一种鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF66蛋白重组杆状病毒表达载体及其制备方法

摘要

本发明提供了一种鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF66蛋白重组杆状病毒表达载体及其制备方法，其是以提取的CyHV‑2 cDNA为模板，扩增出ORF66基因，将扩增的ORF66基因连接至杆状病毒载体pFastBacHTA中，构建重组杆状病毒载体pFastBac HTA‑CyHV‑ORF66，转化至大肠杆菌感受态细胞DH10Bac中，获得重组穿梭杆粒rBacmid‑CyHV‑ORF66，鉴定正确后将其转染至Sf9昆虫细胞，获得重组杆状病毒，并将重组杆状病毒进行传代扩增，将高滴度的含有CyHV‑2‑ORF66基因的杆状病毒接种到sf9昆虫细胞中进行CyHV‑2‑ORF66蛋白的真核表达。选用本发明方法构建鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF66蛋白重组杆状病毒表达载体，并利用重组杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF66蛋白，为制备鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF66蛋白特异性单抗提供了材料，为鲤疱疹病毒血清学ELISA检测方法的建立奠定了基础。