蛤蟆油中硫酸乙酰肝素/肝素的提取与结构分析

摘要

本发明提供一种蛤蟆油中硫酸乙酰肝素/肝素的提取与结构分析方法。所述方法为先用微量的胰蛋白酶酶解蛤蟆油，再通过DEAE阴离子交换色谱柱除去蛋白等杂质，并经透析、冻干、浓缩得到蛤蟆油糖胺聚糖（OR‑GAG）。糖胺聚糖由重复的二糖单元构成，通过肝素酶Ⅰ、肝素酶Ⅱ、肝素酶Ⅲ特异性酶解OR‑GAG，再利用分子排阻色谱法，得到硫酸乙酰肝素二糖/肝素二糖（HS/HP二糖）。HS/HP二糖经2‑氨基吖啶酮（AMAC）荧光标记后，利用反相色谱柱C18柱进行质谱分析，得到蛤蟆油中各二糖组分的结构与摩尔百分比。最后，建立HS/HP区域结构模型。