一种用于构建细菌16S rDNA全长高通量测序文库的方法

摘要

本发明涉及一种用于构建细菌16S rDNA全长高通量测序文库的方法，涉及微生物高通量测序领域。该方法首先将随机碱基组成的特异性标签序列(UMI)加在每个16S rDNA模板分子两端，经PCR扩增得到多个拷贝的两端含特定UMI的16S rDNA全长扩增子，通过随机打断并连接上测序文库的接头，经双端测序获得UMI序列和相应的16S rDNA片段序列；另外，通过环化16S rDNA全长扩增子和测序，获得同一分子两端的UMI配对信息；根据相同UMI和配对UMI信息进行reads的组装，从而增加拼接长度，最终组装得到16S rDNA全长序列信息。本发明提供的方法成本低、准确度高，适用于高通量测序平台；同时该方法通过UMI可有效排除PCR扩增偏好性、扩增错误和测序错误的影响，从而更加精确地定量样本中的细菌种群丰度。