长春新碱耐药结肠癌细胞株HCT-8/VCR的建立及其耐药机制的初步研究

摘要

目的: 建立长春新碱(vincristine,VCR)耐药结肠癌细胞株,初步探讨该细胞株的多药耐药机制.方法: 通过逐步增加药物浓度的方法建立VCR耐药结肠癌细胞株.细胞毒实验采用MTT法,细胞周期测定采用碘化丙啶荧光染色法,P-糖蛋白(P-gp)测定采用FCM方法,细胞内VCR浓度测定采用高效液相色谱(higb performance liquid chromatography,HPLC)法,多药耐药相关基因(MDR1、MRP1)的表达采用RT-PCR方法检测.结果: HCT-8/VCR的细胞倍增时间和细胞周期与敏感细胞株HCT-8相似.HCT-8/VCR对VCR的耐药倍数分别为19.7,对其他4种化疗药物也表现出不同的抗性.HCT-8/VCR细胞内VCR和DOX的累积量降低(P<0.01),且其细胞表面P-gP表达增加(P<0.01),MDR1 mRNA增加,但MRP1 mRNA没有变化.结论: 建立了对VCR产生耐药的结肠癌细胞株HCT-8/VCR,其耐药机制可能为P-gP过量表达导致细胞外排活性增强,预期该细胞株可用于以P-gP为靶点的多药耐药逆转剂的研究.