プールした糞便検体を使用したマルチプレックスPCR法 によるサルモネラ，腸管出血性大腸菌， 赤痢菌のスクリ 一二ング法の開発

摘要

サルモネラ，腸管出血性大腸菌，赤痢菌の検便検査の 多数の検体から陽性検体をスクリーニングする方法とし て，プールした糞便検体から核酸の抽出精製ゃ増菌培養を経ないマルチプレックスPCRでこれらの菌を検出す る方法が検討された.1) マルチプレックスPCR法を用いることにより， 100個の検体をプールした中から，1個の7Xl0~4cfu/g のサルモネラ陽性検体を含む場合，1個の7xl0~4cfu/g の腸管出血性大腸菌0157陽性検体を含む場合，1個の 4X10~4 cfu/gの赤痢菌陽性検体を含む場合を検出するこ とができた.培養法での検出限界はサルモネラおよび腸 管出血性大腸菌0157で7X10~4 cfu/g,赤痢菌で4X10~5 cfu/gであったので，100個以下の検体をプールした場 合，マルチプレックスPCRで検出すれば培養法と同等 以上の感度で検出でき，スクリーニング法として有効な 感度であることが示された.2) 他方，マルチプレックスPCRにより死菌が検出 される可能性を検証するため，ゲノムDNAを糞便に添 加したモデル試料を作製し検出を試みた.その結果，糞 便中に添加したゲノムDNAはマルチプレックスPCRで は検出されず，ゲノムDNAが糞便中に溶出した死菌が 検出される可能性は低いと思われた.3) 実際の検便検体2，000検体を50検体ずつブールし てマルチプレツクスPCRで検出しスクリ 一二ングを 行った.スクリーニングを行わず培養法で検査を行った 場合との相関は，陽性一致率100%，陰性一致率99.95% であった.以上の結果より，本研究で検討された方法は，検便 検査の多数の検体から陽性検体をスクリーニングする方 法として有効であると思われた.