三种粘片剂及不同烘烤温度和时间对免疫组化切片的影响

摘要

免疫组织化学染色过程中,因步骤多、微波高温修复、37℃孵育等因素,常出现脱片问题 ,造成染色的失败,浪费人工及试剂.为了解决脱片问题,同时又不使抗原或抗体受到破坏 ,我们选取了经免疫组化染色确定为强、中、弱三种反应强度的标本,分别用硌矾明胶、A PES(3-Amino Propyltriethoxy Silane)、多聚赖氨酸(Poly-L-Lysine)三种粘片剂处理切片,再将切片经37℃、50℃、6 0℃三种烘烤温度分别烤片1hr、2hr、3hr、4hr及12hr,使用同样方法及程序染色,观察切片的肉眼观、粘贴程度及抗原抗体保存情况,结果为:rn1.三种粘片剂对防脱片效果均较好,对抗原抗体均无影响,只是硌矾明胶处理的切片经复染后,切片外观着色,给人不干净的感觉;多聚赖氨酸较贵(150元/10ml),AP ES最经济实用(40元/10ml).rn2.三种烘烤温度对切片的影响:37℃时需烤片12hr以上切片才粘贴牢固,但有时也有脱片,50℃需3hr以上,60℃烤1～2hr即可.rn3.五种烘烤时间对切片的影响:37℃时,1hr、2hr、3hr、12hr均有脱片现象,时间越短,脱片越多.50℃3hr～4hr效果较好,60℃时1hr～2hr效果较好,50℃及60℃时烘烤12hr及以上,染色强度减弱,说明有抗原或抗体丢失.rn综上所述,对于常规的免疫组化染色,以用APES处理,60℃烤片1hr～2hr为最佳选择.