二甲双胍联合顺铂对孕激素耐药子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡的影响及机制

摘要

目的 探讨二甲双胍联合顺铂对孕激素耐药子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡的影响及机制.方法将Ishikawa细胞体外培养,取对数期细胞,应用甲羟孕酮诱导建立孕激素耐药体系.取耐药成功的Ishikawa细胞,随机分为5组,二甲双胍组:加入稀释后不同浓度(终浓度为1、2.5、5、10、15 mmol/L)的二甲双胍;顺铂组:加入浓度为5、12.5、25、50、75μmol/L的顺铂;联合用药组:二甲双胍联合顺铂以各自相应的终浓度按1:200进行给药;对照组:未添加任何药物的无血清培养液处理细胞;空白组:无药物及细胞的培养液.MTT法检测各组细胞增殖抑制率及联合指数(CI),计算二甲双胍及顺铂的半数抑制浓度(IC50),根据计算的IC50,后续研究中分别用10 mmol/L二甲双胍(二甲双胍组)、60μmol/L顺铂(顺铂组)、10 mmol/L二甲双胍+60μmol/L顺铂(联合用药组)处理细胞48 h.流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法分析相关凋亡基因表达;同时,应用Western blot-ting法检测各组mTOR信号通路相关蛋白表达.结果二甲双胍在2.5～15 mmol/L、顺铂在12.5～70μmol/L浓度内孕激素耐药的Ishikawa细胞增殖受到抑制,且呈剂量依赖性效应,二者抑制作用随药物浓度的增高而逐渐增大,差异有统计学意义(P均<0.05).二甲双胍的IC50为(10.44±0.57)mmol/L、顺铂为(60.22±0.78)μmol/L.联合用药组二甲双胍终浓度为10、15 mmol/L时联合顺铂(对应终浓度为50、75μmol/L)对肿瘤细胞增殖的抑制程度高于二甲双胍组及顺铂组(P均<0.05).流式细胞仪结果显示,联合用药组的细胞凋亡率高于顺铂组、二甲双胍组,差异有统计学意义(P均<0.05);实时荧光定量PCR及Western blotting结果表明联合用药组Bcl-2相对表达产物含量最低,其p-AMPK蛋白表达较二甲双胍组、顺铂组增加,而p-mTOR含量则降低(P均<0.05).结论二甲双胍联合顺铂对孕激素耐药的子宫内膜癌细胞有协同作用,可抑制肿瘤细胞增殖,促进其凋亡;机制可能与AMPK/mTOR通路相关.