人参皂苷Rg3通过活性氧/c-Jun氨基末端激酶对骨肉瘤细胞凋亡与自噬影响

摘要

目的探讨人参皂苷Rg3(G-Rg3)通过活性氧(ROS)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)对骨肉瘤细胞凋亡和自噬的影响及可能机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞(MG63),用不同剂量G-Rg3(0、40、80、160μmol/L)进行干预。为分析G-Rg3的作用机制,将细胞分为对照(Con)组、G-Rg3组(160μmol/L G-Rg3干预)、G-Rg3+N-乙酰半胱氨酸(NAC)组(160μmol/L G-Rg3和ROS清除剂NAC进行干预)、G-Rg3+SP600125组(160μmol/L G-Rg3和JNK特异性抑制剂SP600125进行干预)。采用流式细胞术检测细胞凋亡和ROS水平;激光共聚焦显微镜观察细胞自噬;蛋白免疫印迹法检测凋亡蛋白(BAX、Bcl-2)、自噬蛋白(Beclin1和P62)和磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达水平。结果不同浓度G-Rg3均可诱导MG63细胞发生凋亡,使BAX蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平下降,且存在剂量依赖性(P<0.05)。激光共聚焦显微镜观察到不同浓度G-Rg3均可诱导MG63细胞发生自噬,LC3 puncta数目形成增加,使Beclin1蛋白表达水平升高,P62蛋白水平下降,且存在剂量依赖性(P<0.05)。与CON组比较,G-Rg3组细胞凋亡率、LC3 puncta数目、ROS水平、p-JNK蛋白、BAX蛋白和Beclin1蛋白水平较高(P<0.05),而Bcl-2蛋白和P62蛋白表达水平较低(P<0.05)。与G-Rg3组比较,G-Rg3+NAC组和G-Rg3+SP600125组细胞凋亡率、LC3 puncta数目、p-JNK蛋白、BAX蛋白和Beclin1蛋白水平较低(P<0.05),而Bcl-2蛋白和P62蛋白表达水平较低(P<0.05)。结论G-Rg3可能通过ROS/JNK通路诱导骨肉瘤MG63细胞发生凋亡和自噬。