明所述灵芝菌株扫描电镜照片，放大倍数5000；

图7示地面对照菌株和本发明所述灵芝菌株的18S rDNA二级结构的V1可变区；A：地面对照菌株；B：本发明所述灵芝菌株；

图8示地面对照菌株和本发明所述灵芝菌株的18S rDNA二级结构的V2可变区；A：地面对照菌株；B：本发明所述灵芝菌株；

图9示地面对照菌株和本发明所述灵芝菌株的18S rDNA二级结构的V3可变区；A：地面对照菌株；B：本发明所述灵芝菌株；

图10示地面对照菌株和本发明所述灵芝菌株的18S rDNA二级结构的V4可变区；A：地面对照菌株；B：本发明所述灵芝菌株；

图11示地面对照菌株和本发明所述灵芝菌株的18S rDNA二级结构的V5可变区；A：地面对照菌株；B：本发明所述灵芝菌株；

图12示地面对照菌株和本发明所述灵芝菌株的18S rDNA二级结构的V6可变区；A：地面对照菌株；B：本发明所述灵芝菌株；

图13示地面对照菌株和本发明所述灵芝菌株的18S rDNA二级结构的V7可变区；A：地面对照菌株；B：本发明所述灵芝菌株；

图14示地面对照菌株和本发明所述灵芝菌株的18S rDNA二级结构的V8可变区；A：地面对照菌株；B：本发明所述灵芝菌株；

图15示地面对照菌株和本发明所述灵芝菌株的18S rDNA二级结构的V9可变区；A：地面对照菌株；B：本发明所述灵芝菌株；

图16示地面对照菌株和本发明所述灵芝菌株SDS-PAGE分析结果

泳道1：分子量Marker；从上至下依次为97.2kDa、66.4kDa、44.3kDa、29.0kDa、20.1kDa、14.3kDa；

泳道2：地面对照菌株裂解物；

泳道3：本发明所述灵芝菌株第1代菌体裂解物；

泳道4：本发明所述灵芝菌株30代传代菌体裂解物。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行详细的说明。 

本发明所述的一株太空诱变高效灵芝菌（Ganoderma lucidum）S7-T7，于2011年5月19日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，建议分类命名为灵芝（Ganoderma lucidum），保藏编号为CGMCC No.4877。 

下述内容中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的实验材料，如无特殊说明，均为常规生化试剂。 

一、筛选培养： 

本发明所述的灵芝菌（Ganoderma lucidum），是一株利用神舟七号载人航天器将待突变的地面对照菌株S7-D7（保藏编号为CGMCC 5.0706）带上太空，经诱变使生物基因组DNA的碱基产生变异，并造成DNA的断裂和重组，产生基因突变。然后在地面进行筛选，比较空间诱变获得的20株单克隆菌株菌丝日生长长度和液体培养菌体干重后，获得的一株有利、高效的正突变菌株。其具体筛选过程如下：

1、培养基

PDA液体培养基：马铃薯200.0 g/L，葡萄糖 20.0 g/L，MgSO₄ 1.5 g/L，KH₂PO₄ 3.0 g/L，VB₁ 0.01 g/L；

PDA固体培养基：马铃薯200.0 g/L，葡萄糖 20.0 g/L，MgSO₄ 1.5 g/L，KH₂PO₄ 3.0 g/L，VB₁ 0.01 g/L，琼脂20.0 g/L。

2、空间诱变 

2008年9月，将待突变的地面对照菌株S7-D7分为2份，1份作为对照菌株于4℃保存，1 份搭载神舟七号载人航天器进行空间诱变。

3、诱变菌株筛选 

每50mL试管接入15mL左右PDA固体培养基制成斜面，挑取经空间诱变获得的单克隆S7-T7菌株20株，分别接种于试管斜面上，于25℃恒温培养5 d，在菌丝生长前沿做标记，继续培养72 h，游标卡尺测量日生长长度。从固体培养基中挑取上述20株单克隆菌株，分别接种于含50 mL PDA液体培养基的250 mL三角瓶中，25℃恒温培养7 d，12000 rpm离心，收集菌体，70℃恒温干燥24 h，分别称取菌体干重。试验重复三次，取平均值，试验过程中地面对照菌株S7-D7作为对照，结果如表1所示。

