一种添加中药提取液的金耳深层发酵方法

摘要

本发明属生物工程技术领域，具体涉及一种添加中药提取液的金耳深层发酵方法。将木兰科植物五味子的干燥成熟果实粉碎，水浸泡后用电炉煎熬，取药汁过滤后浓缩，加入金耳发酵基础培养基进行深层发酵，能够提高金耳菌丝体的产量。可应用于具有较高活性的新型发酵制剂生产。

说明书

技术领域

本发明涉及一种添加中药提取液的金耳深层发酵方法。属生物工程技术领域。

背景技术

金耳为担子菌纲，银耳目，银耳科，银耳属的干燥子实体，主要分布于我国西藏云南等地，野生资源稀有，古籍文献记载用于肺热、痰多、咳嗽、气喘等症的治疗，具有较高的药用价值。研究表明，金耳深层发酵液中含有人体必需的氨基酸，并且有钾、钠、钙、镁、铁、锌等矿质元素。金耳以液体发酵进行生产时，在培养基中添加适量的中药提取液，能促进其菌丝体的生长。

发明内容

本发明的目的是提供一种添加中药提取液的金耳深层发酵方法。

本发明的技术方案为：将金耳斜面保藏菌种活化，接种至摇瓶种子液体培养基中培养，待菌丝体分散后将培养好的种子液接入添加了五味子水提液的摇瓶发酵液体培养基培养。发酵结束后，离心获得湿菌丝体，烘干至恒重后称重。比较中药材添加前后菌丝体产量的差异(结果见表1)。

本发明提出的添加中药提取液的金耳深层发酵的具体操作步骤如下：

(1)菌种培养

出发菌种为本实验室金耳斜面保藏菌种；

①摇瓶种子培养

摇瓶种子培养基：PDA1L加磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，牛肉膏2g，蛋白胨1g，VB₁10-20mg，pH6.0；

培养方法：从斜面菌种中取3～4块黄豆大小相同的菌块，接种于摇瓶种子培养基中，250mL三角瓶装培养基100mL于28℃，220r/min，振荡培养10-14d；摇瓶中预先装有经过消毒灭菌的玻璃珠，用于打散菌丝体；

②摇瓶发酵培养

发酵培养基：葡萄糖4g/100mL、酵母粉1g/100mL、磷酸二氢钾0.3g/100mL、硫酸镁0.15g/100mL、VB₁1-2mg/100mL，pH6.0；

培养方法：将培养好的种子以15％的接种量接入添加了五味子水提液的摇瓶发酵培养基中28℃，220r/min，振荡培养10-14d；

(2)中药水提液的制备

称取木兰科植物五味子的干燥成熟果实30g，粉碎后加5倍量水浸泡3h，用电炉煎熬至温和的沸腾状态保持30min，离心(3000r/min)15min，上清液(药汁)待用，残渣补加适量冷水，再煮沸20min，离心取上清液(药汁)，合并药汁，浓缩至对应发酵培养基体积的1/2，用于金耳深层培养。

具体实施方式

下面的实例将具体说明本发明的操作方法，但不能作为对本发明的限定。

实例一

从斜面菌种中取3～4块黄豆大小相同的菌块，接种于摇瓶种子培养基(PDA1L加磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，牛肉膏2g，蛋白胨1g，VB₁10-20mg，pH6.0)，250mL三角瓶装培养基100mL于28℃，220r/min，振荡培养12d；将培养好的种子以15％的接种量分别接入未添加和添加了五味子水提液50mL的100mL摇瓶发酵培养基(葡萄糖4g/100mL、酵母粉1g/100mL、磷酸二氢钾0.3g/100mL、硫酸镁0.15g/100mL、VB₁1-2mg/100mL，pH6.0)，28℃，220r/min，振荡培养12d；培养结束后离心获得湿菌丝体，烘干至恒重后称重得到菌丝体产量。

表1五味子水提液对金耳菌丝体产量的影响