PNP/MeP-dR系统对肝癌细胞杀伤作用的实验研究

摘要

目的:探讨新型嘌呤核苷磷酸化酶/6-甲基嘌呤-2'-脱氧核糖核苷(PNP/MeP-dR)自杀基因系统对肝癌细胞的杀伤作用.方法:构建PNP基因真核表达载体pcDNA3.0/PNP,脂质体介导法将其导入HepG2细胞,利用G418筛选获得稳定转染PNP基因的细胞株HepG2/PNP.采用台盼蓝拒染法测绘细胞生长曲线,MTT法和FCM检测细胞对MeP-dR的敏感性及旁观者效应,HPLC检测PNP酶活性.结果:HepG2/PNP细胞对MeP-dR十分敏感,作用4 d后MeP-dR对HepG2/PNP的IC50为4.5 μmol/L,而100 μmol/L的MeP-dR即可最大限度地杀死HepG2/PNP细胞.100 μmol/LMeP-dR作用8 d后,混合细胞中HepG2/PNP比倒仅占5%即可导致所有细胞死亡.HPLC结果显示,PNP基因产物能够将MeP-dR转化为6-MP.结论:PNP/MeP dR系统对肝癌细胞的杀瘤效果明显优于传统的自杀基因系统.本研究为该系统应用于肝癌体内治疗打下基础.