表1 空间诱变菌株生长速度的测定结果 

结果显示，经空间诱变，选取的20株菌体中正突变菌株的比例为75%，其中编号为S7-T7-8的空间诱变灵芝菌株生长速度最快，在斜面上连续三天测量的生长长度分别为4.3mm、4.4mm、4.3mm，与地面对照菌株相比，生长速度平均提高了19%，在液体培养基中培养7天后S7-T7-8菌体干重最重，为0.322g，较地面对照菌株提高了14%，因此确定S7-T7-8作为空间诱变获得的目标菌株，命名为S7-T7。

二、形态特征和培养特征： 

挑取地面对照菌株S7-D7和实施例1筛选获得的灵芝菌株S7-T7分别接种于PDA平板上，30℃培养10 d后，取平板上的插片用结晶紫染色，以光学显微镜观察细胞生长形态特征。插片做扫描电镜样品处理后，电子扫描显微镜观察细胞生长形态特征，对比并拍照。如图1-图6（S7-D7：图1、3、5；S7-T7：图2、4、6）所示光学显微镜和电子扫描显微镜观察发现所述灵芝菌株菌丝生长旺盛，呈树枝状分布，表面光滑，结晶紫染色着色清晰，与地面对照菌株相比在形态有明显差异。

挑取地面对照菌株S7-D7和实施例1筛选获得的灵芝菌株S7-T7分别接种于PDA平板上，30℃培养10天后，观察S7-T7与S7-D7在PDA平板上的菌落生长大小，颜色及可溶性色素的产生。结果显示：地面对照菌株S7-D7在PDA平板上生长旺盛，由许多疏松的菌丝体构成，菌落成粉状，较薄，菌落正面呈白色，背面淡黄色至黄褐色，菌丝从中心向四周放射状生长，菌落形态不很规则。所述灵芝菌株S7-T7在PDA平板上生长旺盛，由许多疏松的菌丝体构成。菌落成粉状，较厚，菌落正面呈白色，背面淡黄色。菌丝从中心向四周放射状生长，菌落形态不很规则，菌种生长速度较S7-D7快。 

三、生理生化鉴定 

依照《Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology》、《常见细菌系统鉴定手册》等有关内容对地面对照菌株S7-D7和所述灵芝菌株S7-T7菌株进行生理生化特征鉴定。结果参见表2，由表2得知所述灵芝菌株耐酸碱特性与地面对照菌株相似，在pH4-7之间生长，但耐盐性有所不同，所述灵芝菌株在NaCl浓度低于6%时表现良好，而地面对照菌株只能在NaCl 2%以下生长。

表2 菌株生理生化特征差异 

四、18SrDNA序列分析

核糖体RNA为rRNA，与细胞分化、代谢、记忆的储存相关，其有两大主要功能：一是某些病毒的遗传物质；二是参与蛋白质的合成，而这些功能与RNA二级结构的稳定性和自由能密切相关。18SrRNA 由18SrDNA 转录后得到，18SrDNA是相对于基因组而言，它是生物中是最为保守的基因之一，所以常作为生物分类的依据。通常菌株的18SrDNA二级结构比其一级结构具有更高的保守性，18SrDNA碱基序列的改变并不一定会引起其二级结构的改变，而18SrDNA二级结构发生比较明显的变化，则说明菌株的变异比较显著，不仅发生了18SrDNA碱基序列改变，还发生了空间构象的改变。本发明利用18SrDNA可变区二级结构图形分析，比较筛选获得的灵芝菌株与地面对照菌株二级结构在9个可变区二级结构中茎的长度、环的数目和类型、茎的碱基对、以及环内部碱基是否有不同，以此来判定菌株的变异程度。

本发明利用18SrDNA通用引物Ns1、Ns3、Ns4、Ns8扩增，所述灵芝菌株18SrDNA片段大小约为1.9 kb，所以每个产物需用ABI3730XL测序仪测四个反应，再使用ContigExpress序列分析软件对结果进行拼接。序列拼接结果显示地面对照菌株S7-D7其18SrDNA序列如SEQ ID No.1所示。所述灵芝菌株S7-T7序列为SEQ ID No.2 

