用消减杂交技术克隆人成骨样细胞机械牵张力敏感基因的研究

摘要

目的对人成骨样细胞机械牵张力敏感基因进行克隆研究.方法对人成骨样细胞Saos-2进行二维方向上的加载,变形幅度为12%,牵拉频率为6周期/分钟,加载12 h后分别提取牵张力作用后Saos-2细胞及未作处理的正常Saos-2对照细胞的mRNA,反转录制备cDNA,将cDNA进行消减杂交,构建加载细胞与未加载细胞的差异表达基因的扣除cDNA文库,克隆后进行序列测定.结果克隆到的基因片段中,功能已知基因片段15个,功能未知基因片段2个,其中牵张力敏感基因1(SSG1)位于9号染色体上,功能未知;牵张力敏感基因2(SSG2)位于18号染色体上,与转录因子2,4高度同源.结论用消减杂交技术可以对人成骨细胞样机械牵张力敏感基因进行有效的克隆研究.