不同亚型Akt/PI3K在肿瘤细胞凋亡中的作用

摘要

目的研究磷酸酰肌醇-3-激酶(PI3K)通过不同亚型的Akt调节细胞凋亡.方法各种肿瘤细胞种植在96孔或6孔细胞培养皿中,采用免疫沉淀加酶联法测定Akt磷酸化状态及其酶活性.通过免疫沉淀加Werstern印迹法,测定Akt活性.用细胞凋亡实验定量分析Akt抑制剂诱导细胞死亡的效应.结果①各类Akt亚型抑制剂可阻断Akt1或Akt2蛋白序列上的第308位点苏氨酸(pAkt308)和第473位点丝氨酸(pAkt473)磷酸化,并表现出相应的Akt亚型抑制特异性;②抑制磷酸化Akt可明显降低其激活底物GSK3β的能力;③多种检测的肿瘤细胞系表现出PI3K通过Akt调节细胞凋亡程序可能主要和两种Akt亚型(Akt1,Akt2)相关.结论PI3K/Akt信号传导途径涉及细胞凋亡,主要通过PI3K下游基因Akt参与调节,Akt1和Akt2亚型是主要调节因子,只有同时抑制Akt1和Akt2才能启动细胞凋亡程序.