ADAMTSl3活性測定用ELISAキッ卜の開発

摘要

ADAMTS13は，止血因子であるフォンビレブランド因子（VWF)のA2ドメィン内のTyr~1605-Met~(1606)間のぺプチド結合を特異的に切断する酵素である.この切断により新たに生じるペプチドのC末端Tyrl605を特異的に認識するモノクローナル抗体を用いて，基質の切断生成物をELISA法で直接測定する原理に基づいたADAMTS13活性測定法のキット化を行い，そのキットの基本的な性能を評価した.本キットの最小検出感度は，健常人のADAMTS13活性100%に対して，0.4%と高感度であった.また，調製したプレート内のゥエル間の均一性（変動係数（CV)=3.3%)は良好で，濃度の違う検体での同時再現性（CV=1.1?4.7%)及び日差再現性（CV =2.6?7.5%)も良好であった.希釈試験では，原点に回帰する良好な直線性が得られた.またヘモグロビンやピリルビン等の共存物質の影響は，検討した濃度範囲では認められなかった.反応はEDTA で完全に阻害された.臨床検体及び健常人検体を本キットで測定したときのADAMTS13活性は，健常人プール血槳100%に対し先天性のADAMTS13活性欠損症であるUpshaw-Schulman症候群（USS)で0.5%以下?2.7%, USS保因者群で7.7~ 85.3%,血栓性血小板減少性紫斑病（TTP)群で0.50/0以下?58.1%,健常人で54.7?：L34.4%と測定され，TTPの診断に必要な判別能を有しており，SDS-agaroseゲル電気泳動法との相関は相関係数（r) = 0.931と良好であつた.本キットは優れた性能と操作性を有していることから，TTPの診断や血小板輸血時の適否判断などにおいて有用であると考えられた.