C-jun氨基末端激酶在大鼠脑缺血再灌注后tau蛋白异常高度磷酸化和神经细胞凋亡中的作用

摘要

第一部分大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的建立
　　 目的：应用改良的MCAO线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，并评价该模型的效果、稳定性为后继实验奠定基础。方法：将3-0尼龙线插入CCA内，并不断调整栓塞线进入的角度使其顺利进入ICA，前端到达大脑前动脉的起始部，通过阻断大脑中动脉的血供而造成大脑中动脉供血区脑缺血，栓塞线进入深度约（20±3)mm。并应用TTC染色及神经功能学评分评估大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的效果及稳定性。结果：造模成功者一般状况较差，TTC染色发现梗塞灶明显、稳定性好，变异较小。除少数动物造模死亡外，其余神经功能学评分都在1～3分之间。结论:改良的MCAO线栓模型创伤小；实验结果稳定、可重复性强，为脑缺血再灌注实验提供有力保障。
　　
　　 第二部分大鼠脑缺血再灌注后tau蛋白异常高度磷酸化
　　 目的：探讨局灶性脑缺血再灌注后大鼠皮质神经元tau蛋白磷酸化的变化，以阐明脑梗死和阿尔茨海默病间的关系。方法：制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫印迹法检测局灶性脑缺血再灌注后大鼠顶叶皮质tau蛋白在Ser199/202、Ser396、Ser404和Thr231位点磷酸化和非溶性磷酸化tau蛋白的变化。结果：脑缺血再灌注6h后皮质tau蛋白在Ser199/202、Ser396、Ser404和Thr231位点发生异常高度磷酸化，非溶性磷酸化tau蛋白显著增加。结论：脑缺血再灌注后发生阿尔茨海默病样病理变化，脑梗死可能促进阿尔茨海默病的发生、发展。
　　
　　 第三部分 JNK在大鼠脑缺血再灌注后tau蛋白异常高度磷酸化和神经细胞凋亡中的作用
　　 目的：探讨JNK在局灶性脑缺血再灌注后大鼠皮质神经元的tau蛋白过度磷酸化和bcl-2、bax的表达中的作用，以及脑缺血再灌注损伤后异常过度磷酸化的tau蛋白和bax的空间关系并检测阻断JNK的活性后对脑缺血再灌注后梗塞灶体积的影响，进一步阐明JNK在脑缺血损伤后tau蛋白磷酸化和神经细胞凋亡中的作用。方法：制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫印迹检测JNK的活性变化以及应用其特异性阻断剂SP600125阻断JNK的活性后大鼠顶叶皮质tau蛋白在Ser396和Thr231、Ser199/202、Ser404位点磷酸化的变化；免疫荧光双标法分别检测脑缺血再灌注后bax的表达和磷酸化tau蛋白的关系，应用TTC法检测SP600125对梗塞灶体积的影响。结果：脑缺血再灌注损伤后JNK的活性增加，应用SP600125阻断JNK的活性后显著抑制脑缺血再灌注后tau蛋白在Ser396和Thr231、Ser199/202、Ser404位点的磷酸化和促凋亡蛋白bax的表达，并且明显减小梗塞灶的体积。脑缺血再灌注后bax的表达与tau蛋白高度磷酸化存在显著相关性。结论：JNK在脑缺血再灌注后阿尔茨海默病样病理变化中起了重要作用，其可作为脑缺血再灌注后痴呆的一个治疗靶点。

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文摘

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论文说明：缩略语

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第一部分大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的建立

第二部分大鼠脑缺血再灌注后tau蛋白异常高度磷酸化

第三部分JNK在脑缺血再灌注后tau蛋白异常高度磷酸化和神经细胞凋亡中的作用

JNK在缺血性脑损伤中研究进展

博士期间发表论文和参与研究课题

致谢