三七和PDTC对创伤性脑损伤大鼠自噬机制的干预作用

摘要

目的 探讨三七和吡咯醛二硫氨基甲酸酯(PDTC)对创伤性脑损伤(TBI)大鼠自噬机制的干预作用.方法 将36只SD成年雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组(SHAM组)、模型组(M组)、三七组(PN组)、NF-κB抑制剂PDTC组(PDCT组)、三七+PDTC组(PN+PDCT组)、三七+氯喹组(PN+CHQ组),每组6只.SHAM组大鼠进行手术及麻醉,但无冲击损伤过程,其余各组均采用改良的Feeney自由落体模型制备法建立TBI模型.6组大鼠术前3 d、术后3 d予0.9％氯化钠注射液1 ml每天分2次灌胃,术前1 d、术后3 d予0.9％氯化钠注射液1 ml腹腔注射,1次/d.PN组灌胃时加入三七粉2.5 g/kg.PDTC组腹腔注射时加入PDTC 120 mg/kg.PN+PDTC组灌胃时加入三七粉2.5 g/kg,腹腔注射时加入PDTC 120 mg/kg.PN+CHQ组灌胃时加入三七粉2.5 g/kg,腹腔注射时加入氯喹60 mg/kg.术后第4天乙醚麻醉处死,取大脑组织进行检测.观察各组大鼠造模后12、24、72 h神经功能缺陷评分,大鼠脑组织HE染色、Nissl染色观察脑组织损伤情况,透射电镜观察细胞自噬体,Western blot检测各组大鼠脑组织泛素结合蛋白p62、Beclin1和微管相关蛋白轻链3(LC3)表达.结果 M组大鼠各时间点神经功能缺陷评分明显下降,HE染色和Nissl染色脑组织损伤明显,透射电镜下脑细胞中可见大量自噬体,自噬蛋白明显升高(P<0.05或0.01).PN组、PDTC组、PN+PDTC组、PN+CHQ组均能改善72 h神经功能缺陷评分,同时HE染色和Nissl染色脑组织损伤较M组改善,透射电镜下脑细胞中可见自噬体较M组减少,p62、Beclin1和LC3较M组均明显下降(P<0.05或0.01).PN组、PDTC组、PN+PDTC组、PN+CHQ组组间比较差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 TBI大鼠存在自噬并伴有脑功能损伤,三七以及PDTC均能干预TBI大鼠自噬过程,促进脑功能恢复,三七与PDTC以及三七与氯喹并无明显协同作用.