对阴道加德纳菌、白色假丝酵母菌有抑制作用的人阴道乳酸杆菌的筛选和功能

摘要

目的 从健康妇女阴道分泌物中分离并筛选出对阴道加德纳菌(Gv)或白色假丝酵母菌(Ca)具有抑菌活性的乳酸杆菌,并观察其功能.方法 采集30例健康育龄妇女的阴道分泌物,经数次增菌培养-平板分离后选出疑似乳酸杆菌菌株,采用16 S rDNA基因测序法确定菌株类型.采用双层琼脂扩散法评价其中的乳酸杆菌菌株对指示菌(10种细菌和5种假丝酵母菌)的抑菌效果,筛选出具有抑Gv/Ca活性的人阴道乳酸杆菌.采用共孵育实验定量观察筛选出的人阴道乳酸杆菌对Gv/Ca的抑菌活性,同时观察筛选出的乳酸杆菌菌株的产过氧化氢、产乳酸能力,以及自聚合/共聚合能力和生物膜形成能力.结果 30例健康女性阴道分泌物中分离出51株菌,其中23株具有乳酸杆菌特征.16 S rDNA基因测序确定其均为乳酸杆菌.双层琼脂扩散实验结果显示,共有8个菌株对Gv/Ca有抑菌作用:包括仅抑制Gv的2号菌株、仅抑制Ca的7、26和44号菌株以及对同时抑制二者的16、19、31和41号菌株.上述8个菌株即为筛选出的有抑Gv/Ca菌活性的人阴道乳酸杆菌.筛选出的8种乳酸杆菌与Gv共培养时,全部菌株均显示了抑菌活性,其中41号菌株完全抑制了Gv的生长;当用乳酸杆菌培养上清液孵育Gv时,全部菌株培养上清液均显示了明显的抑菌活性.当乳酸杆菌与Ca共培养时,全部菌株均显示了抑菌活性;当乳酸杆菌培养上清液孵育Ca时,全部菌株培养上清液均显示了抑菌活性,其中19号菌株完全抑制了Ca的生长.8个乳酸杆菌菌株pH值、乳酸生成量和过氧化氢生成量与阴性对照菌株相比,P均<0.05.其中以19号和41号菌株的产酸和产过氧化氢能力最强,达到了阳性对照菌株水平(P均>0.05).Gv的自聚合水平为45.25％,而Ca的自聚合水平则高达100％.乳酸杆菌菌株16号(92.57％)、19号(96.32％)、31号(92.16％)和41号(93.52％)均显示了明显的自聚合能力.19号、26号和41号菌株显示了与Ca较强的共聚合能力(定性均为++,定量分别为61.23％、58.72％和54.59％),其他菌株与Ca的共聚合水平为28.53％ ～44.21％.16号、19号和41号菌株显示了与Gv较强的共聚合能力(定性均为++,定量分别为82.34％、83.41％和93.56％),其他菌株与Ca的共聚合水平为41.33％ ～46.12％.筛选出的8种乳酸杆菌均能够形成生物膜,其中19号菌株最强,其次是41号菌株.结论 成功筛选出8个有抑Gv/Ca活性的人阴道乳酸杆菌菌株.8个菌株的乳酸杆菌均对Gv/Ca有抑菌作用,且有较强的产过氧化氢、乳酸和形成生物膜的能力.其中19、41号菌株具有成为新的阴道益生菌的潜力.