野葛试管苗茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生

摘要

对野葛茎尖玻璃化法超低温保存技术的研究结果表明,H号野葛茎尖较佳的保存技术体系是:继代生长30d的野葛无菌苗置于4℃冰箱炼苗5d;在无菌条件下切取含1～2个叶原基(1.5～2.5mm)的茎尖,转至含5%DMSO + 5%蔗糖的MS培养基内,置于4℃冰箱预培养1d;用60%、100% PVS2 (30%甘油 + 15%乙二醇 + 15%DMSO + 13.7%蔗糖)分别在0℃下过渡和脱水各30min,随即迅速投入液氮;保存24h后,在40℃水浴中快速化冻90s,用含41.1%蔗糖的MS培养液洗涤2次,每次停留10min;转至再生培养基(MS + 6-BA 2mg/L + NAA 1mg/L)暗培养7d,然后光下培养,再生率可达60%以上.再生苗与常温苗形态指标差异不显著.