Purification of Dehydrin Protein from Buckwheat Seed (Fagopyrum esculentum cv. Kitawase)

摘要

デハイドリンは、乾燥や低温によって誘導される植 物ストレスタンパク質であり、種子にも広く分布する ことが知られている。前報において、デハイドリン固 有のモチーフ配列に対する抗体を用いて、ソバ種子な らびに食品中にデハイドリン様タンパク質が存在する ことを示した。本研究では日本産ソバ種子(品種キタ ワセ)から、硫酸アンモニウム分画、イオン交換クロマトグラフィーおよびゲル濾過によって、20kDaデハ イドリンを単離精製した。トリプシン消化物のアミノ 酸配列分析の結果、デハイドリンのC末端側モチーフ 配列と、デハイドリン固有のリジンモチーフ配列を有 することが確認された。ペプシン消化性を検討した結 果、16kDaぺプシン消化耐性ポリぺプチドの生成が見 られた。%The presence of a dehydrin-like protein in buckwheat seeds had been revealed using an antibody against a Lys-rich conservative motif sequence for dehydrin. In this study, the dehydrin protein was purified from a Japanese variety of buckwheat seed (Fagopyrum esculentum cv. Kitawase) through four purification steps: heat treatment, addition of 10-45% saturated ammonium sulfate, ion-exchange chromatography on a HiTrap Q Fast Flow column, and gel filtration on a HiPrep Sephacryl S-200 column. Results of peptide mapping with trypsin indicated that the purified protein contained conservative motif sequences and Gly-rich sequences, which are characteristic to dehydrin proteins. The results of the pepsin digestion experiment showed that the purified dehydrin was promptly cleaved by simulated gastric fluid, and that a 16-kDa polypeptide that is highly resistant to pepsin digestion was produced.