人NKp30基因克隆及其真核表达载体的构建

摘要

目的 对人NKp30 (hNKp30)进行基因克隆并在大肠埃希菌中重组表达,为进一步研究NK细胞抗肿瘤作用奠定基础.方法 提取人外周静脉血单个核细胞,分离纯化外周血总RNA.用PCR 扩增hNKp30片段,克隆至质粒载体pMD18-T,对克隆的DNA片段行序列分析.用限制酶XhoI、EcoRI消化pMD18-T-hNKp30 重组质粒,分离hNKp30片段,插入真核表达载体pIRES2-EGFP 相应限制酶位点,酶谱分析鉴定重组表达载体pIRES2-EGFP-hNKp30,并转染COS-7细胞.结果 PCR扩增DNA片段与hNKp30 cDNA大小一致.重组质粒pMD18-T-hN Kp30 的DNA序列分析显示,克隆DNA 序列与文献报道hNKp30 的cDNA 序列一致.重组表达质粒pIRES2-EGFP-hNKp30转染COS-7细胞后,实现了hNKp30基因在COS-7细胞中的体外转染及瞬时表达.结论 采用重组技术成功构建了hNKp30真核表达载体,为探讨NK细胞受体的特性及其信号转导机制奠定了基础.