体外培养过程中软骨细胞凋亡与Caspase-3基因表达的关系

摘要

目的:探讨软骨细胞在体外培养过程中或药物诱导下细胞凋亡与细胞表达Caspase-3之间的关系,TNF-α和Cycloheximide (CHX)诱导凋亡的软骨细胞,检测Caspase-3基因表达及细胞凋亡,为阻断细胞凋亡寻找理想的作用靶点；为增加软骨组织工程种子细胞的产量提供理论依据和新策略；为临床耳廓成型及修复提供新的材料来源.方法:①胎儿软骨细胞常规分离培养；不同浓度TNF-α+CHX组合诱导软骨细胞凋亡.②MTT法测定细胞生长曲线；TUNEL法和DNA片段化检测细胞凋亡.③所得数据用SPSS软件包分析.结果:①经不同浓度的TNF-α+CHX诱导体外培养的软骨细胞,流式细胞术和TUNEL法检测出细胞凋亡,凋亡指数在18.4％～67.9％之间.②TUNEL法和比色法检测分别显示诱导后凋亡发生时,不同代次软骨细胞Caspase-3基因表达和蛋白表达均比对照组有显著上升.结论:体外培养软骨细胞通过诱导凋亡,观察到凋亡发生时,Caspase-3基因和蛋白表达均出现显著上升.为体外规模培养工程细胞提供了阻滞凋亡的分子靶点.