膝骨关节炎患者软骨组织、软骨细胞中let-7a表达变化及意义

摘要

目的 观察let-7a在膝骨关节炎(KOA)患者软骨组织、软骨细胞中的表达变化,并探讨其对细胞凋亡和自噬的影响.方法 ①收集40例KOA患者及15例行下肢截肢手术患者的膝关节软骨组织并分离培养软骨细胞.采用实时荧光定量PCR法分别检测KOA软骨组织、正常软骨组织及KOA软骨细胞、正常软骨细胞let-7a mR-NA相对表达量.②取生长状态良好的KOA软骨细胞,随机分为let-7a过表达组和对照组,分别转染let-7a mimics及NC-mimics,转染48 h采用实时荧光定量PCR法检测let-7a mRNA相对表达量,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3,包括LC3Ⅱ、LC3Ⅰ)、Beclin1表达,计算Bcl-2/Bax、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ.结果 ①KOA软骨组织及正常软骨组织let-7a mRNA相对表达量分别为0.48±0.18、0.29±0.13,两者相比P均<0.01;KOA软骨细胞、正常软骨细胞let-7a mRNA相对表达量分别为1.02±0.07、0.98±0.05,两者相比P<0.01.②let-7a过表达组let-7a mRNA相对表达量高于对照组,细胞凋亡率低于对照组(P均<0.01);Bcl-2、LC3Ⅱ、Beclin1蛋白相对表达量及Bcl-2/Bax、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均高于对照组,Bax、LC3Ⅰ蛋白相对表达量均低于对照组(P均<0.05).结论 let-7a在KOA患者软骨组织、软骨细胞中的表达均降低;上调let-7a表达能够促进软骨细胞自噬并抑制其凋亡,从而发挥软骨保护作用.