18SrDNA二级结构是在菌株18SrDNA一级结构基础上用最小自由能（energy）算法或比较序列分析方法预测的。常用的计算自由能的方法有热力学微扰法及热力学微积分法等。本发明利用MEGA 4.0分析软件，对18SrDNA进行核苷酸差异分析，18SrDNA核苷酸差异结果见表3，显示所述灵芝菌株S7-T7与地面对照菌株S7-D7相比，其序列有21个位点差异。

表3 18SrDNA核苷酸差异 

本发明利用RNA structure 4.6和RnaViz2.0分析软件对18SrDNA二级结构可变区进行分析，比较所述灵芝菌株与地面对照菌株二级结构可变区中茎的长度、环的数目和类型、茎的碱基对、以及环内部碱基是否有不同，以此来判定菌株的变异程度。

对两个菌株18SrDNA二级结构的9个可变区进行分析其energy值见表4，其中A为地面对照菌株，B为本发明所述灵芝菌株。可变区（V1-V9）模拟结构见图7-图15（A：S7-D7；B：S7-T7），结果显示V7，V8和V9区存在差异，3个差异可变区中V8和V9环内部碱基有所不同，V7出现环的数目和类型的变化。 

表4  18SrDNA二级结构的9个可变区energy值 

五、本发明所述灵芝菌株与地面对照菌株发酵后灵芝多糖含量比较：

1、胞外多糖提取和测定方法 

培养后的发酵液，12000 rpm离心10 min，减压浓缩至小体积，加3倍体积的95%乙醇，冰箱静置12 h，弃取上层清液．沉淀用热水溶解，Sevag法除蛋白，水浴上挥去有机相，再用10%H₂O₂脱色，浓缩至小体积，加3倍体积95%的乙醇沉淀，静置12 h，沉淀再用热水溶解，定容至100 mL，苯酚-硫酸法测定多糖含量。 

苯酚-硫酸法葡萄糖标准溶液的测定：精确称取105℃干燥恒重的葡萄糖200mg，置于100mL容量瓶中，定容，摇匀。取1mL溶液于50ml容量瓶中定容，摇匀(含葡萄糖40mg／L)，备用。分别吸取葡萄糖标准溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8mL，用蒸馏水补充至2.0mL，加入6%的苯酚溶液1ml，静止10min，摇匀，室温下放置20min。于490nm处测定吸光度值(以2.0ml蒸馏水作为空白)，得到回归方程为：A=0.0089C+0.0117，r =0.995，其中：A为吸光值，C为葡萄糖浓度。 

2、胞内多糖提取和测定方法 

将培养后收集的湿菌体干燥后称重，取1g菌丝体磨成粉末，加入7倍体积的蒸馏水，放在100℃水浴锅上热水回流提取1 h，然后冷却，12000 rpm，离心10 min，倒出清液．残渣内继续加入7倍体积蒸馏水提取1 h，重复3次．最后将所得清液合并，弃去残渣。将清液浓缩至小体积，再加人95%乙醇使溶液终浓度达到65%～70%，冰箱静置12 h，醇沉，弃去上层清液。沉淀用热水溶解，再用苯酚-硫酸法测定多糖含量。

3、灵芝多糖含量的比较 

分别接种地面对照菌株S7-D7和所述灵芝菌株S7-T7于PDA液体培养基中，摇瓶培养3d，10%转接发酵培养基(蛋白胨2%、蔗糖2%、KH₂PO₄ 0.1%、MgSO₄ 7H₂O 0.05%、VB₁ 0.005%)中，25℃，160 rpm摇床培养5 d，分别收集菌体和培养上清，进行胞内和胞外多糖的提取、测定，多糖提取以及测定均平行试验3次，计算平均值，测定结果如表5所示。

  

