Trichoderma reeseiにおけるセルラーゼ誘導•生産メカニズムの解明: β-グルコシダーゼの役割について

摘要

セルラーゼの高生産菌であるTrichoderma reeseiのセルラーゼ誘導物質の1つにソホロースがある.ソホロースは，本菌のβ-ダルコシダーゼ(BGL)の糖転移反応によって合成されることが示唆されている.T. reeseiのゲノムには,10種類のBGL遺伝子が存在することが示唆されており，これらの異種発現系を大腸菌と麹菌で構築した.10種類の組換え酵素のうち9種類がBGL活性を示し，その酵素化学的性質を明らかにした.セロビオースを基質として，糖転移能力を評価したところ，Cel1A, Cel3A, Cel3BおよびCel3Eに転移生成物が認められ，特にCel1Aは約10%の高い変換率でソホロースを合成した.一方，T. reeseiにおけるCel1A遺伝子の破壊は，セルラーゼおよびセルラーゼの正の転写因子の発現時期を遅らせることから，Cel1Aはセルラーゼの誘導に重要な役割を果たしていることが明らかとなった.一方，Cel1Aの活性部位近傍のアミノ酸2残基に変異を導入し，Glc感受性と熟安定性を改善することに成功した.また，同時に比活性の増加(2.4倍)とGlc活性化(50 mM Glc存在時に1.8倍)を獲得させることに成功した.この変異型Cel1Aを利用することにより，セルラーゼ生産量を増大させたT. reese!の作出が期待される.