靶向亲合体重组蛋白的构建及其表达和纯化方法

摘要

靶向亲合体重组蛋白的构建及其表达和纯化方法，属于基因重组及生物分子材料制备技术领域。构建方法：在亲合体编码序列的基础上设计重组蛋白的核苷酸编码序列；对重组编码序列中的所有密码子按照表达宿主的密码子偏好性进行碱基优化；碱基优化后的重组基因片段由人工合成获得，再将重组片段双酶切，酶切产物纯化后连接到表达质粒上，构建重组表达质粒。表达和纯化方法：将已构建的重组质粒转化到密码子偏好对应的宿主中，加入诱导剂诱导重组亲合体的表达，验证重组蛋白是否表达；收集全部表达产物，经镍柱亲和层析初步纯化得到融合蛋白，用肠激酶酶切融合蛋白，再用凝胶柱层析进一步分离纯化，最后得到高纯度的重组亲合体。