巨结肠同源病辅助检查、手术方式及术后石蜡切片的免疫组化染色研究

摘要

目的:
　　第一,在所选的97例HD,28例IND和42例HG中,利用统计学的手段,分别对术前辅助检查(包括AchE组化染色、直肠肛管测压)、手术方式的选择进行归纳分析,寻找其检查的阳性指标对诊断和治疗的指导意义以及不同手术方式对疾病的影响。
　　第二,本研究共选择五种肠神经标志物,包括:1.人蛋白基因产物9.5(ProteinGeneProduct9.5,PGP9.5);2.组织蛋白酶D(CathepsinD,CAD);3.外周蛋白(Peripherin,PR);4.S-100蛋白;5.神经元特异性烯醇化酶(Neuron-specificenolase,NSE)。运用免疫组织化学染色的方法检测它们在IND结肠的表达特点,进而深入硏究肠神经元发育不良症结肠的病理学特征,进一步提高其诊断和鉴别诊断的准确率。
　　方法:
　　167例患者,按HD、IND、HG分三组,对术前常规检查AchE组化染色的结果分为阴性(-)和阳性(+)两种进行统计;在直肠肛管测压中,分无反射波、有正常反射波、“W”或“U”形波三种进行统计;IND和HG手术方式分“左半结肠切除术”和“结肠次全切除术”进行统计。
　　PGP9.5、组织蛋白酶D、外周蛋白、S-100和NSE五种抗体,采用过氧化酶标记的链霉卵白素(Streptavidin/Peroxidase)免疫组织化学染色方法对28例IND结肠石蜡标本切片进行染色。
　　光学显微镜下观察神经丛大小,每丛神经节细胞形态、数量等。
　　结果:
　　对比研究发现,AchE组化染色,在IND组的多数患儿为阴性,在HG组和HD组中,阳性占多数或绝大多数,这也是IND与HG、HD非同寻常的差异。提示由于IND的肠道神经系统存在,远端直结肠肠壁并没有大量胆碱能神经增生,这也是IND缺少巨结肠样的痉挛肠段的主要原因和证据。在直肠肛管测压检查中,IND组不同于HD组,绝大多数存在肛管抑制反射波,和正常比不同的是存在的反射波绝大多数呈“W”或“U”型;在手术方式的选择上,IND组“结肠次全切除术”比例远远大于“左半结肠切除术”;反观HG组,正好相反,“左半结肠切除术”比例远远大于“结肠次全切除术”。这和传统的先天性巨结肠的手术方式有很大的区别。
　　五种神经标志物在正常肠道神经系统染色特点:组织蛋白酶D仅在神经节细胞表达为阳性,神经丛却不表达;PGP9.5和外周蛋白在神经节细胞、肠壁肌间、黏膜下神经丛中均有表达;S-100只在黏膜下、肌内神经丛表达,神经节细胞中不表达,形成细胞状空白区;NSE在神经节细胞胞浆呈褐色的强阳性反应,环形肌内的神经纤维为棕黄色细波纹状表达,施旺细胞和周围细胞不着色,呈阴性反应。
　　肠神经元发育不良症(IND)的免疫组化染色光镜下观察分析:1神经丛:神经丛纵横径均明显大于正常。2节细胞计数:IND的节细胞明显增加,通常在6个以上,部分甚至超过10个。
　　结论
　　AchE组化染色、直肠肛管测压检查是诊断HD的重要方法,但同时对于巨结肠同源病的诊断和鉴别诊断,也具有较高的价值意义。先天性巨结肠的手术方式千变万化,巨结肠同源病的手术方式主要分两种,根据具体情况需要选择施行“结肠次全切术”或者“左半结肠切除术”,在HG组和IND组中,两者分别所占的比例也是不一样的,HG组所选手术多半为“左半结肠切除术”,IND组则多选用“结肠次全切除术”。这说明,对于IND的治疗以结肠次全切为主,HG则应该以左半切除为主。
　　免疫组织化学方法检测肠道神经系统的PGP9.5、组织蛋白酶D、外周蛋白、S-100和NSE表达有相当高的特异性结果,可以明显地显示IND中神经丛和神经节细胞等的形态特点。对IND的深入研究以及诊断和鉴别诊断具有重要价值意义。

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声明

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前言

中文摘要

英文摘要

引言

材料与方法

（一）临床病例采集和处理

（二）术后切片的免疫组化染色

（三）数据统计与分析

结果

讨论

综述

参考文献

致谢

附录：在校期间发表论文