表5 地面对照菌株与所述灵芝菌株发酵后灵芝多糖含量的比较

结果显示，与S7-D7相比，本发明所述灵芝菌株S7-T7每升发酵液中胞外多糖平均提高了21%，胞内多糖平均提高了38%。

六、本发明所述灵芝菌株工业特征稳定性的研究： 

将所述灵芝菌株S7-T7在PDA固体培养基中进行30代的传代培养，每10代按照实施例5中所示的方法进行发酵，测定菌体量和多糖含量。每批测定重复3次，计算平均值，其间每批以地面对照菌株S7-D7作为对照，实验结果如表6所示，结果显示经过30次传代，所述灵芝菌株S7-T7的工业特性无变化。

表6 所述灵芝菌株工业特征稳定性的研究 

七、本发明所述灵芝菌株遗传稳定性的研究：

1、18SrDNA测序研究基因组的稳定性：

将所述灵芝菌株S7-T7在PDA固体培养基中进行30代的传代培养，分别提取第1代和30代的菌株基因组，测定18SrDNA序列，测定结果进行序列比对，结果与所述灵芝菌株S7-T7所示完全一致，说明经30次传代所述灵芝菌株S7-T7的基因是稳定的。

2、蛋白电泳研究所述灵芝菌株遗传稳定性： 

将地面对照菌株S7-D7，所述的灵芝菌株S7-T7的第1代以及第30代接种于PDA液体培养基中，培养5 d后收集菌体，液氮磨碎后加入无菌水，置-20℃冷冻60 min，4℃融化后再次进行研磨。12000 rpm，4℃离心20 min，12% SDS-PAGE检测，结果图15所示。发现与地面对照菌株S7-D7相比在大约66.4KD处有条带缺失，且经30代传代培养，电泳条带无变化，说明所述灵芝菌株S7-T7具有遗传稳定性。

八、本发明所述灵芝菌株胶囊制剂制备工艺： 

将灵芝菌株S7-T7于PDA液体培养基中，摇瓶培养3d，然后将10%转接发酵培养基中(蛋白胨2%、蔗糖2%、KH₂PO₄ 0.1%、MgSO₄.7H₂O 0.05%、VB₁ 0.005%、水余量)，25℃温度条件下在发酵罐中培养7～8 d，发酵液4000 rpm离心15min，收集菌丝体，纯化水洗涤菌丝体2次。洗涤后的菌丝体60℃烘干，将干菌体粉碎后过80目筛，加入1.0%硬脂酸镁、1.0%卡拉胶，混合均匀后按0.5g/粒装入胶囊，制成胶囊制剂。

九、本发明所述灵芝菌株胶囊对小鼠免疫力的影响： 

取小鼠40只，雌雄各半，随机分成4组：空白对照组、本发明所述灵芝菌株胶囊高剂量组（480mg/kg/d）、中剂量组（240mg/kg/d）、低剂量组（120mg/kg/d），每组12只。每天灌胃给药1次，连续给药30天后，观察小鼠的淋巴细胞转化、抗体细胞生成和腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力的变化，结果见表7。 

表7  本发明所述灵芝菌株胶囊对小鼠细胞免疫力的影响 

结果显示，灌胃给予小鼠不同剂量本发明所述胶囊30天，各剂量组小鼠的淋巴细胞转化、抗体细胞生成和腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力均高于空白对照组。高剂量组的小鼠淋巴细胞转化能力和抗体生成细胞数高于空白对照组，差异具有显著性，而高、中剂量组腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数也与空白对照组具有显著性差异。表明本胶囊具有促进小鼠淋巴细胞增殖、转化，促进小鼠抗体生成细胞增殖和促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能的作用，可见本发明所述胶囊具有增强免疫力的能力。

十、本发明所述灵芝菌株胶囊抗氧化功能研究： 

将100例人群随机分为对照组和试验组，每组50人，试验期间两组人原生活、饮食规律不变。对照服用安慰剂，试验组服用本发明所述灵芝菌株胶囊每日2次，每次2粒，连续服用3个月后，比较两组人群血清过氧化脂质（MDA）含量变化和血清谷胱甘肽过氧化物酶活性（GSH-Px）变化，结果见表8。

