Desarrollo analítico por cromatografía líquida de alta resolución en fase reversa para la determinación simultánea de clorhidrato de propranolol, hidroclorotiazida y clorotiazida. Aplicación de dise?o factorial para la robustez del método

摘要

Un método por cromatografía líquida de alta resolución en fase reversa ha sido desarrollado para la determinación simultánea del clorhidrato de propranolol y la hidroclorotiazida, con detección de clorotiazida como impureza de síntesis. La separación se realizó en una columna X-BridgeTM C18 250 mm x 4,6 mm x 5 μm a 35 oC. La fase móvil, con caudal de 1,0 mL min-1, quedó constituida por la solución A: solución amortiguadora de 0,1 M KH2PO4 y 0,05 M de 1-heptano sulfonato de sodio, a un pH 3,0 y un solvente B: acetonitrilo, aplicando un sistema de gradiente. La detección se realizó en un sistema de arreglo de diodos a 270 nm. La respuesta lineal se logró en un rango de concentración de 2,2 - 53,0 μg mL-1 para el clorhidrato de propranolol, de 1,4 - 34,0 μg mL-1 para la hidroclorotiazida y de 0,1 - 3,5 μg mL-1 para la clorotiazida. Un dise?o factorial completo de 8 experimentos se aplicó para evaluar el nivel de influencia del pH, la [KH2PO4] y la [1-HSS] de la disolución amortiguadora, en la respuesta termodinámica del sistema para cada uno de los analitos en estudio. Un dise?o factorial fraccionado de 8 experimentos fue empleado para estudiar la respuesta cinética del sistema con respecto a factores como: el solvente (% B), la temperatura, el flujo y el pH. Ambos dise?os estadísticos mostraron resultados válidos sobre el margen razonable de fluctuación para cada factor y su interacción, que permitieron garantizar la robustez del método desarrollado con un 95% de confianza.