人脑金属硫蛋白3(MT-3)原核载体的构建、表达及纯化

摘要

为探讨采用基因工程技术构建小分子人MT-3蛋白原核表达载体的可能性,以MT-3 cDNA序列为模板,采用聚合酶链式反应引入双酶切位点,定向亚克隆至phoA分泌型原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞构建重组工程菌,经0.05 mmol/L低磷培养基培养诱导重组MT-3表达,利用金属螯合柱分离纯化后,利用SDS-PAGE、West-ern blot、紫外光谱扫描及金属结合能力分析对其进行鉴定.结果成功构建了phoA-MT-3原核表达载体,重组工程菌经诱导后以可溶形式表达重组MT-3蛋白.SDS-PAGE、Western blot和紫外光谱扫描分析证实重组MT-3表达成功.金属结合能力分析结果显示目的蛋白仍具有结合金属离子的生物学功能,实现了小分子MT-3的体外分泌重组表达.本研究成功实现了小分子人MT-3蛋白的重组制备,为MT-3的规模化应用奠定基础.