小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子真核表达载体pSecTag2B-msBlyS的构建

摘要

目的克隆BAL B/c小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子(msBlyS)的cDNA片段并测序分析,为研究msBlyS诱导的抗肿瘤作用提供目的基因.方法采用反转录聚合酶联反应(RT-PCR)法从BAL B/c小鼠脾脏组织总RNA中获得566 bp的msBlyS基因cDNA.通过TA克隆测序无误,再将其定向连接到pSecTag2B真核表达载体上,转化E.coli XL1-blue.限制性内切酶筛选出阳性克隆pSecTag2B-msBlyS,末端终止法完成msBlyS cDNA的序列测定.结果测得的msBlyS cDNA序列与基因文库中报道序列完全相同,插入相位正确,未改变目的基因的阅读框架.结论成功克隆了小鼠可溶性B淋巴细胞刺激因子基因,为研究其诱导的抗肿瘤作用奠定了基础.