表8血清过氧化脂质含量和谷胱甘肽过氧化物酶活性变化 

结果显示，与对照组相比，试验组连续服用本发明所述灵芝菌株胶囊3个月后，血清过氧化脂质含量降低，降低率为42.88%；谷胱甘肽过氧化物酶活性升高，升高率为7.11%，并且均与对照组具有显著性差异。可见本发明所述灵芝菌株胶囊具有抗氧化功能作用。

综上知： 

与地面对照菌株相比，本发明所述灵芝菌株连续三天菌体生长速度平均提高了19%，7天后菌体干重提高了14%。

光学显微镜和电子扫描显微镜观察发现本发明所述的灵芝菌株与地面对照菌株S7-D7在形态有明显差异，地面对照菌株S7-D7菌丝生长较细，表面褶皱，菌丝着色不清晰。而本发明所述灵芝菌株菌丝生长旺盛，呈树枝状分布，表面光滑，并且结晶紫染色着色清晰。 

本发明所述灵芝菌株与地面对照菌株在PDA平板生长，均表现菌丝生长旺盛，菌丝体疏松，菌落成粉状，菌落正面呈白色背面淡黄色，菌丝从中心向四周放射状生长，菌落形态不规则，但本发明所述的灵芝菌株菌落比地面对照菌株菌落厚，且菌落背面颜色较浅。 

本发明所述灵芝菌株耐酸碱特性与地面对照菌株相似，在pH4-7之间生长良好，但耐盐性有所不同，所述的灵芝菌株在NaCl浓度低于6%时生长良好。 

本发明所述灵芝菌株18S rDNA序列分析显示，与地面对照菌株相比其序列有21个位点差异，二级结构的可变区分析发现V7，V8和V9区环的数目和环内部碱基与地面对照菌株存在差异。 

本发明所述灵芝菌株多糖含量较地面对照菌株显著提高，每升发酵液胞外灵芝多糖提高了21%，胞内灵芝多糖提高了38%。 

本发明所述灵芝菌株经菌株稳定性研究显示，经过30次传代工业特性无变化，18SrDNA序列测定和蛋白电泳研究显示具有遗传稳定性，可用于大规模生产。 

本发明还提供所述灵芝菌株的胶囊剂，其制备方法为：所述灵芝菌株在发酵罐中培养7～8 d，发酵液离心，收集菌丝体，纯化水洗涤，烘干，粉碎后过80目筛，加入硬脂酸镁和卡拉胶，装入胶囊，制成胶囊制剂。 

本发明通过增强免疫功能和抗氧化的实验发现，灌胃给予小鼠不同剂量本发明所述胶囊30天，各剂量组小鼠的淋巴细胞转化、抗体细胞生成和腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力均高于空白对照组，且具有显著性差异；服用本发明所述灵芝菌株胶囊3个月后，血清过氧化脂质含量降低，降低率为42.88%；谷胱甘肽过氧化物酶活性升高，升高率为7.11%，并且均与对照组具有显著性差异。说明本发明所述灵芝菌株胶囊具有增强免疫力和抗氧化的能力，因此本发明可应用于制备增强免疫力和抗氧化的药物和保健品。 

本发明的内容不限于实施例所列举，本领域普通技术人员通过阅读本发明说明书而对本发明技术方案采取的任何等效的变换，均为本发明的权利要求所涵盖。 

  

                         SEQUENCE LISTING

 

<110>  神舟太空产品高科技成果推广中心集团有限公司

 <120>  太空诱变高效灵芝菌、其应用及其胶囊制剂的制备方法

 <130>  2013-4

 <160>  2    

 <170>  PatentIn version 3.3

 <210>  1

<211>  1921

<212>  DNA

<213>  灵芝菌（Ganoderma lucidum lucidum）

 

