穗花杉双黄酮对脂多糖致大鼠急性肺损伤的保护作用及机制研究

摘要

目的 探讨穗花杉双黄酮对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及机制.方法 将60只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、阳性对照组和穗花杉双黄酮组(简称穗花杉组),每组15只.模型组、阳性对照组和穗花杉组大鼠均通过气道滴注3.0mg/kg LPS 100μL,对照组大鼠气道滴注等体积的生理盐水,6h后阳性对照组大鼠腹腔注射2.5mg/kg地塞米松100μL,穗花杉组大鼠腹腔注射2.5mg/kg穗花杉双黄酮100μL,对照组和模型组注射等体积生理盐水.48h后称重测定大鼠肺组织湿/干重比;苏木精-伊红染色(HE)观察各组大鼠肺组织病理;ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;RT-PCR检测肺组织miR-140-5p表达;蛋白印迹法(WB)检测肺组织Toll样受体4(TLR4)、核因子活化B细胞κ轻链增强子(NF-κB)蛋白表达水平.利用LPS刺激肺上皮细胞A549,加入穗花杉双黄酮RT-PCR检测miR-140-5P的表达,加入miR-140-5P抑制剂、mimic-NC干预,RT-PCR检测TLR4、NF-κB表达.结果 穗花杉组大鼠肺组织湿/干重比明显低于模型组[(4.77±0.19)比(5.84±0.27),P<0.05];HE染色结果显示,穗花杉组大鼠肺组织结构较ALI模型组大鼠炎症细胞明显减少,肺泡间隔明显变薄;ELISA结果显示,穗花杉组大鼠血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显低于模型组[TNF-α:(395.16±41.23)pg/mg比(846.23±29.26)pg/mg;IL-6:(315.26±30.25)pg/mg比(876.54±45.23)pg/mg;IL-1β:(650.16±29.46)pg/mg比(1056.26±54.16)pg/mg,P均<0.05];WB结果显示,穗花杉组大鼠肺组织TLR4、NF-κB表达量明显低于模型组;RT-PCR结果显示,穗花杉组大鼠肺组织和人肺上皮细胞miR-140-5P表达分别高于模型组和刺激组[(0.85±0.13)比(0.34±0.08);(0.81±0.15)比(0.27±0.14),P均<0.05];miR-140-5P mimic能明显抑制TLR4、NF-κB表达[TLR4:(0.95±0.12)比(2.31±0.08);NF-κB:(0.97±0.13)比(2.45±0.06),P均<0.05].结论 穗花杉双黄酮对LPS诱导的大鼠ALI具有保护作用,其机制可能与促进miR-140-5p mimic表达,抑制ALI炎症过程关键蛋白TLR4、NF-κB表达以及其下游炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β水平有关.