逆转录病毒载体介导的标志基因转移研究

摘要

目的:为建立高效、安全的逆转录病毒介导的基因标记系统.方法:用脂质体方法将含有标志基因NeoR的逆转录病毒载体LXSN导入包装细胞PA317;通过与单向型包装细胞GPE86相互转导,获得高滴度的双嗜型产病毒细胞,并以其对人类白血病细胞进行基因标记.结果:脂质体转染法获得的病毒滴度约为2.0×105CFU/ml,而与GP+E86细胞转导后可提高至2.8×106CFU/ml;重组病毒转导白血病细胞(HL-60,K562,KG-1)后,聚合酶链反应(PCR)证实NeoR基因整合到靶细胞基因组,巢式PCR与补救分析均未能检测到辅助病毒.结论:"乒乓效应"可显著提高逆转录病毒滴度,而逆转录病毒介导的基因标记系统是安全的.