免疫复合物AIgG刺激小鼠肾小球系膜细胞增殖过程中Hint2基因的表达和作用研究

摘要

目的观察免疫复合物AIgG刺激小鼠肾小球系膜细胞(GMCs)后不同增殖状态下Hint2-mRNA的表达量变化情况及Hint2蛋白过表达对免疫复合物AIgG刺激的小鼠GMCs不同增殖状态下的影响.方法 (1)采用CCK-8法检测免疫复合物AIgG刺激体外培养小鼠GMCs增殖的量-效和时-效关系.(2)采用SYBR Green Real-time PCR技术检测不同浓度的AIgG(0、1000、2000μg/ml)刺激小鼠GMCs增殖后的Hint2-mRNA表达量的变化情况.(3)依次构建Hint2-Pmd19克隆载体及Hint2-MigR1表达载体,采用磷酸钙共沉淀法将MigR1和Hint2-MigR1质粒分别成功转染小鼠GMCs.(4)将MigR1和Hint2-MigR1质粒分别转染小鼠GMCs后,并用流式细胞术将两者转染效率调整至一致,分别予不同浓度的AIgG(0、1000、2000μg/ml)刺激小鼠GMCs 36h后,再用流式细胞术检测两者转染细胞绿色荧光蛋白(GFP)表达的阳性率.结果 ( 1)AIgG对体外培养小鼠GMCs具有明显的促增殖作用,以2 000μg/ml组作用最强.(2)Hint2-mRNA的表达量与小鼠GMCs的增殖状态呈负相关.(3)MigR1和Hint2-Mig刚质粒通过磷酸钙共沉淀法均能成功转染小鼠GMCs,于荧光倒置显微镜下可见GFP阳性的细胞,FCM检测两者转染效率分别为38.22%和20 44%.(4)FCM检测不同浓度的AIgG刺激转染小鼠GMCs中GFP的阳性率:Hint2蛋白过表达组和对照组水平的差异均无统计学意义.结论 Hint2-mRNA的表达量与小鼠GMCs的增殖状态呈负相关;单独Hint2蛋白过表达对小鼠GMCs的增殖状态未见明显影响.