<400>  1

gttgactcct ataggggcga ttgggccctc tagatgcatg ctcgagcggc cgccagtgtg     60

 

atggatatct gcagaattgc ccttgtagtc atatgcttgt ctcaaagatt aagccatgca    120

 

tgtctaagta taaacaagtt tgtactgtga aactgcgaat ggctcattaa atcagttata    180

 

gtttatttga tggtaccttg ctacatggat aactgtggta attctagagc taatacatgc    240

 

aatcaagccc cgacttccgg gaggggtgta tttattagat aaaaaaccaa cgcggttcgc    300

 

cgctccattg gtgattcata ataacttctc gaatcgcatg gccttgcgcc ggcgatgctt    360

 

cattcaaata tctgccctat caactttcga tggtaggata gaggcctacc atggtttcaa    420

 

cgggtaacgg ggaataaggg ttcgattccg gagagggagc ctgagaaacg gctaccacat    480

 

ccaaggaagg cagcaggcgc gcaaattacc caatcccgac acggggaggt agtggcaata    540

 

aataacaata tggggctctt tcgggtctca taattggaat gagtacaatt taaatctctt    600

 

aacgaggaac aattggaggg caagtctggt gccagcagcc gcggtaattc cagcacgctc    660

 

atagcgtata ttaaagttgt tgcagttaaa aagctcgtag ttgaacttca gacctggccg    720

 

ggcggtctgc ctaacggtat gtactgtctg gctgggtctt acctcttggt gagccggcat    780

 

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aagcaggcct atgcctgaat acattagcat ggaataataa aataggacgt gcggttctat    900

 

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gaaagggcaa ttccagcaca ctggcggccg ttactagtgg atccgagctc gtatcagctg   1920

 

g                                                                   1921

 

 

<210>  2

<211>  1919

<212>  DNA

<213>  灵芝菌（Ganoderma lucidum lucidum）

 

<400>  2

ggagactcgt atagggcgat tgggccctct agatgcatgc tcgagcggcc gccagtgtga     60

 

tggatatctg cagaattgcc cttgtagtca tatgcttgtc tcaaagatta agccatgcat    120

 

gtctaagtat aaacaagttt gtactgtgaa actgcgaatg gctcattaaa tcagttatag    180

 

tttatttgat ggtaccttgc tacatggata actgtggtaa ttctagagct aatacatgca    240

 

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gggtaacggg gaataagggt tcgattccgg agagggagcc tgagaaacgg ctaccacatc    480

 

caaggaaggc agcaggcgcg caaattaccc aatcccgaca cggggaggta gtgacaataa    540

 

ataacaatat ggggctcttt cgggtctcat aattggaatg agtacaattt aaatctctta    600

 

acgaggaaca attggagggc aagtctggtg ccagcagccg cggtagtacc agctctcata    660

 

gcgtatatta aagttgttgc agttaaaaag ctcgtagttg aacttcagac ctggccgggc    720

 

ggtctgccta acggtatgta ctgtctggct gggtcttacc tcttggtgag ccggcatgcc    780

 

cttcactggg tgtgtcgggg aaccaggact tttaccttga gaaaattaga gtgttcaaag    840

 

caggcctatg cctgaataca ttagcatgga ataataaaat aggacgtgcg gttctatttt    900

 

gttggtttct agagtcgccg taatgattaa tagggatagt tgggggcatt agtattcagt    960

 

tgctagaggt gaaattcttg gatttactga agactaacta ctgcgaaagc atttgccaag   1020

 

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tgattttatg ggtggtggtg catggccgtt cttagttggt ggagtgattt gtctggttaa   1380

 

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ggcttcttag agggactgtc tgcgtctagc agacggaagt ttgaggcaat aacaggtctg   1500

 

tgatgccctt agatgttctg ggccgcacgc gcgctacact gacagagcca gcgagttatt   1560

 

ttccttggcc ggaaggtctg ggtaatcttg tgaaactctg tcgtgctggg gatagagcat   1620

 

tgcaattatt gctcttcaac gaggaattcc tagtaagcgt gagtcatcag ctcgcgttga   1680

 

ttacgtctct gccctttgta cacaccgccc gtcgctacta ccgattgaat ggcttagtga   1740

 

ggtcttggga attggcttcg gggagccggc aacggcaccc tgtcgctgaa aacttgatca   1800

 

aacttggtca tttagaggaa gtaaaagtcg taacaaggtt tccgtaggtg aacctgcgga   1860

 

aagggcaatt ccagcacact ggcggccgtt actagtggat ccgagctcgt agcaagccg    1919