人胰高血糖素样肽-1类似物基因克隆及真核表达载体构建

摘要

目的 利用pIRES2-EGFP作为载体,构建人胰高血糖素样肽-1类似物基因(2×Val~2-hGLP-1)重组表达载体.方法 化学合成14个2×Val~2-hGLP-1寡核苷酸片段,退火拼接成完整的2×Val~2-hGLP-1类似物基因.退火片段克隆至pBS SK(+/-)载体中,经双酶切和测序鉴定,将目的 片段插入pIRES2-EGFP中,构建pIRES2-EGFP/2×Val~2-hGLP-1基因表达载体.重组载体经脂质体转染HEK-293A细胞后,Western blot分析目的 蛋白表达.结果 双酶切鉴定和测序分析均证实,已成功构建pIRES2-EGFP/2×Val~2-hGLP-1基因治疗载体.重组载体转染HEK-293A细胞,观察到绿色荧光蛋白表达,其转染效率达80%以上.Western blot分析,检测到目的 蛋白表达.结论 pIRES2-EGFP/2×Val~2-hGLP-1表达载体的成功构建,为Val~2-hGLP-1基因功能研究及基因治疗提供了工具.